一種能使吖啶酯抗原抗體結(jié)合物穩(wěn)定的稀釋液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種能使叮晚醋抗原抗體結(jié)合物穩(wěn)定的 稀釋液及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 化學(xué)發(fā)光免疫分析法是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析法，叮晚醋 是較為理想的發(fā)光底物，在堿性條件下，叮晚醋分子受到過氧化氨攻擊可生成二氧乙燒，二 氧乙燒不穩(wěn)定而分解為C〇2和電子激發(fā)態(tài)的Ν-甲基叮晚酬，當(dāng)其回到基態(tài)時發(fā)出波長為 430nm的光。
[0003] 叮晚醋標(biāo)記物在化學(xué)結(jié)構(gòu)上有產(chǎn)生發(fā)光的特殊基團(tuán)，在發(fā)光免疫分析過程中直接 參與發(fā)光反應(yīng)。通常運類物質(zhì)沒有本底發(fā)光，在反應(yīng)中能用于檢測低濃度或微量濃度的樣 品，是一類發(fā)光效率很高的發(fā)光劑。叮晚醋ι、π分子和叮晚酷胺m均可與抗體(或抗原）結(jié) 合，生成具有化學(xué)發(fā)光活性強、免疫反應(yīng)特異性高的標(biāo)記抗體(或抗原）。
[0004] 從目前的技術(shù)水平來看，叮晚醋在一般的緩沖液中不穩(wěn)定、易水解，結(jié)合物稀釋至 工作濃度時，由于結(jié)合物在稀釋液中濃度的降低所引起的試劑的穩(wěn)定性下降，從而導(dǎo)致試 劑的保存期縮短。從體外診斷試劑行業(yè)市場來看，叮晚醋抗原抗體結(jié)合物的穩(wěn)定性好壞和 使用效期長短，也會直接影響試劑盒整體的性能指標(biāo)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種能使叮晚醋抗原抗體結(jié)合物穩(wěn) 定的稀釋液，該稀釋液克服了叮晚醋在緩沖液不穩(wěn)定、易水解的缺點，對叮晚醋抗原抗體結(jié) 合物起到保護(hù)作用，提高了叮晚醋抗原抗體結(jié)合物的穩(wěn)定性，同時延長了使用的效期，還能 充分利用到體外診斷試劑盒中。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種能使叮晚醋抗原抗體結(jié)合物穩(wěn)定的稀釋液的制 備方法。
[0007] 實現(xiàn)本發(fā)明的目的可W通過采取如下技術(shù)方案達(dá)到：
[000引一種能使叮晚醋抗原抗體結(jié)合物穩(wěn)定的稀釋液，其是由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計的組分 制備而成： 碳水化合物 0.1-2% 多無醇 1-說％ 氨基酸. 0.1-1% 蛋白穩(wěn)定劑 0.01-2.5%
[0009] 整合劑 0.001-0.1% 表面活性劑 0.01-0.5% 際腐劑 0.01-0.1% 添加劑 0.05-1%: 緩沖液 余量。
[0010] 優(yōu)選地，所述碳水化合物由薦糖和海藻糖組成，所述薦糖和海藻糖的重量比為（1- 3):1。
[0011] 優(yōu)選地，所述多元醇為山梨醇、肌醇、異丙醇或甘油其中的一種或兩種W上的混合 物;所述氨基酸為絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸或賴氨酸其中的一種或兩種W上的混合物。
[0012] 優(yōu)選地，所述蛋白穩(wěn)定劑為牛血清白蛋白（BSA)、脫脂奶粉、酪蛋白、小牛血清、牛 IgG或鼠 IgG其中的一種或兩種W上的混合物。
[0013] 優(yōu)選地，所述蛋白穩(wěn)定劑選自質(zhì)量百分比為0.1-2.5%的BSA、0.1-1.5%的酪蛋白 或0.01 -0.1 %的牛IgG中的一種或兩種W上的混合物。
[0014] 優(yōu)選地，所述馨合劑為抓TA或DTPA其中的一種或兩種的混合物;所述表面活性劑 為Tween-20、Tween-40、乙基苯基聚乙二醇(NP-40)、Triton X-100或十二烷基硫酸鋼其中 的一種或兩種W上的混合物;所述防腐劑為硫柳隸、Proclin 300、疊氮鋼或洗必泰其中的 一種或兩種W上的混合物。
[0015] 優(yōu)選地，所述添加劑選自質(zhì)量百分比為0.1-1%的聚乙二醇6000。666000)、0.05- 0.5 %的明膠、0.9 %的氯化鋼其中的一種或兩種W上的混合物。
[0016] 優(yōu)選地，所述緩沖液選自濃度為0.01-0.2mol/L的巧樣酸鹽緩沖液、2-(N-嗎啡嘟） 乙橫酸緩沖液(MES緩沖液）、化is-HCl緩沖液或憐酸鹽緩沖液其中的一種。
[0017] 優(yōu)選地，所述緩沖液為0.05-0.2mol/L巧樣酸鹽緩沖液或0.01-0.1mol/L MES緩沖 液。
[0018] -種能使叮晚醋抗原抗體結(jié)合物穩(wěn)定的稀釋液的制備方法，其具體步驟如下：
[0019] 1)按配方量的碳水化各物、多元醇、氨基酸、蛋白穩(wěn)定劑、馨合劑、表面活性劑、防 腐劑和添加劑加入緩沖液中，攬拌至完全溶解，得到混合液；
[0020] 2)將步驟1)得到的混合液攬拌混勻，加入HC1或化0H調(diào)節(jié)抑值為6-7,即得到稀釋 液。
[0021] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0022] 1、本發(fā)明的稀釋液能夠使叮晚醋抗原抗體結(jié)合物保持穩(wěn)定、不易水解，延長了試 劑的保存期；
[0023] 2、本發(fā)明的稀釋液能夠保持叮晚醋抗原抗體結(jié)合物的穩(wěn)定性W及使用效期，解決 了試劑盒使用效期短的問題，保證了試劑盒整體的性能指標(biāo)。
【具體實施方式】
[0024] -種能使叮晚醋抗原抗體結(jié)合物穩(wěn)定的稀釋液，其是由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計的組分 制備而成： 碳水化合物 0.1-2% 多元醇 1-10% 氨基酸 0.1-1% 蛋白穩(wěn)定劑 化則-2.5%
[0025] 整合劑 0.001-0.1% 表面活性劑 0.01-0.5% 防腐劑 0.01-0.1% 添加刺 0.05-1%: 緩沖液 余量。
[0026] 其中，碳水化合物：由薦糖和海藻糖組成，薦糖和海藻糖的重量比為（1-3):1,優(yōu)選 為2:1;
[0027] 多元醇:選用山梨醇、肌醇、異丙醇或甘油其中的一種或兩種W上的混合物，優(yōu)選 為甘油；
[0028] 氨基酸:選用絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸或賴氨酸其中的一種或兩種W上的混合物， 優(yōu)選為甘氨酸；
[0029] 蛋白穩(wěn)定劑:選用BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、小牛血清、牛IgG或鼠 IgG其中的一種或 兩種W上的混合物，優(yōu)選為質(zhì)量百分含量為0.1-2.5%BSA、0.1-1.5%酪蛋白或0.01-0.1 % 牛IgG中的一種或兩種W上的混合物；
[0030] 馨合劑:選用邸TA或DTPA其中的一種或兩種的混合物，優(yōu)選為DTPA;
[0031] 表面活性劑:選用Tween-20、Tween-40、NP-40、TritonX-100或十二烷基硫酸鋼其 中的一種或兩種W上的混合物，優(yōu)選為質(zhì)量百分含量為0.01~0.5%的Tween-20或化iton X-100中的一種或兩種的混合物；
[0032] 防腐劑:選用硫柳隸、Proclin 300、疊氮鋼或洗必泰其中的一種或兩種W上的混 合物；
[0033] 添加劑:選自質(zhì)量百分比為0.1-1 %的陽G6000、0.05-0.5%的明膠、0.9%的氯化 鋼其中的一種或兩種W上的混合物，優(yōu)選為質(zhì)量百分含量為0.05-0.5%PEG6000和0.9%氯 化鋼；
[0034] 緩沖液:選自濃度為0.01-0.2mol/L的巧樣酸鹽緩沖液、MES緩沖液、Tris-HCl緩沖 液或憐酸鹽緩沖液其中的一種，優(yōu)選為0.05-0.2mol/L的巧樣酸鹽緩沖液或0.01-0.1mol/L 的MES緩沖液。
[0035] 稀釋液的配制方法如下：
[0036] 1)將上述原料混合，攬拌至完全溶解，得到混合液；
[0037] 2)將步驟1)得到的混合液攬拌混勻，加入肥1或化0H調(diào)節(jié)抑值為6.4± 0.1，即得到 稀釋液。
[003引實施例1:
[0039] -種能使叮晚醋抗原抗體結(jié)合物穩(wěn)定的稀釋液，其是由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計的組分 制備而成： 篇糖 0 2% 海藻糖 0 1% 甘油 1% 甘氣釀 0.1% BSA 0.1%
[0040] DTPA 0 002% Tween-20 0 01% 疊氮尉] 0.05% PEG6000 0.05% 氯化銅 0.9% 梓橡酸鹽緩沖液 余量。
[0041 ]稀釋液的配制方法如下：
[0042] 1)按配方量的薦糖、海藻糖、甘油、甘氨酸、854、0了?4、1^6611-20、疊氮鋼、？666000 和氯化鋼加入0. 〇5mol/L巧樣酸鹽緩沖液中，攬拌至完全溶解，得到混合液；
[0043] 2)將步驟1)得到的混合液攬拌混勻，加入化0的周節(jié)抑值為6.4±0.1，即得到稀釋 液。
[0044] 用實施例1配制的稀釋液對下面結(jié)合物進(jìn)行稀釋，結(jié)合物分別是日丫晚醋-FSH抗體 和叮晚醋-E2抗原，稀釋至工作濃度，得到日丫晚醋-FSH抗體稀釋液（1)和日丫晚醋-E2抗原稀釋 液（1)。兩種稀釋后的結(jié)合物各分出13瓶，每瓶大概1ml。其中3瓶放置37°C烘箱進(jìn)行加速實 驗，另外5瓶放置2-8 °C冰箱保存，還有5瓶放置室溫保存。
[0045] 實施例2:
[0046] -種能使叮晚醋抗原抗體結(jié)合物穩(wěn)定的稀釋液，其是由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計的組分 制備而成： 廉糖 2% 海藻糖 1% 甘凍 10% 甘氨酸 1% BSA 25%
[0047] DTPA 0 01% Tween-20 0 05% 疊氮擁 0.憐 PEG6000 0.5% 氯化納 0.少知
[004引梓橡酸鹽緩沖浪 余量。
[0049]稀釋液的配制方法如下：
[00加]1)按配方量的薦糖、海藻糖、甘油、甘氨酸、854、0了?4、1^6611-20、疊氮鋼、？666000 和氯化鋼加入0.2mol/L巧樣酸鹽緩沖液中，攬拌至