測(cè)信號(hào)放大作用，提高產(chǎn)品靈敏度和反應(yīng)特異性，降低產(chǎn)品的漏檢率。具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速和經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)試劑盒通過(guò)在NC膜上包被鼠抗人IgM和IgG抗體，實(shí)現(xiàn)對(duì)血液中結(jié)核分枝桿菌抗體的聯(lián)合檢測(cè)，一次檢測(cè)獲得兩種檢測(cè)指標(biāo)，節(jié)約時(shí)間和成本，減輕患者的痛苦。
【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1結(jié)構(gòu)示意圖
[0020]附圖符號(hào)說(shuō)明:
[0021]1:上樣墊；2:復(fù)合物偶聯(lián)墊；3:NC膜；4:吸樣墊
[0022]5:檢測(cè)線Tl ；6:檢測(cè)線T2 ；7:質(zhì)控(C)線；8:塑料支撐板
【具體實(shí)施方式】
[0023]I主要材料
[0024]1.1結(jié)核分枝桿菌(TB)特異性重組抗原:杭州啟泰生物技術(shù)有限公司，east-6、LAM、38KDa、16kDa優(yōu)勢(shì)表位區(qū)段，經(jīng)過(guò)特殊修飾、重組融合，用于標(biāo)記；生物素BHZ、鏈霉親和素:美國(guó)Alfa公司，用于抗原偶聯(lián)和標(biāo)記；羊抗鼠IgG抗體:菲鵬生物股份有限公司產(chǎn)品，用于NC膜質(zhì)控線包被；鼠抗人IgM和IgG抗體:Arista公司產(chǎn)品，用于NC膜包被；氯金酸:Sigma公司產(chǎn)品；硝酸纖維素(NC)膜:Millipore公司產(chǎn)品；酪蛋白鈉:Sigma產(chǎn)品。其它常用試劑均為分析純?cè)噭?br>[0025]1.2血清樣本由公司在相關(guān)醫(yī)院獲得。
[0026]2 方法
[0027]2.1結(jié)核分枝桿菌特異性抗原的標(biāo)記將膠體金溶液用緩沖溶液調(diào)整PH值后與一定濃度的鏈霉親和素進(jìn)行偶聯(lián)；同時(shí)將結(jié)核分枝桿菌特異性重組抗原與生物素BHZ進(jìn)行偶聯(lián)，將兩種偶聯(lián)物以一定比例混合，然后以不同濃度的酪蛋白、BSA及其他有封閉效果的蛋白或者化合物分別對(duì)標(biāo)記物進(jìn)行封閉；標(biāo)記結(jié)束后以12000 r/m離心，棄上清，用washbuffer對(duì)沉淀進(jìn)行吹洗，以12000 r/m離心，棄上清，用磷酸鹽緩沖液將沉淀復(fù)溶至原體積，然后將復(fù)溶液按Iml溶液鋪20cm2的比例加樣于無(wú)紡布、玻璃纖維素膜或者聚酯膜上，在溫度20-25°C，相對(duì)濕度在< 30%的干燥環(huán)境中將標(biāo)記物固相化。
[0028]2.2鼠抗人IgG抗體和鼠抗人IgM抗體的包被用0.0lM pH7.2 PBS將鼠抗人IgM抗體和鼠抗人IgG抗體分別稀釋到一定濃度，然后用噴膜儀在NC膜下部按lul/cm進(jìn)行分別劃線包被，同時(shí)在NC膜上部包被羊抗鼠IgG抗體，用于產(chǎn)品的質(zhì)控，包被完成后將NC膜在在溫度20-25°C，相對(duì)濕度在< 30%的干燥間干燥2-5小時(shí)。
[0029]2.3試劑盒的組裝在干燥室內(nèi)(溫度20_25°C，相對(duì)濕度< 30%)取塑料支撐板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板的中部粘貼，在NC膜T線一側(cè)搭接復(fù)合物偶聯(lián)墊(搭復(fù)合物偶聯(lián)墊的1/3)粘貼，在復(fù)合物偶聯(lián)墊另一側(cè)搭接粘貼上樣墊(搭膠體金墊的1/5);在NC膜C線一側(cè)搭接吸樣墊(搭吸樣墊的1/10);然后用裁剪機(jī)將貼好塑料板切成3.5mm寬的試紙條。切好的試紙條可以再裝入塑料卡內(nèi)，形成聯(lián)合檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗體的試劑盒。
[0030]2.4檢測(cè)將被檢血清或血漿平衡至溫室，將試劑盒平放，在上樣墊上用滴管或者移液器取2-3滴或者60— 90ul血清，使金標(biāo)鏈霉親和素-生物素復(fù)合物溶解后在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在15分鐘內(nèi)C、T1、T2線的出現(xiàn)情況，并判定檢測(cè)結(jié)果。
[0031]3、結(jié)果
[0032]在側(cè)向?qū)游龅淖饔孟拢魳悠分泻Y(jié)核分枝桿菌IgG抗體或者IgM抗體，則和復(fù)合物偶聯(lián)墊上的“特異性重組抗原east_6+LAM+38KDa+16kDa的生物素-鏈霉親和素-膠體金”復(fù)合物結(jié)合，并擴(kuò)散到NC膜上進(jìn)一步層析，當(dāng)遇到包被在NC膜上Tl線處的鼠抗人IgM抗體時(shí)，已與復(fù)合物結(jié)合的IgM抗體則和包被的鼠抗人IgM抗體結(jié)合，被捕獲在Tl線處；當(dāng)遇到包被在NC膜上T2線處鼠抗人IgG抗體時(shí)，已與復(fù)合物結(jié)合的IgG抗體則又和包被的鼠抗人IgG抗體結(jié)合，被捕獲在T2線處；當(dāng)被捕獲的偶聯(lián)復(fù)合物達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，則形成肉眼可見(jiàn)的Tl或T2線；若血清中不含特異性抗體，則不能被鼠抗人IgM抗體和鼠抗人IgG抗體捕獲，亦不能形成T線，C線作為試劑的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，陽(yáng)性和陰性樣品檢測(cè)時(shí)均會(huì)出線；若C線不出線，則表明試劑盒無(wú)效。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種聯(lián)合檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗體的試劑盒，其特征在于這種試劑盒的組成，上樣墊的一端緊密壓接含有“特異性重組抗原east_6+LAM+38KDa+16kDa的生物素-鏈霉親和素-膠體金”的復(fù)合物偶聯(lián)墊，復(fù)合物偶聯(lián)墊的另一端緊密壓接硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測(cè)線Tl、檢測(cè)線T2和質(zhì)控線，檢測(cè)線Tl為包被在NC膜上的抗人IgM抗體，檢測(cè)線T2為包被在NC膜上的抗人IgG抗體，質(zhì)控線為包被在NC膜上的羊抗鼠IgG抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊(4)形成試劑盒。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聯(lián)合檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗體的試劑盒，其特征在于上樣墊為玻璃纖維素膜或無(wú)紡布，復(fù)合物偶聯(lián)墊為玻璃纖維素膜、無(wú)紡布或者聚酯膜，吸樣墊為吸水濾紙。
【專利摘要】本實(shí)用新型是一種聯(lián)合檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗體的試劑盒，其上樣墊的一端緊密壓接含有“特異性重組抗原east-6+LAM+38KDa+16kDa的生物素-鏈霉親和素-膠體金”的復(fù)合物偶聯(lián)墊，復(fù)合物偶聯(lián)墊的另一端緊密壓接硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測(cè)線T1、檢測(cè)線T2和質(zhì)控線，檢測(cè)線T1為包被在NC膜上的抗人IgM抗體，檢測(cè)線T2為包被在NC膜上的抗人IgG抗體，質(zhì)控線為包被在NC膜上的羊抗鼠IgG抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊（4），本試劑盒具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速和經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】G01N33/558, G01N33/569
【公開(kāi)號(hào)】CN204719052
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201520311622
【發(fā)明人】司英杰, 李梅, 殷娟娟, 劉琳, 劉寅, 向榮, 王昊, 張賢剛, 張賢強(qiáng), 朱正宇, 李亞峰
【申請(qǐng)人】德康潤(rùn)生物科技（天津）有限公司
【公開(kāi)日】2015年10月21日
【申請(qǐng)日】2015年5月15日