一種氟唑菌苯胺殘留量的gc-ei-ms快速測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種氣挫菌苯胺殘留量的GC-EI-MS快速測定方法，更具體地說是采用 氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性定量測定豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動物肌 肉及制品等脂肪含量高的動物源性食品中殘留的氣挫菌苯胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量 的測定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氣挫菌苯胺是由己斯夫公司開發(fā)的班巧酸脫氨酶抑制劑類殺菌劑，通用名： penflufen;試驗代號:BYF14182;化學(xué)名稱:N-[2-(l，3-二甲基下基)苯基]-5-氣-1,3-二甲 基-IH-化挫-4-甲酯胺；外觀:灰白色粉末狀固體;烙點：11 TC ;沸點：沸點前分解;分解溫 度:320°C ;蒸氣壓：1.2 X l〇-6pa(25°C);分配系數(shù):Kow Io評=3.3(20°C，PH=7);亨利常數(shù)： 1.05 X 1 〇-中曰? m3 ? mo 1 -1 (25°C)。溶解度:在水中的溶解度為10.9mg/L(20°C);在正己燒中 的溶解度為1.6g/L，甲苯中為62g/L，丙酬中為139g/L，甲醇中為126g/L，乙酸乙醋中為96g/ 1，二甲亞諷中為162邑/1(^上均為20°(：);〔45登錄號：494793-67-8。相對分子質(zhì)量317.41; 分子式C18H24FN3O,化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0003] 氣挫菌苯胺是拜耳公司開發(fā)的又一個化挫酷胺類殺菌劑，于2006年申請專利，主 要用于種子處理，對多種植物病原真菌具有良好活性。該殺菌劑為班巧酸脫氨酶(SDH)抑制 劑，主要作用于呼吸鏈電子傳遞復(fù)合體n，阻斷能量代謝。經(jīng)過處理后的種子在萌發(fā)過程中 可W吸收氣挫菌苯胺，并通過木質(zhì)部傳導(dǎo)到植物體的其他部位，從而起到保護(hù)作物的作用。 氣挫菌苯胺是一個種子處理殺菌劑，用于馬鈴馨、玉米、水稻、棉花、小麥、大麥、首猜、蔬菜、 豆類W及油菜等種子，可W防治種傳、±傳的擔(dān)子菌和子囊菌病害，主要有絲核菌 (化izoctonia spp.)和黑粉菌素化Stilago spp.)等引起的馬鈴馨黑捷病、小麥紋枯病、水 稻紋枯病、油菜菌核病、小麥散黑穗病、小麥腥黑穗病、玉米小斑病等病害。可與丙硫菌挫、 甲霜靈、嚷蟲胺、朽菌醋等復(fù)配，不僅可W防治病蟲害，還可W延緩抗性產(chǎn)生與發(fā)展。氣挫菌 苯胺于2011年在英國獲得首個全球登記，2012年又在美國和加拿大取得其登記批準(zhǔn)，在澳 大利亞及很多國家獲得登記，具有很廣闊的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著氣挫菌苯胺的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的美國等國家制定 了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(M化），2012年5月14 日，美國新增對農(nóng)藥戊苯化菌胺(Penflufen)的殘留限量要求，殘留限量要求規(guī)定如下：
歐盟、日本等國家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒有在該國家登記，沒有制定相應(yīng)的殘留限量 標(biāo)準(zhǔn)時，出口至其國家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動物源性食品中殘留限量均實行 O. Olmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對氣挫菌苯胺殘留量測定方法的研究較少，報道的檢測方法主要為蔬菜 和水果中氣挫菌苯胺殘留檢測方法，運些檢測方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測 定蔬菜和水果中氣挫菌苯胺殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MS測定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點，但由于其價格較昂貴，很多檢測機構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時，需使用不同的流動 相或色譜柱，運樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費比較長的時間對系統(tǒng)進(jìn)行平衡，運一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。配備電子轟擊電離源的氣相色譜質(zhì)譜(GC-EI-MS)分析食 品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有很大優(yōu)勢，由于電子轟擊電離源質(zhì)譜為通用性檢測器，可實現(xiàn)幾 百種農(nóng)藥的多殘留分析，可同時定性和定量，價格適中，因此現(xiàn)各種檢測機構(gòu)和企業(yè)均配備 氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜儀(GC-EI-MS)對食品農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，但迄 今為止未見食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌苯胺殘留量的GC-EI-MS檢測方法的報道。另外，眾所周知， 如E化邸S前處理技術(shù)已成為農(nóng)藥殘留分析中應(yīng)用最廣的樣品前處理方法，但Q證化ERS方法 主要適用于低脂肪含量的高含水基質(zhì)，如大部分的水果蔬菜，在面對高脂肪含量基質(zhì)時能 力有限，一般需要增加正己燒除脂、冷凍樣品提取液去脂等步驟，但效果有限。近年來有些 公司推出了增強型脂質(zhì)去除專利產(chǎn)品-Enhanced Matrix Removal ,EMR-lipid，主要用于去 除具有直鏈控類結(jié)構(gòu)的脂類干擾物，包括游離脂肪酸、膽固醇、甘油=醋、憐脂等。該產(chǎn)品已 被制成基質(zhì)固相分散萃取劑，經(jīng)水活化后可直接通過分散固相萃取流程對提取液中的脂類 雜質(zhì)進(jìn)行去除，本發(fā)明應(yīng)用該前處理方法凈化動物源性食品時發(fā)現(xiàn)，該方法簡單高效、對脂 類物質(zhì)去除效果好，建立EMR基質(zhì)分散凈化、氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定 性和定量分析動物源性食品中氣挫菌苯胺殘留量的檢測方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種氣挫菌苯胺殘留量的GC-EI-MS快速測定方法，主要用于 測定動物源性食品等脂肪含量高的食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌苯胺殘留量。
[0007] 為實現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種氣挫菌苯胺殘留量的GC-EI-MS快速測定方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱取混勻樣品于具塞離屯、管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙臘溶液均質(zhì)提取，然后 加入氯化鋼和無水硫酸儀，劇烈滿旋Imin后離屯、。
[0009] 凈化 將增強型脂質(zhì)去除產(chǎn)品EMR用水活化，移取樣品提取液于活化好的EMR凈化管中，滿旋 Imin后，700化/min離屯、5min，轉(zhuǎn)移全部上清液至裝有無水硫酸儀和氯化鋼的離屯、管中進(jìn)行 鹽析，滿旋離屯、后，移取一定體積的上清液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混 合溶劑溶解定容，過膜后，待氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)檢測。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含氣挫菌苯胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 殘渣，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，滿旋混勻，配制成至少3個濃度的氣挫菌苯胺系列標(biāo)準(zhǔn)工 作液。
[0011] (4)測定和結(jié)果計算 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-EI-MS測定，W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化 后的樣品液注入GC-EI-MS進(jìn)行測定，測得樣品液中氣挫菌苯胺的色譜峰面積，代入基質(zhì)標(biāo) 準(zhǔn)工作曲線，得到樣品液中氣挫菌苯胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計算得到 樣品中氣挫菌苯胺殘留量;若上機溶液中氣挫菌苯胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容 溶劑將上機溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為動物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持IOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0014] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式：電子轟擊 電離，即EI模式，能量70eV;掃描方式:選擇離子監(jiān)測（SIM)模式，監(jiān)測的離子為：141、274、 317。
[0015] 步驟(4)中測定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運種農(nóng)藥;若 上述兩個條件不能同時滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0016] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0017] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-EI-MS應(yīng)用于糧谷、動物源性食品中氣挫菌苯 胺定性確證和定量檢測，平均回收率為81.2%~91.0%，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.8% ~7.8%，檢出限低于3.8Uig/kg，具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點。 能滿足美國、歐盟、日本等國家對相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全 及對外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[001引圖巧添加在空白豬肉基質(zhì)中的氣挫菌苯胺的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0019] 圖2為不含氣挫菌苯胺的豬肉空白樣品的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0020] 圖3為W不含氣挫菌苯胺的豬肉空白樣品為基質(zhì)配制的氣挫菌苯胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線。
【具體實施方式】
[0021] 現(xiàn)W W下實施實例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0022] 實施例中使用的儀器與試劑 TlSBasic均質(zhì)器（IKA，Ge