中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白免疫層析檢測試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型屬于免疫檢測領(lǐng)域，具體涉及一種高靈敏度中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白免疫層析檢測試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白(neutrophil gelatinase associatedlipocalin，NGAL)，又稱人脂質(zhì)運載蛋白 2 (lipocalin 2，Ln2)或.鐵蛋白(siderocalin)，是人脂質(zhì)運載蛋白家族中的一個新成員。NGAL是1993年Kjcldsen等研宄中性粒細胞時發(fā)現(xiàn)的一種特殊顆粒組分，與明膠酶B即基質(zhì)金屬蛋白酶9 (man-1x metalloproteinase-9,MMP-9)密切相關(guān)。
[0003]在生理狀態(tài)下，中性粒細胞、腎小管上皮細胞、肺泡巨噬細胞、支氣管上皮黏液細胞等分泌少量NGAL，而腦和周圍神經(jīng)、結(jié)腸、子宮和卵巢、胎盤、甲狀腺等組織細胞中NGAL的表達呈陰性。急性腎功能損傷(AKI)時血、尿NGAL濃度通常會迅速升高，2h最為明顯(比臨界值升高幾十至幾百倍)，血清肌酐(sCr)，尿酶等傳統(tǒng)腎功能指標往往要在24-72h才后明顯升高，因而NGAL可用于AKI的早期診斷。NGAL作為一個新的腎損傷標志物，能早期診斷急性腎損傷，反映腎功能損傷程度，對腎病的治療監(jiān)測和預(yù)后判斷有重要作用。隨著NGAL的各種檢測技術(shù)的快速發(fā)展，其臨床應(yīng)用研宄也越來越廣泛、深入。目前由于不同研宄結(jié)果中的對象選擇、診斷標準、實驗方法設(shè)計各不相同，還難以進行橫向比較。
[0004]生物素-親和素系統(tǒng)(b1tinavidin system，BAS)，是一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。隨著各種生物素衍生物的問世，BAS很快被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域。將該系統(tǒng)應(yīng)用于免疫組化，酶聯(lián)免疫，熒光免疫，放射免疫等檢測技術(shù)中，可顯著地提高以上技術(shù)方法的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，使方法更簡便，有助于臨床快速診斷，并利于進行大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查，成為研宄免疫反應(yīng)的有力工具。由于BAS檢測系統(tǒng)經(jīng)濟快速，又無放射物質(zhì)污染，不需復(fù)雜儀器，充分顯示了此系統(tǒng)的巨大潛力和應(yīng)用的可能性。
[0005]生物素-親和素系統(tǒng)檢測原理:BAS是在常規(guī)ELISA原理的基礎(chǔ)上，結(jié)合生物素與親和素間的高度放大作用，而建立的一種檢測系統(tǒng)。親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，分子量為68kDa，由4個亞單位組成，對生物素有非常高的親和力(結(jié)合常數(shù)高達1015M-1)。生物素很易與蛋白質(zhì)(如抗體等)以共價鍵結(jié)合。這樣，結(jié)合了酶的親和素分子與結(jié)合有特異性抗體的生物素分子產(chǎn)生反應(yīng)，既起到了多級放大作用，又由于酶在遇到相應(yīng)底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗原(或抗體)分子的目的。鏈霉親和素是與親和素有相似生物學(xué)特性的一種蛋白質(zhì)，鏈霉親和素與親和素一樣分子中每條肽鏈都能結(jié)合一個生物素，因幾乎所有用于標記的物質(zhì)均可以同親和素或鏈霉親合素結(jié)合。利用生物素-親和素系統(tǒng)研制中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白檢測試快速診斷試劑尚無報道。
【實用新型內(nèi)容】
[0006]本實用新型的目的，在于提供一種中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白免疫層析檢測試紙條，其基于雙抗體夾心法、熒光免疫側(cè)向?qū)游龊蜕锼?鏈霉親和素放大系統(tǒng)，提供高靈敏度中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白免疫層析檢測試紙條。使用本實用新型時，提高了檢測靈敏度和檢測穩(wěn)定性，降低了非特異性結(jié)合，檢測時間不大于10分鐘，大大提高了診斷效率。
[0007]本實用新型解決其技術(shù)問題的解決方案是:中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白免疫層析檢測試紙條，其包括底板，所述底板上依次設(shè)有樣品墊、熒光標記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述吸水墊和熒光標記物結(jié)合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端后在硝酸纖維素膜的表面形成檢測區(qū)，所述樣品墊交疊壓在熒光標記物結(jié)合墊上，所述熒光標記物結(jié)合墊上固定有生物素標記的中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白單克隆抗體和鏈霉親和素標記的熒光蛋白；所述檢測區(qū)內(nèi)的硝酸纖維素膜上固定有識別中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白另外一個表位的單克隆抗體構(gòu)成的檢測線和羊抗鼠IgG多克隆抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。
[0008]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述熒光標記物結(jié)合墊包括層疊的第一熒光標記物結(jié)合墊和第二熒光標記物結(jié)合墊，所述第一熒光標記物結(jié)合墊的一端墊在樣品墊的下方，所述第二熒光標記物結(jié)合墊交疊壓在硝酸纖維素膜的一端。
[0009]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述第一焚光標記物結(jié)合墊中插入樣品墊下方的一端設(shè)有定位條，所述樣品墊的下端面設(shè)有能容納定位條的定位槽。
[0010]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，還包括卡殼，所述底板、樣品墊、熒光標記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均置于卡殼內(nèi)，所述卡殼殼面上對應(yīng)于硝酸纖維膜的位置設(shè)有觀察窗，卡殼殼面上對應(yīng)于樣品墊的位置設(shè)有加樣孔。
[0011]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述觀察窗為長方形孔。
[0012]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述熒光蛋白可以是綠色熒光蛋白、藻膽蛋白中的一種。
[0013]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述樣品墊為經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥的玻璃纖維構(gòu)件。
[0014]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述底板為聚苯乙烯構(gòu)件或者聚乙烯構(gòu)件。
[0015]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述卡殼包括塑料上殼和塑料下殼，所述塑料上殼扣合塑料下殼上后形成卡殼。
[0016]本實用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點:
[0017](I)本實用新型將熒光蛋白作為標記物，此標記物穩(wěn)定性良好，有利于提高檢測穩(wěn)定性。
[0018](2)本實用新型通過利用“鏈霉親和素-生物素放大系統(tǒng)”，提高檢測靈敏度，降低非特異性結(jié)合，有利于提高試劑盒性能。
[0019](3)利用本實用新型進行降鈣素原的檢測時間不大于10分鐘，檢測線性范圍為0.10ng/ml?100.00ng/ml，極大地提高了檢測效率。
[0020](4)本實用新型可通過熒光免疫分析儀對結(jié)果進行判讀，可實現(xiàn)自動化，減少主觀因素的影響，提供便利、快速、可靠的診斷結(jié)果。
[0021](5)本使用新型卡殼設(shè)有樣品進入的加樣孔和供觀測結(jié)果的觀察窗，根據(jù)分析儀器判定結(jié)果，準確可靠。
[0022](6)本實用新型制作方便，體積小、便于攜帶。
[0023](7)本實用新型檢測成本較低。
[0024](8)本實用新型可批量生產(chǎn)，適用于臨床快速診斷和現(xiàn)場快速診斷；易于保存，有利于基層單位推廣。
【附圖說明】
[0025]為了更清楚地說明本實用新型實施例中的技術(shù)方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單說明。顯然，所描述的附圖只是本實用新型的一部分實施例，而不是全部實施例，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他設(shè)計方案和附圖。
[0026]圖1是本實用新型實施例一的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0027]圖2是本實用新型實施例二的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0028]圖3是本實用新型實施例三的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0029]圖4是本實用新型實施例四的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實施方式】
[0030]以下將結(jié)合實施例和附圖對本實用新型的構(gòu)思、具體結(jié)構(gòu)及產(chǎn)生的技術(shù)效果進行清楚、完整地描述，以充分地理解本實用新型的目的、特征和效果。顯然，所描述的實施例只是本實用新型的一部分實施例，而不是全部實施例，基于本實用新型的實施例，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得的其他實施例，均屬于本實用新型保護的范圍。另外，文中所提到的所有聯(lián)接/連接關(guān)系