檢測免疫球蛋白e含量的試劑盒、方法及用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于檢測免疫球蛋白E含量的技術領域，具體涉及一種檢測免疫球蛋白E含 量的試劑盒、方法及用途。
【背景技術】
[0002] 免疫球蛋白E(Immunoglobulin E，IgE)主要由呼吸道、消化道黏膜固有層淋巴組 織中的B細胞合成，為過敏反應的介導因素。在血清中含量極微，僅占血清免疫球蛋白總量 的0.002%，但它卻是引起過敏反應的主要抗體。
[0003] IgE為親細胞型抗體，正常人血清含量極低，為10~350U/ml。過敏患者及寄生蟲患 者血清IgE含量顯著高于正常人。自1966年日本學者Ishizaka發(fā)現(xiàn)IgE以來，開啟了過敏性 疾病研究的新時代。總IgE的體外定量檢測已在臨床廣泛應用，它已成為判定機體對過敏原 的易感性與鑒別診斷寄生蟲感染性疾病免疫功能障礙相關性疾病的評估指標。
[0004] 目前檢測IgE的方法有放射免疫測定法(IRST)、酶聯(lián)免疫測定法(ELISA)以及間接 血凝試驗法。放射免疫測定法（IRST)和酶聯(lián)免疫法測定過程較為繁瑣，易受污染，耗時長， 靈敏度差，自動化程度不高，需要配備多種專門設備，一定程度上增加了成本。血清中總IgE 的含量較低，特別是新生兒臍帶血中總IgE含量極低，必須用靈敏的方法才能正確檢測。建 立一個高度敏感又具特異性的檢測系統(tǒng)是目前亟需解決的問題。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明實施例的目的在于克服現(xiàn)有技術的上述不足，提供一種檢測免疫球蛋白E 含量的試劑盒，可以簡潔快速地檢測樣本中免疫球蛋白E的含量，具有較高的準確度和很好 的特異性。
[0006] 本發(fā)明實施例的另一目的在于克服現(xiàn)有技術的上述不足，提供一種上述的檢測免 疫球蛋白E含量的試劑盒的在檢測免疫球蛋白E含量中的用途，可用于簡潔快速地檢測樣本 中免疫球蛋白E的含量，具有較高的準確度和很好的特異性。
[0007] 本發(fā)明實施例的再一目的在于克服現(xiàn)有技術的上述不足，提供一種采用上述的檢 測免疫球蛋白E含量的試劑盒檢測免疫球蛋白E含量的方法，可以簡潔快速地檢測樣本中免 疫球蛋白E的含量，具有較高的準確度和很好的特異性。
[0008] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明實施例的技術方案如下：
[0009] -種檢測免疫球蛋白E含量的試劑盒，包括:試劑R1、試劑R2和免疫球蛋白E校準 品；所述試劑R1包括:第一緩沖液10~500mmol/L、第一電解質5~50g/L、表面活性劑0.5~ 50g/L、第一穩(wěn)定劑0.5~10g/L、高分子促進劑1~100g/L和第一防腐劑1~10g/L;所述試劑 R2包括:第二緩沖液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白E抗體包被膠乳顆粒5~50%w/v、第二 電解質5~50g/L、第二穩(wěn)定劑0.5~10g/L和第二防腐劑1~10g/L;所述免疫球蛋白E校準品 包括:第三緩沖液10~500mmol/L、第三穩(wěn)定劑5~50g/L、第三防腐劑1~10g/L、抗氧化劑 0.01~10g/L和抗人免疫球蛋白E抗原。
[0010] 進一步，所述抗人免疫球蛋白E抗體包被膠乳顆粒的制備過程如下:在交聯(lián)緩沖液 中，通過化學交聯(lián)劑將抗人免疫球蛋白E多克隆抗體包被到膠乳顆粒的表面。
[0011] 進一步:所述交聯(lián)緩沖液選自不含氨基的緩沖液、2-(N-嗎啡啉）乙磺酸MES緩沖 液、3-嗎啉-2-羥基丙磺酸M0PS0緩沖液、3-( N-嗎啉)丙磺酸MOPS緩沖液、4-羥乙基哌嗪乙磺 酸HEPES緩沖液或者磷酸緩沖液，所述交聯(lián)緩沖液的pH值為6.0~8.0;所述化學交聯(lián)劑選自 碳化亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基硫代琥珀酰亞胺、酰肼和異氰酸酯中的一種或幾種； 所述抗人免疫球蛋白E多克隆抗體選自鼠抗人、雞抗人、鴨抗人、鵝抗人、兔抗人、羊抗人或 ?？谷嗣庖咔虻鞍譋抗體;所述膠乳顆粒為聚苯乙烯膠乳顆粒。
[0012] 進一步：所述膠乳顆粒的濃度為0.5~5mg/mL，所述膠乳顆粒的直徑為100~ 300nm〇
[0013] 進一步:所述膠乳顆粒的表面連有功能團，所述功能團選自羧基、氨基、羥基、酰肼 或氯甲基。
[0014] 進一步:所述試劑R1的pH為6~9,所述試劑R2的pH為6~9。
[0015] 進一步:所述第一緩沖液、所述第二緩沖液和所述第三緩沖液均選自醋酸鹽緩沖 液、氯化銨緩沖液、磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷TRIS緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液、 甘氨酸緩沖液、3-(N-嗎啉）丙磺酸MOPS緩沖液、3-(環(huán)己胺）-2_羥基-1-丙磺酸CAPS0緩沖 液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES緩沖液中的一種或幾種；和/或，所述第一穩(wěn)定劑、所述第二 穩(wěn)定劑和所述第三穩(wěn)定劑均選自亞氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、乙二胺四乙酸 二鈉、二乙烯三胺五乙酸鈉、1，2_環(huán)己二醇縮水甘油、甘露糖、葡萄糖、殼聚糖、山梨醇和牛 血清蛋白中的一種或幾種;和/或，所述第一防腐劑、所述第二防腐劑和所述第三防腐劑均 選自疊氮鈉、苯酚、對羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸鈉中的一種或幾 種;和/或，所述第一電解質和所述第二電解質均選自氯化鈉、硫酸鎂、氯化鎂和氯化鉀中的 一種或幾種；和/或，所述表面活性劑選自Triton系列表面活性劑、Tween系列表面活性劑、 聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一種或幾種；和/或， 所述高分子促進劑選自脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸鈉、乙二醇聚氧乙烯 醚、羥丙基甲基纖維素和羥甲基纖維素鈉中的一種或幾種;和/或，所述抗氧化劑選自丁基 羥基茴香醚、沒食子酸丙酯、二丁基羥基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二 月桂酯、特丁基對苯二酚和維生素系列中的一種或幾種。
[0016] 進一步:所述第一緩沖液和所述第二緩沖液的成分相同。
[0017] -種如上所述的檢測免疫球蛋白E含量的試劑盒的在檢測免疫球蛋白E含量中的 用途。
[0018] 以及，一種采用如上所述的檢測免疫球蛋白E含量的試劑盒檢測免疫球蛋白E含量 的方法，包括:按待測樣品和所述試劑R1的體積比為1~10:250,向所述待測樣品中加入所 述試劑R1，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度0D1;按所述試劑R2與所述試 劑R1體積比為1:1~7,向所述第一混合液中加入所述試劑R2,得到第二混合液，并得到所述 第二混合液的吸光度0D2;使用所述免疫球蛋白E校準品得到標準曲線，根據(jù)所述吸光度0D1 和所述吸光度0D2在所述標準曲線上得到所述待測樣品中免疫球蛋白E的含量。
[0019] 本發(fā)明實施例的有益效果如下：
[0020] 1、本發(fā)明實施例的檢測免疫球蛋白E含量的試劑盒，使用簡便快速，可簡潔快速地 檢測樣本中免疫球蛋白E的含量。
[0021 ] 2、本發(fā)明實施例的檢測免疫球蛋白E含量的試劑盒，與進口對比試劑實驗表明，本 發(fā)明的試劑盒中的試劑具有較高的準確度和很好的特異性，能夠滿足臨床快速高通量檢測 樣本的要求，檢測效率明顯提尚。
[0022] 3、本發(fā)明實施例的檢測免疫球蛋白E含量的試劑盒，使用了經(jīng)過篩選后的最優(yōu)化 的試劑組合，使得試劑的穩(wěn)定性大大提高，在2~8°C的環(huán)境下，可以穩(wěn)定存放一年以上，因 此在臨床應用上具有廣闊的前景。
[0023] 4、本發(fā)明實施例的檢測免疫球蛋白E含量的試劑盒，還具有靈敏度高，可自動化檢 測等特點。
[0024] 5、本發(fā)明實施例的檢測免疫球蛋白E含量的試劑盒使其具有檢測免疫球蛋白E含 量的用途。
[0025] 6、本發(fā)明實施例的檢測免疫球蛋白E含量的試劑盒檢測免疫球蛋白E含量的方法， 簡潔快速地檢測樣本中免疫球蛋白E的含量，檢測效率較高，在臨床應用上具有廣闊的前 景。
【附圖說明】
[0026] 圖1是本發(fā)明實施例的檢測免疫球蛋白E含量的方法的流程圖；
[0027] 圖2是本發(fā)明的實施例1的免疫球蛋白E含量的檢測方法的流程示意圖；
[0028] 圖3是本發(fā)明的實施例1的檢測免疫球蛋白E含量的標準曲線；
[0029] 圖4是本發(fā)明的實施例5的檢測免疫球蛋白E試劑盒與國外對比試劑盒的比較結果 示意圖。
【具體實施方式】
[0030] 為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結合附圖和實施例，對 本發(fā)明