類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎檢測(cè)試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎檢測(cè)試劑合
ΙΤΓΤ.0
【背景技術(shù)】
[0002]類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以侵蝕性關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的全身性自身免疫疾病。本病以女性多發(fā)，男女患病比例約為1:3。RA可發(fā)生于任何年齡，以30?50歲為發(fā)病高峰。我國(guó)大陸地區(qū)的RA患病率約為0.2%?0.4%。病例表現(xiàn)為關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥、血管翳的形成、關(guān)節(jié)軟骨和骨的破壞，最終可導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量和造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
[0003]RA的診斷主要依靠臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查及影像學(xué)檢查。典型病例按1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)的分類標(biāo)準(zhǔn)診斷并不困難，但對(duì)于不典型及早期RA易出現(xiàn)誤診或漏診。2009年ACR和歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)提出了新的RA分類標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)分系統(tǒng)，該標(biāo)準(zhǔn)對(duì)關(guān)節(jié)受累情況、血清學(xué)指標(biāo)、滑膜炎持續(xù)時(shí)間和急性時(shí)相反應(yīng)物4個(gè)部分進(jìn)行評(píng)分，總得分6分以上也可診斷為RA。該標(biāo)準(zhǔn)中血清學(xué)指標(biāo)包括了類風(fēng)濕因子(RF)和抗瓜氨酸化蛋白抗體(ant1-citrullinated protein antibodies, ACPA);急性時(shí)相反應(yīng)物包括了 C 反應(yīng)蛋白(CRP)和血沉(ESR) ο
[0004]CRP是人類急性反應(yīng)蛋白，沒(méi)有特異性，目前已經(jīng)作為醫(yī)院常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，可以在很多疾病診斷上作為輔助判斷依據(jù)。另外，越來(lái)越多的證據(jù)表明CRP不僅是炎癥標(biāo)志物，本身直接參與炎癥過(guò)程。最近(2006)有研究發(fā)現(xiàn)CRP是糖尿病人獲冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，正常參考值彡10mg/L，類風(fēng)濕早期和急性風(fēng)濕時(shí)，血清中可達(dá)50mg/L，其陽(yáng)性率為80%?90%。CRP的臨床意義與血沉相同，但不受紅細(xì)胞、HB、脂質(zhì)和年齡等因素的影響，是反應(yīng)炎癥感染和療效的良好指標(biāo)。CRP在類風(fēng)濕活動(dòng)期明顯增多，與血沉增快相平行，但比血沉增快出現(xiàn)的早、消失也快。CRP含量愈多，表明病變活動(dòng)度愈高。炎癥恢復(fù)過(guò)程中，若CRP陽(yáng)性，預(yù)示仍有突然出現(xiàn)臨床癥狀的可能性；停用激素后已轉(zhuǎn)陰的CRP又陽(yáng)性時(shí)，表明病變活動(dòng)在繼續(xù)。炎癥緩解期和用抗風(fēng)濕藥后，CRP轉(zhuǎn)陰或消失比血沉快，且在貧血和心力衰竭時(shí)不象血沉那樣易受影響。
[0005]RF主要為IgM類自身抗體，但也有IgG類、IgA類和IgE類。各類RF臨床意義有所不同。RF是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體。未經(jīng)治療的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者其陽(yáng)性率為80%，且滴定度常在1:160以上。臨床上動(dòng)態(tài)觀察滴定度多少，可作為病變活動(dòng)及藥物治療后療效的評(píng)價(jià)。其他風(fēng)濕性疾病如SLE陽(yáng)性率為20% — 25%;硬皮病與皮肌炎陽(yáng)性率為10% — 24%，滴定度較低。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者和約50%的健康人體內(nèi)都存在有產(chǎn)生RF的B細(xì)胞克隆，在變性IgG(與抗原結(jié)合的IgG)或EB病毒直接作用下，可大量合成RF。健康人產(chǎn)生RF的細(xì)胞克隆較少，且單核細(xì)胞分泌的可溶性因子可抑制RF的產(chǎn)生，故一般不易測(cè)出。在RA患者，高效價(jià)的RF存在并伴有嚴(yán)重的關(guān)節(jié)功能受限時(shí)，常提示預(yù)后不良。在非類風(fēng)濕患者中，RF的陽(yáng)性率隨年齡的增加而增加，但這些人以后發(fā)生RA者極少。
[0006]近年來(lái)，ACPA雖然在RA常規(guī)診斷中尚未完全取代RF的地位，但其已成為診斷RA的首選指標(biāo)?？傮w而言，ACPA與RF敏感性相近，但特異性更高。這些抗體識(shí)別轉(zhuǎn)錄后被瓜氨酸化的多種蛋白，包括聚絲蛋白(filaggrin)、波形蛋白(vimentin)、α和β纖維蛋白(a-and β-fibrin)、α -稀醇化酶(a-enolase)及 I 型和 II 型膠原多肽(Type I andtype II collagen)。ACPA的檢測(cè)是通過(guò)ELISA法檢測(cè)血清對(duì)環(huán)瓜氨酸多肽(CCP)的反應(yīng)。最初的臨床檢驗(yàn)以檢測(cè)抗瓜氨酸化聚絲蛋白的環(huán)狀多肽的反應(yīng)為基礎(chǔ)，因?yàn)榄h(huán)瓜氨酸多肽與天然構(gòu)象表位更為接近，從而提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前這一實(shí)驗(yàn)已被結(jié)果更準(zhǔn)確的第二代試驗(yàn)--抗CCP2Elisa--所取代，它使用從瓜氨酸化多肽庫(kù)中篩選的瓜氨酸化多肽，這些瓜氨酸化的多肽均為人工合成。近期研究顯示瓜氨酸化殘基可在肺和滑膜表達(dá)，ACPA的產(chǎn)生可能為肽基精氨酸脫亞胺酶(Peptidylarginine deiminase，PAD)介導(dǎo)的蛋白在肺及滑膜脫亞氨基作用而致。這些蛋白可被特異性抗原遞呈細(xì)胞或通過(guò)B細(xì)胞形成的免疫復(fù)合物所攝取，并遞呈給T細(xì)胞，促進(jìn)激活A(yù)CPA反應(yīng)性B細(xì)胞。
[0007]上述指標(biāo)大多需要采集全血后，在實(shí)驗(yàn)室分離血清或血漿，再進(jìn)行分別檢測(cè)，耗時(shí)較長(zhǎng)，不能現(xiàn)場(chǎng)得出檢測(cè)結(jié)果。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0008]有鑒于此，有必要針對(duì)上述的問(wèn)題，提供一種類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎檢測(cè)試劑盒結(jié)構(gòu)。
[0009]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用如下技術(shù)方案:
[0010]一種類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎檢測(cè)試劑盒，包含盒子和其內(nèi)的免疫膠體金檢測(cè)裝置，所述免疫膠體金檢測(cè)裝置包含樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和支撐板，樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次設(shè)置在支撐板上，相鄰兩者之間首尾銜接，其中金標(biāo)結(jié)合墊吸附有金標(biāo)抗體，硝酸纖維素膜上設(shè)有3條檢測(cè)線和I條質(zhì)控線，3條檢測(cè)線分別包被RF、CCP和CRP的抗原或抗體，質(zhì)控線包被抗金標(biāo)抗體；所述盒子包含盒體和盒蓋，所述盒蓋上設(shè)有加樣孔和觀察窗，所述加樣孔與樣品墊位置對(duì)應(yīng)，所述觀察窗與質(zhì)控線和3條檢測(cè)線位置對(duì)應(yīng)。
[0011]優(yōu)選地，所述類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎檢測(cè)試劑盒還包含微量采血裝置；微量采血裝置與加樣孔可拆卸連接。
[0012]優(yōu)選地，所述微量采血裝置包含微量采血管、針頭和導(dǎo)管，針頭設(shè)置在微量采血管的頂面，導(dǎo)管設(shè)置在微量采血管的底面；微量采血裝置設(shè)有導(dǎo)管的一端與免疫膠體金檢測(cè)裝置的加樣孔可拆卸連接。
[0013]優(yōu)選地，所述導(dǎo)管還包含管蓋和支撐桿，所述管蓋鉸接在導(dǎo)管上端，所述支撐桿固定于管蓋下面并伸至導(dǎo)管下端之外。
[0014]優(yōu)選地，微量采血管的底面設(shè)有外凸的環(huán)形凸槽，所述加樣孔設(shè)有與其對(duì)應(yīng)的內(nèi)凹的環(huán)形凹槽，環(huán)形凸槽和環(huán)形凹槽可拆卸連接。
[0015]優(yōu)選地，所述微量采血管中內(nèi)置促凝劑。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型具有如下有益效果:
[0017]1、可以同時(shí)進(jìn)行RF、CCP和CRP三種指標(biāo)檢測(cè)，使用方便快速，節(jié)省樣品，便于基層使用和現(xiàn)場(chǎng)使用，所有反應(yīng)能在15分鐘內(nèi)完成；成本低，不需要特殊的儀器設(shè)備；
[0018]2、將微量采血裝置與免疫膠體金檢測(cè)裝置組合起來(lái)，可在采血后立即進(jìn)