一種蘆薈多糖指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種蘆薈多糖指紋圖譜的構(gòu)建方法,具體涉及一種蘆薈多糖的GPC指 紋圖譜的構(gòu)建方法以及由此方法所得到的蘆薈多糖標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜,屬于中藥及其制品和功 能食品、化妝品原料及其制品的指紋圖譜技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 庫(kù)拉索蘆薈(Aloe barbadensis Mill或Aloe vera L.)是百合科蘆薈屬植物 [China Rural Technology Development Center, Aloe Industry Committee of China Association for Promotion of Non-Governmental Sci-Tech Enterprises. Development report of aloe industry in China. Beijing:China Labour and Social Security Publishing House,2011·],具有殺菌、消炎、抗福射[Saini D K,Saini R M. Environ Toxicol Pharmacol, 2011,(31) :427.]、抗腫瘤、抗衰老、抗內(nèi)毒素、免疫調(diào)節(jié)等多種藥 理作用[Hamman J H. Molecules, 2008,(13) :1599 ;Choi S,Chung Μ H. Semin Integr Med, 2003, 1 (1) :53 ;Lee E M, Bai H ff, Lee S K, et al. Radiat Phys Chem, 2012, (2) :33.], 已廣泛用于藥品、食品、化妝品和洗滌用品等行業(yè)[Maenthaisong R,Chaiyakunapruk N,Niruntraporn S,et al. BURNS, 2007, (33) :713 ;Dal'Belo S E,Gaspar L R,Maia Campos P Μ B G. Skin Res Technol, 2006,(12):241 ;任海毅,王巧娥,董銀卯,等.藥物評(píng)價(jià)研 究,2012, 35 (6):431 ;周偉東,中國(guó)農(nóng)村科技,2014,(8):56.]。然而,由于蘆薈活性成分復(fù) 雜,蘆薈產(chǎn)品的質(zhì)量鑒定與品質(zhì)分析一直是困擾蘆薈行業(yè)的難題,建立蘆薈產(chǎn)品的質(zhì)量控 制與科學(xué)評(píng)價(jià)方法也一直是我國(guó)蘆薈產(chǎn)業(yè)急需解決的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題[萬(wàn)金志,鐘英,黃運(yùn) 喜,等.天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2014, 26 (6) : 970.]。
[0003] 研究表明,蘆薈的多重功效來(lái)源于其中多種成分的協(xié)同作用,其中最重要的是 蘆薈苷、蘆薈大黃素等蒽醌類成分以及以乙?;事毒厶菫橹鞯亩嗵穷惓煞諿萬(wàn)金志, 徐新軍,鐘佳勝,等.今日藥學(xué),2012, 22(12) :753;陳國(guó)和,劉玉鑫,張新申,等.化學(xué) 研究與應(yīng)用,2002, 14(2) : 133.]。蘆薈蒽醌類物質(zhì)主要存在于蘆薈葉皮中,是蘆薈藥品 的活性成分,其質(zhì)量分析與評(píng)價(jià)方法已有很多報(bào)道[陳國(guó)和,劉玉鑫,張新申,等.化學(xué) 研究與應(yīng)用,2002, 14(2):133 ;Wu X F,Ding W J,Zhong J S,et al.J Pharm Biomed Anal,2013,(80) :94 ;陳金東,李蔚,李素云.色譜,2002, 20(4) :367 ;陳欣霞,張宇航,林 穎,等.天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2009, 21 (5) :817.],而蘆薈多糖主要存在于蘆薈凝膠中[陳 國(guó)和,劉玉鑫,張新申,等.化學(xué)研究與應(yīng)用,2002, 14(2) :133.],是蘆薈保健食品、普通食 品、化妝品、洗滌用品的主要活性成分[魏洋,王革輝.針織工業(yè),2012,(2):46 ;衛(wèi)生部 等6部局關(guān)于含庫(kù)拉索蘆薈凝膠食品標(biāo)識(shí)規(guī)定的公告.(2009-02-06). http: //www. moh. gov. cn/mohbgt/s9506/200902/39137. shtml:甘麗萍,劉其元,吳應(yīng)梅,等.安徽農(nóng)學(xué)通 報(bào),2009, 15 (5) : 198 ;鐘英,董銀卯,段盛林.中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào),2008, 10 (5) : 35.],因此蘆 薈多糖的分析與檢測(cè)是評(píng)價(jià)蘆薈食品、化妝品和洗滌用品等非藥用產(chǎn)品質(zhì)量的主要依據(jù)。
[0004] 目前,蘆薈多糖含量的測(cè)定方法主要有分光光度法[杜海燕,孫家躍.輕工標(biāo)準(zhǔn)與 質(zhì)量,2004,(3) :42 ;許芳萍,顧文秀,高燕,等.分析試驗(yàn)室,2007, 26 (12) :64.]、氣相色譜 法[崔莉鳳,王微·色譜,2003, 21 (1):88.]、核磁共振波譜法[Bozzi A, Perrin C, Austin S,et al. Food Chem, 2007, (103) :22.]、高效薄層色譜法[Lobo R,Prabhu K S,Shirwaikar A, et al. Fitoterapia, 2010, (81) :231.]等。分光光度法包括苯酸-硫酸法、剛果紅法[杜 海燕,孫家躍.輕工標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量,2004,(3):42.]和茜紅素法[許芳萍,顧文秀,高燕,等.分 析試驗(yàn)室,2007, 26(12) :64.],其中苯酚硫酸法的特異性、選擇性差,不能有效地區(qū)別麥芽 糖、淀粉、糊精等非蘆薈多糖成分,而這些常被用于摻雜在蘆薈制品中以替代蘆薈多糖[杜 海燕,孫家躍.輕工標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量,2004,(3):42.];剛果紅法可避免蘆薈制品的常見摻假物 環(huán)糊精和葡萄糖等的干擾,但不能排除麥芽糊精的干擾[杜海燕,孫家躍.輕工標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì) 量,2004,(3) :42.];茜紅素法[許芳萍,顧文秀,高燕,等·分析試驗(yàn)室,2007, 26(12) :64.] 可避免麥芽糊精、環(huán)糊精、淀粉、蔗糖和葡萄糖等常見蘆薈制品摻假物的干擾,但只能給出 蘆薈多糖的總量,不能提供與蘆薈多糖的活性密切相關(guān)的分子量及其分布等信息。此外,氣 相色譜法[崔莉鳳,王微.色譜,2003, 21 (1):88.]采用柱前衍生的方法將蘆薈多糖水解 為單糖,只能給出蘆薈多糖的單糖組成;核磁共振波譜法[Bozzi A, Perrin C, Austin S,et al. Food Chem,2007,(103):22.]設(shè)備昂貴,不適合大范圍推廣;高效薄層色譜法[Lobo R,Prabhu K S,Shirwaikar A,et &1.卩;11:0七6抑卩1&,2010,(81):231.]雖然能特異性的測(cè) 定乙酰化甘露聚糖的含量,但操作繁瑣,而且也不能提供與蘆薈多糖的活性密切相關(guān)的分 子量及其分布等信息。中藥指紋圖譜可全面反映中藥材或注射劑的化學(xué)成分信息,是從整 體相似性角度定性或定量評(píng)價(jià)中藥材或注射劑質(zhì)量的有效方法[國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理 總局.中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)).(2008-08-15). http: //www. sda. gov. cn/WS01/CL0237/15768. html:李強(qiáng),樸思邈,張忠亮,等.中草藥,2013, 44 (22) : 3095 ; 孫國(guó)祥,豆小文,楊蘭萍,等.色譜,2013, 31 (5): 456;游佳莉,王毓杰,張藝,等.中國(guó)中藥 雜志,2015, 40(2) : 362 ;甘秀梅,梁志遠(yuǎn),姜金仲,等.中藥材,2015, 38(2) : 275 ;王亮,張 振秋,鄧仕任,等.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2015, 21 (2) :80 ;王靜,王強(qiáng),唐軍,等.分析試驗(yàn) 室,2013, 32(3) : 68 ;張興旺,文懷秀,趙曉輝,等.分析試驗(yàn)室,2010, 29 (suppl) : 173 ;傅宇 飛,張佩佩,潘再法,等.分析試驗(yàn)室,2013, 32 (8) : 103.]。鑒于蘆薈凝膠具有和中藥相似的 整體性和模糊性,本發(fā)明專利借鑒中藥指紋圖譜的技術(shù)和方法,以庫(kù)拉索蘆薈凝膠為研究 對(duì)象,建立蘆薈凝膠多糖成分凝膠滲透色譜(GPC)指紋圖譜的技術(shù)和方法,旨在為蘆薈產(chǎn) 品的真?zhèn)舞b別和品質(zhì)評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種蘆薈多糖指紋圖譜的構(gòu)建方法,借此可將蘆薈多糖指紋 圖譜作為蘆薈食品、保健品、洗滌用品等終端產(chǎn)品的真?zhèn)舞b別和品質(zhì)評(píng)價(jià)的主要指標(biāo)之一。 本發(fā)明還同時(shí)提供了蘆薈多糖的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
[0006] 為達(dá)到上述目的本發(fā)明采用了以下技術(shù)手段:
[0007] -種蘆薈多糖指紋圖譜的構(gòu)建方法,其特征在于,從蘆薈葉中提取蘆薈多糖,將提 取的蘆薈多糖制備成GPC分析供試液,經(jīng)凝膠滲透色譜儀分離檢測(cè),獲得蘆薈多糖的指紋 圖譜。
[0008] 在本發(fā)明中,優(yōu)選的,包括如下步驟:
[0009] (1)蘆薈多糖的制備
[0010] 取庫(kù)拉索蘆薈鮮葉適量,洗凈后去皮,蘆薈凝膠清洗、切塊,用攪拌機(jī)初步破碎后 置于閃式提取器進(jìn)一步勻漿處理,得凝膠勻漿液;凝膠勻漿液減壓抽濾,收集濾液進(jìn)行濃 縮,濃縮液冷卻后加入乙醇溶液,4°C冷藏過(guò)夜,離心得沉淀;待沉淀中的乙醇揮干后,放 入-40°C冰箱冷凍,然后置于真空冷凍干燥機(jī)中凍干,凍干粉研磨,即得蘆薈多糖;
[0011] ⑵蘆薈多糖GPC分析供試液的制備
[0012] 精確稱取步驟(1)制備的蘆薈多糖適量,用NaN03溶液溶解后,在4°C冰箱放置12h 后取出,恢復(fù)至室溫后用濾膜過(guò)濾,即得蘆薈多糖GPC分析供試液;
[0013] (3)蘆薈多糖的GPC分析
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