一種測定動物組織中殘留苯并咪唑類藥物的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種測定動物組織中殘留苯并咪挫類藥物的方法。
【背景技術】
[0002] 寄生蟲病是養(yǎng)殖業(yè)中最常見的一類疾病，每年造成了巨大的經濟上損失，其中一 些寄生蟲可W傳播給人類，造成人體的感染。目前在肉產品中殘留并對人具有較大危害的 主要是苯并咪挫類驅蟲藥。人們食用苯并咪挫類藥物殘留量超標的肉品后，就會造成嚴重 的不良影響，對人體造成直接的或通過環(huán)境和食物鏈的作用間接的產生急、慢性毒性作用， 引起寄生蟲耐藥性增強，從長遠角度來看還會影響到養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和市場的正常秩序?，F(xiàn) 有的設及肉品中的該類風險因子主要包含W下幾種：奧芬達挫、芬苯達挫、阿苯達挫、甲苯 咪挫、氣苯咪挫、嚷苯咪挫、丙氧苯咪挫等。因此為了保證廣大民眾的飲食安全，非常有必要 建立起準確度高的肉品中苯并咪挫類藥物殘留的檢測方法。
[0003] 文獻"高效液相色譜法同時測定動物組織中16種苯并咪挫類藥物殘留，林海丹等， 食品科學，2011，第32卷02期，第231-236頁"公開了一種同時測定動物組織中包括阿苯咪 挫、奧芬達挫、芬苯達挫、氣苯咪挫、甲苯咪挫、嚷苯咪挫和丙氧苯咪挫等16種殘留苯并咪挫 類藥物的方法，在該方法中，用乙酸乙醋提取動物組織樣品中的殘留苯并咪挫類藥物后，由 于動物組織樣品成分復雜，需要先用正己燒脫除提取液中的類脂物，然后用MCX固相萃取柱 凈化，去除基質干擾后，再上機檢測。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術問題是克服現(xiàn)有高效液相色譜法測定動物組織中苯并咪挫 類藥物殘留時需要經過復雜的脫脂和固相萃取凈化處理的缺陷，提供了一種測定動物組織 中殘留苯并咪挫類藥物的方法，本發(fā)明樣品預處理更為簡單。
[0005] 為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供了如下的技術方案：
[0006] -種測定動物組織中殘留苯并咪挫類藥物的方法，包括如下步驟：
[0007] (1)動物組織樣品用乙酸乙醋提取，提取液蒸干；
[000引（2)將步驟（1)蒸干余下的殘渣溶解，調節(jié)溶液至酸性后，加入凈化劑聚N-乙締化 咯燒酬-二乙締苯橫酸鋼進行吸附，分離，再用堿液對凈化劑進行解吸，得到的解吸液揮干；
[0009] (3)步驟（2)揮干得到的殘渣用流動相溶解之后上高效液相色譜儀，進行色譜測 定。
[0010] 進一步，所述苯并咪挫類藥物為阿苯達挫亞諷、阿苯達挫-2-氨基諷、阿苯達挫諷、 徑基嚷苯咪挫、嚷苯達挫、奧苯達挫、2-氨基氣苯咪挫、芬苯達挫諷、奧芬達挫、甲苯咪挫、氣 苯咪挫、阿苯達挫、芬苯達挫。
[0011] 進一步，步驟(1)提取時，加入堿和抗氧化劑。
[0012] 更進一步，所述堿為氨氧化鋼或氨氧化鐘，所述抗氧化劑為二叔下基苯酪。
[0013] 更進一步，所述堿的濃度為l-5g/L。
[0014] 進一步，步驟(1)蒸干余下的殘渣用乙臘溶解。
[0015] 進一步，步驟(2)調節(jié)溶液至酸性后，氨離子濃度為1-1.5mol/L。
[0016] 進一步，步驟(2)所述堿液為氨化乙臘。
[0017]進一步，所述氨化乙臘中氨的濃度化-2mol/L。
[0018] 進一步，步驟(3)的色譜條件:Ci8柱，流動相為乙臘-0.025mol/L乙酸錠溶液，梯度 洗脫，其中流動相中乙臘的體積百分比隨時間的變化如下：
[0019] 0~15min，由20%線性變化至25%;
[0020] 15~28min，由25%線性變化至30%;
[0021] 28~38min，由30 %線性變化至60 %;
[0022] 38111111后，20%。
[0023] 本發(fā)明方法在測定動物組織中殘留的苯并咪挫類藥物時具有良好的準確度、靈敏 度和重現(xiàn)性。與現(xiàn)有高效液相色譜法測定動物組織中殘留的苯并咪挫類藥物樣品前處理需 要經過復雜的脫脂和固相萃取柱處理相比，本發(fā)明采用聚N-乙締化咯燒酬-二乙締苯橫酸 鋼作為苯并咪挫類藥物的凈化劑，使凈化操作更為簡單便捷。
【附圖說明】
[0024] 附圖用來提供對本發(fā)明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與本發(fā)明的實 施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構成對本發(fā)明的限制。在附圖中：
[00巧]圖1是13種苯并咪挫類化合物的色譜圖。
【具體實施方式】
[0026] W下結合附圖對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行說明，應當理解，此處所描述的優(yōu)選實 施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[00打]一、測定方法 [002引1、樣品前處理過程
[0029] 準確稱取5. Og的肉品樣品，加入20血的乙酸乙醋，0.15mL 50wt %氨氧化鋼溶液和 1血Iwt %二叔下基苯酪溶液。超聲提取lOmin之后，W1000化/min的轉速離屯、5min，用一次 性滴管吸取上清液到茄型瓶中，提取兩次，合并提取液，旋轉蒸干。
[0030] 上述蒸干后余下的殘渣用1.5mL乙臘溶解，滿旋5min之后加入4.5mL 1.5mol/L鹽 酸溶液，滿旋均勻，震蕩5min，將上述溶液轉移到15ml離屯、管中，加入0.3g凈化劑DVB-NVP- S化Na，震蕩lOmin，完成之后W5000r/min的轉速離屯、5min，傾倒出上層液，再向離屯、管中加 入lOmL 10%的氨化乙臘，滿旋均勻之后，震蕩10min，W5000r/min的轉速離屯、lOmin，上清 液轉移到另一離屯、管中，用氮氣吹干。
[0031] 上清液吹干后所得的殘渣用0.5mL乙臘溶解，超聲5min，再加1.5mL 0.025mol/L乙 酸錠溶液，混合均勻，過0.22um復合濾膜，供高效液相色譜儀測定。
[0032] 氨化乙臘的配制:將市售25-28wt%濃氨水和乙臘按照體積比為10:90混合得到。
[0033] 2、色譜條件
[0034] Waters高效液相色譜儀帶有二級陣列管檢測器，采用waters公司Xbridge C18 (5um*4.6um*250um)色譜分離柱，流動相為乙臘(A)-0.025mol/L的乙酸錠溶液(B)，采用梯 度洗脫，流速為1.0ml/min，柱溫為30°C，進樣量為10化L，梯度洗脫程序如下：
[00巧]0~15min，流動相中乙臘(A)的體積百分比由20%線性變化至25% ;
[0036] 15~28min，流動相中乙臘(A)的體積百分比由25%線性變化至30% ;
[0037] 28~38min，流動相中乙臘(A)的體積百分比由30%線性變化至60% ;
[0038] 38min后，流動相中乙臘(A)的體積百分比為20%。
[0039] 使用W上色譜條件，所有的13種苯并咪挫類化合物（阿苯達挫亞諷、阿苯達挫-2- 氨基諷、阿苯達挫諷、徑基嚷苯咪挫、嚷苯達挫、奧苯達挫、2-氨基氣苯咪挫、芬苯達挫諷、奧 芬達挫、甲苯咪挫、氣苯咪挫、阿苯達挫、芬苯達挫)都能夠很好的分離，其他雜質峰較少，能 夠實現(xiàn)定性和定量判斷，色譜圖見圖1。
[0040] 采用單因實驗，在其他條件不變的情況下，改變凈化劑的用量，探究加標回收率和 凈化劑用量之間的關系，結果如表1所示：
[0041] 表1凈化劑的用量對目標苯并咪挫化合物凈化效果的影響
[0042]
[0043] 當凈化劑用量在0.4g、0.5g和0.6g時，和0.3g的用量相比之下，回收率沒有明顯的 變化，從經濟的角度出發(fā)，選擇每5g樣品加入凈化劑0.3g。
[0044] 采用單因實驗，在其他條件不變的情況下，改變氨化乙臘的用量，探究加標回收率 和氨化乙臘用量之間的關系，如表2所示。
[0045] 表2氨化乙臘對回收率的影響
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[0047] 氨化乙臘用量在14血、17mL和20mL時，和llmL的用量相比之下，回收率沒有明顯的 變化，從經濟的