絨毛膜促性腺激素β亞單位定量檢測(cè)試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于免疫檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種高靈敏度絨毛膜促性腺激素β亞單位定量檢測(cè)試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]絨毛膜促性腺激素(human chor1nic gonadotrophin，簡(jiǎn)稱HCG)是由胎盤(pán)的滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，它的主要功能是:維持黃體及降低母體淋巴細(xì)胞的活動(dòng)，防止對(duì)胎兒的排斥反應(yīng)。HCG結(jié)構(gòu)中包括α、β兩個(gè)亞基，α亞基與LH、FSH、TSH近似，尤其是與LH有較大的免疫交叉反應(yīng)，β鏈為其獨(dú)有，故而β亞單位被用來(lái)制備特異性抗體測(cè)定血中的HCG，專名為β-HCG。女性懷孕后，血液和尿液中都會(huì)含有HCG，從受精日第9-11天起即可測(cè)出血中β-HCG升高，在妊娠的前12周增值很快，以維持妊娠，之后逐漸下降，大約孕20周后保持一定的水平。
[0003]因HCG是妊娠時(shí)所分泌的特異性激素，所以β -HCG可用于協(xié)助宮外孕早期未破裂的診斷。正常發(fā)育的絨毛所分泌的β-HCG量很大，每天的滴度不斷的快速上升，每48小上升66%以上。如果β-HCG每?jī)商煸黾拥牧看笥?6%，可以診斷為宮內(nèi)妊娠；而如果增加的量小于66%，則宮外孕或?qū)m內(nèi)孕發(fā)育不良的可能性很大。對(duì)于宮外孕，由于輸卵管肌層菲薄，血供不良，β-HCG分泌量很低。每天升值較少，48小時(shí)上升不到50% (但有一部分人最初的β-HCG上升正常)。如果用β-HCG難以確認(rèn)，還可用血孕酮來(lái)做輔助性診斷。
[0004]異位妊娠患者血β -HCG水平較同期正常官內(nèi)妊娠低。根據(jù)此特點(diǎn)，可對(duì)異位妊娠進(jìn)行早期診斷。當(dāng)β-HCG上升速度異常時(shí)，應(yīng)高度警惕異位妊娠的可能。如果β-HCG滴度下降，說(shuō)明滋養(yǎng)細(xì)胞活性在減退。臨床建議以治療后血β-HCG下降是否呈對(duì)數(shù)作為臨床療效評(píng)價(jià)及判斷預(yù)后的客觀指標(biāo)。治療后血β-HCG下降越快，治療成功率也越高。在藥物保守治療失敗的患者中，也有部分患者的血β -HCG值偏低，說(shuō)明治療效果不僅僅與血β -HCG指標(biāo)有關(guān)，可能還與輸卵管妊娠部位或其他因素有關(guān)?？梢?jiàn)血β-HCG對(duì)早期診斷異位妊娠、提尚異位妊娠保守治療成功率有$父尚的臨床意義。
[0005]目前β-HCG的測(cè)定方法較多，產(chǎn)品多樣，定量檢測(cè)的有:化學(xué)發(fā)光法、放射免疫法(RIA)和免疫金標(biāo)試紙法等，但檢測(cè)靈敏度均有一定的不足。
[0006]生物素-親和素系統(tǒng)(b1tinavidin system，BAS)，是一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。隨著各種生物素衍生物的問(wèn)世，BAS很快被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域。將該系統(tǒng)應(yīng)用于免疫組化，酶聯(lián)免疫，熒光免疫，放射免疫等檢測(cè)技術(shù)中，可顯著地提高以上技術(shù)方法的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，使方法更簡(jiǎn)便，有助于臨床快速診斷，并利于進(jìn)行大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查，成為研究免疫反應(yīng)的有力工具。由于BAS檢測(cè)系統(tǒng)經(jīng)濟(jì)快速，又無(wú)放射物質(zhì)污染，不需復(fù)雜儀器，充分顯示了此系統(tǒng)的巨大潛力和應(yīng)用的可能性。
[0007]生物素-親和素系統(tǒng)檢測(cè)原理:BAS是在常規(guī)ELISA原理的基礎(chǔ)上，結(jié)合生物素與親和素間的高度放大作用，而建立的一種檢測(cè)系統(tǒng)。親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，分子量為68kDa，由4個(gè)亞單位組成，對(duì)生物素有非常高的親和力(結(jié)合常數(shù)高達(dá)K^M1)。生物素很易與蛋白質(zhì)(如抗體等)以共價(jià)鍵結(jié)合。這樣，結(jié)合了酶的親和素分子與結(jié)合有特異性抗體的生物素分子產(chǎn)生反應(yīng)，既起到了多級(jí)放大作用，又由于酶在遇到相應(yīng)底物時(shí)的催化作用而呈色，達(dá)到檢測(cè)未知抗原(或抗體)分子的目的。鏈霉親和素是與親和素有相似生物學(xué)特性的一種蛋白質(zhì)，鏈霉親和素與親和素一樣分子中每條肽鏈都能結(jié)合一個(gè)生物素，因幾乎所有用于標(biāo)記的物質(zhì)均可以同親和素或鏈霉親合素結(jié)合。利用生物素-親和素系統(tǒng)研制絨毛膜促性腺激素β亞單位檢測(cè)快速診斷試劑尚無(wú)報(bào)道。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0008]本實(shí)用新型的目的，在于提供一種絨毛膜促性腺激素β亞單位定量檢測(cè)試紙條，其基于雙抗體夾心法、熒光免疫側(cè)向?qū)游龊蜕锼?鏈霉親和素放大系統(tǒng)，提供高靈敏度絨毛膜促性腺激素β亞單位定量檢測(cè)試紙條。使用本實(shí)用新型時(shí)，提高了檢測(cè)靈敏度和檢測(cè)穩(wěn)定性，降低了非特異性結(jié)合，檢測(cè)時(shí)間不大于10分鐘，大大提高了診斷效率。
[0009]本實(shí)用新型解決其技術(shù)問(wèn)題的解決方案是:絨毛膜促性腺激素β亞單位定量檢測(cè)試紙條，其包括底板，所述底板上依次設(shè)有樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述吸水墊和熒光標(biāo)記物結(jié)合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端后在硝酸纖維素膜的表面形成檢測(cè)區(qū)，所述樣品墊交疊壓在熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上，所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上固定有生物素標(biāo)記的絨毛膜促性腺激素β亞單位單克隆抗體和鏈霉親和素標(biāo)記的熒光蛋白；所述檢測(cè)區(qū)內(nèi)的硝酸纖維素膜上固定有識(shí)別絨毛膜促性腺激素β亞單位另外一個(gè)表位的單克隆抗體構(gòu)成的檢測(cè)線和羊抗鼠IgG多克隆抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。
[0010]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊包括層疊的第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊和第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊，所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊的一端墊在樣品墊的下方，所述第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊交疊壓在硝酸纖維素膜的一端。
[0011]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊中插入樣品墊下方的一端設(shè)有定位條，所述樣品墊的下端面設(shè)有能容納定位條的定位槽。
[0012]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，還包括卡殼，所述底板、樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均置于卡殼內(nèi)，所述卡殼殼面上對(duì)應(yīng)于硝酸纖維膜的位置設(shè)有觀察窗，卡殼殼面上對(duì)應(yīng)于樣品墊的位置設(shè)有加樣孔。
[0013]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述觀察窗為長(zhǎng)方形孔。
[0014]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述熒光蛋白可以是綠色熒光蛋白、藻膽蛋白中的一種。
[0015]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述樣品墊為經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥的玻璃纖維構(gòu)件。
[0016]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述底板為聚苯乙烯構(gòu)件或者聚乙烯構(gòu)件。
[0017]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述卡殼包括塑料上殼和塑料下殼，所述塑料上殼扣合塑料下殼上后形成卡殼。
[0018]本實(shí)用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0019](1)本實(shí)用新型將熒光蛋白作為標(biāo)記物，此標(biāo)記物穩(wěn)定性良好，有利于提高檢測(cè)穩(wěn)定性。
[0020](2)本實(shí)用新型通過(guò)利用“鏈霉親和素-生物素放大系統(tǒng)”，提高檢測(cè)靈敏度，降低非特異性結(jié)合，有利于提高試劑盒性能。
[0021](3)利用本實(shí)用新型進(jìn)行絨毛膜促性腺激素β亞單位的檢測(cè)時(shí)間不大于10分鐘，檢測(cè)線性范圍為0.5-50000.0mIU/mL，極大地提高了檢測(cè)效率。
[0022](4)本實(shí)用新型可通過(guò)熒光免疫分析儀對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，減少主觀因素的影響，提供便利、快速、可靠的診斷結(jié)果。
[0023](5)本實(shí)用新型卡殼設(shè)有樣品進(jìn)入的加樣孔和供觀測(cè)結(jié)果的觀察窗，根據(jù)分析儀器判定結(jié)果，準(zhǔn)確可靠。
[0024](6)本實(shí)用新型制作方便，體積小、便于攜帶。
[0025](7)本實(shí)用新型檢測(cè)成本較低。
[0026](8)本實(shí)用新型可批量生產(chǎn)，適用于臨床快速診斷和現(xiàn)場(chǎng)快速診斷；易于保存，有利于基層單位推廣。
【附圖說(shuō)明】
[0027]為了更清楚地說(shuō)明本實(shí)用新型實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單說(shuō)明。顯然，所描述的附圖只是本實(shí)用新型的一部分實(shí)施例，而不是全部實(shí)施例，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他設(shè)計(jì)方案和附圖。
[0028]圖1是本實(shí)用新型實(shí)施例一的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0029]圖2是本實(shí)用新型實(shí)施例二的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0030]圖3是本實(shí)用新型實(shí)施例三的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0031]圖4是本實(shí)用新