一種快速定量檢測(cè)st2的免疫熒光試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于臨床醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，具體涉及一種用于定量檢測(cè)ST2的免疫熒光試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]ST2 (基質(zhì)裂解素)基因是1989年由Tominaga等首先在BALB/c_3T3細(xì)胞系中得到的，是I L-1 (白細(xì)胞介素I)受體家族成員之一，該基因表達(dá)兩種蛋白產(chǎn)物:一種帶有跨膜結(jié)構(gòu)，稱為跨模型ST2 (ST2L)，一種可以分泌到細(xì)胞外，稱為分泌型ST2 ( sST2 )。研究發(fā)現(xiàn)ST2可由心臟成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞表達(dá)，是生物機(jī)械應(yīng)力誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種心肌蛋白。ST2基因表達(dá)于肥大細(xì)胞激活的輔助性T細(xì)胞2 (Th2)巨噬細(xì)胞和心肌細(xì)胞。人的ST2基因約40kb，位于人類染色體2ql2，可編碼一種可溶性蛋白(sST2)和一種跨膜形式蛋白(ST2L)，兩者的轉(zhuǎn)錄分別受到不同的啟動(dòng)子調(diào)控。
[0003]研究表明sST2是IL-33的誘騙受體，它可以與IL-33結(jié)合，從而阻斷IL-33與ST2L結(jié)合，繼而削弱IL-33/ST2L信號(hào)通路的心血管保護(hù)作用在心肌受到過(guò)度牽拉造成損傷的過(guò)程中，大量sST2生成使心肌缺乏足夠的IL-33的保護(hù)，從而加速心肌重構(gòu)和心室功能障礙，最終導(dǎo)致死亡風(fēng)險(xiǎn)增高。IL-33是IL-1家族成員，可以與靶細(xì)胞上的膜受體結(jié)合后介導(dǎo)下游信號(hào)通路，或者被運(yùn)輸?shù)桨屑?xì)胞的細(xì)胞核作為DNA結(jié)合因子行使功能。研究表明，機(jī)械應(yīng)力可刺激心臟成纖維細(xì)胞產(chǎn)生IL-33，與其受體復(fù)合物(由ST2L和IL-1RAcP組成)結(jié)合后，將活化信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)過(guò)下游的IL-1相關(guān)蛋白激酶髓樣分化因子88和腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6等一系列信號(hào)分子,激活核轉(zhuǎn)錄因子kB( nuclear factor κ B,NF- κ B)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK),從而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致Th2細(xì)胞效應(yīng)分子IL-5 IL-4和IL-13等的釋放。當(dāng)心臟成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞受到過(guò)大的壓力負(fù)荷時(shí)，這些效應(yīng)分子可以使心臟作出適應(yīng)性反應(yīng)，防止過(guò)度牽拉導(dǎo)致的心肌肥大和心肌纖維化發(fā)生。與此同時(shí)，心肌sST2大量生成，sST2與IL-33結(jié)合后競(jìng)爭(zhēng)性抑制其與ST2L結(jié)合，阻斷經(jīng)ST2L的信號(hào)傳導(dǎo)，最終抑制NF-B和MAPK激活，從而大大降低IL-33/ST2L信號(hào)通路的內(nèi)源性心肌保護(hù)作用。ST2能夠獨(dú)立的診斷心力衰竭，結(jié)合NT-proBNP時(shí)，其對(duì)心衰的診斷的敏感性和特異性均高于ST2和NT-proBNP單獨(dú)診斷的結(jié)果?；赟T2水平能夠很好的預(yù)測(cè)病患在一年內(nèi)的死亡率，所以其在指導(dǎo)病患是否進(jìn)行心臟移植時(shí)提供數(shù)據(jù)支持，有利于提前干預(yù)提高病患的治愈率和成活率。
[0004]目前，檢測(cè)ST2的方法目前主要是酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELISA)，ELISA技術(shù)存在以下缺點(diǎn):檢測(cè)設(shè)備要求高，成本高；干擾因素較多，重復(fù)性不好；檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)。因此酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測(cè)ST2不適合臨床快速診斷，因此如何能夠制作出快速的定量檢測(cè)設(shè)備成為需要迫切解決的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種能快速定量檢測(cè)ST2的免疫熒光試紙條。
[0006]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型提供了一種快速定量檢測(cè)ST2的免疫熒光試紙條，它包括試紙條支撐片以及試紙條支撐片上順次搭接粘貼的樣品墊片、檢測(cè)膜和吸水墊片，所述樣品墊片和檢測(cè)膜之間設(shè)有偶合物墊片，偶合物墊片一端上方設(shè)有第一層玻璃纖維墊片，其一端下方設(shè)有第二層玻璃纖維墊片或者偶合物墊片一端上方僅設(shè)有第一層玻璃纖維墊片或者不設(shè)有任一墊片，所述檢測(cè)膜上設(shè)有檢測(cè)線，所述檢測(cè)線包被有基質(zhì)裂解素(ST2)抗體，所述檢測(cè)線另一邊設(shè)有控制線，控制線包被有抗鏈霉親和素(SAV)抗體，所述偶合物墊片上涂布有熒光標(biāo)記的基質(zhì)裂解素單克隆抗體或多克隆抗體偶合物。
[0007]所述控制線與檢測(cè)線平行設(shè)置于檢測(cè)膜上，并與偶合物墊片部分重疊或不重疊。
[0008]采用如上技術(shù)方案后，其有益效果為:
[0009]本實(shí)用新型所述的快速定量檢測(cè)ST2的免疫熒光試紙條的工作原理是:采用免疫側(cè)流反應(yīng)原理，通過(guò)雙抗體夾心法制備而成。檢驗(yàn)時(shí)樣本中的ST2抗原首先與偶合墊上的熒光標(biāo)記的ST2抗體偶合物發(fā)生免疫反應(yīng)，形成免疫復(fù)合物。其后免疫復(fù)合物隨著樣本在檢測(cè)膜上層析流動(dòng)，當(dāng)免疫復(fù)合物層析至檢測(cè)膜上的檢測(cè)區(qū)(ST2檢測(cè)線)時(shí)，與預(yù)先包被在檢測(cè)膜上的抗ST2抗體發(fā)生反應(yīng)從而被固定在檢測(cè)膜的檢測(cè)線上。血液中的ST2越多，檢測(cè)線上的復(fù)合物越多，條帶上的光密度值就越高。同時(shí)，在檢測(cè)過(guò)程中，未與ST2抗原結(jié)合的熒光標(biāo)記的ST2抗體偶合物，當(dāng)層析至檢測(cè)膜的控制線時(shí)，免疫熒光偶合物會(huì)與預(yù)先包被在檢測(cè)膜上的抗SAV抗體發(fā)生反應(yīng)從而被固定在對(duì)照區(qū)(控制線)上。
[0010]當(dāng)反應(yīng)結(jié)束后，利用免疫熒光檢測(cè)儀將控制線和檢測(cè)線的光密度進(jìn)行分析，并將所分析得到的結(jié)果進(jìn)行運(yùn)算，從而得到相對(duì)光密度值(RI)。然后檢測(cè)儀根據(jù)已預(yù)先設(shè)置在檢測(cè)儀內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)ST2的濃度進(jìn)行計(jì)算并顯示結(jié)果，以ng/mL為單位表示。
[0011]綜上所述，本實(shí)用新型所述快速定量檢測(cè)ST2的免疫熒光試紙條，該試紙具有方便快捷、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適于臨床快速診斷。
【附圖說(shuō)明】
[0012]圖1是本實(shí)用新型所述快速定量檢測(cè)ST2的免疫熒光試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0013]其中:1_樣品墊片、2-檢測(cè)膜、3-吸水墊片、4-支撐片、5偶合物墊片、6-1第一層玻璃纖維墊片、6-2第二層玻璃纖維墊片、7-檢測(cè)線、8-控制線。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，不能理解為是對(duì)本實(shí)用新型的限制；
[0015]實(shí)施例1:
[0016]制備快速定量檢測(cè)ST2的免疫熒光試紙條
[0017]如圖1所示的免疫熒光試紙條結(jié)構(gòu)，一種快速定量檢測(cè)ST2的免疫熒光試紙條，它包括試紙條支撐片4以及試紙條支撐片上順次搭接粘貼的樣品墊片1、檢測(cè)膜2和吸水墊片3，所述樣品墊片I和檢測(cè)膜2之間設(shè)有偶合物墊片5，偶合物墊片5 —端上方設(shè)有第一層玻璃纖維墊片6-1，其一端下方設(shè)有第二層玻璃纖維墊片6-2，所述檢測(cè)膜2上設(shè)有檢測(cè)線7，所述檢測(cè)線7包被有基質(zhì)裂解素(ST2)抗體，所述檢測(cè)線7另一邊設(shè)有控制線8，控制線8包被有抗鏈霉親和素(SAV)抗體，所述偶合物墊片5上涂布有熒光標(biāo)記的基質(zhì)裂解素單克隆抗體或多克隆抗體偶合物。
[0018]所述控制線8與檢測(cè)線7平行設(shè)置于檢測(cè)膜2上，與偶合物墊片5部分不重疊。
[0019]其中，檢測(cè)膜2在熒光試紙中用于固定包被抗體，同時(shí)也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處；