物材料的服務(wù)收取一定的費用?；谶@些要求的服務(wù)，限定、 協(xié)調(diào)并且實施了特定的收集方案。
[0081] 在本實例中，將包括限定的客戶樣品容器的貨物包轉(zhuǎn)運至提取該生物樣品的場 所。該"貨物包"或"收集系統(tǒng)"包括不同的部件(除了限定的容器之外)，帶有客戶信息，用 于由醫(yī)師提取客戶/脂肪組織樣品。為了增加由該醫(yī)師交付的整個脂肪含量，在這個實例 中將一個額外的60mL的注射器包括進(jìn)該收集系統(tǒng)中。將說明書修改為使該醫(yī)師用脂肪抽 取物裝載兩個注射器，靜置10分鐘然后將二者注入該收集系統(tǒng)的一個收集袋中。
[0082] 對該貨物包進(jìn)行檢查包括確保以下各項：即（a)限定的客戶容器沒有晚于限定的 有效期，（b)在過去的48小時內(nèi)收集該客戶樣品，以及（c)記錄的信息是準(zhǔn)確的。如果a、 b、或c的條件沒有滿足，那么該樣品是不可接受的并且必須像醫(yī)用廢棄物一樣丟棄。對這 種丟棄進(jìn)行記錄用于整理和"跟蹤"樣品。
[0083] 最常見地，該貨物包包括在一個外容器內(nèi)的條碼的、培養(yǎng)基填充的客戶樣品容器 (如本文所討論的)、無菌的、60mL的注射器、特定患者條碼的裝運容器(該容器是經(jīng)批準(zhǔn)的 用于危險生物材料，含有一個吸收劑層（absorbent sheet)、Tyvek?外容器、足夠的泡 沫包裝以便穩(wěn)定內(nèi)含物，以及在一個外部波狀的紙板箱中的泡沫隔熱材料(后面的物件可 從Saf-T-Pak?商購)。適當(dāng)?shù)尼橆^/插管和其他的醫(yī)療用品總體上是可及的（accessible) 設(shè)備，它們將由醫(yī)師提供，但可以作為貨物的一部分被包括。
[0084] 該方法通過將這些貨物包部件通過在該完整的記錄信息中對在該客戶樣品容器 上的一個條形碼進(jìn)行掃描而經(jīng)由一個登陸端口引入一個數(shù)據(jù)庫的一個處理模塊來繼續(xù)。該 數(shù)據(jù)庫定做為具有符合美國血庫協(xié)會（American Association of Blood Banks)(AABB)標(biāo) 準(zhǔn)6.3和21CFR§ 820. 30 (FDA指導(dǎo)，2002年I月11日，"軟件驗證的總原則"（FDA Guida nce, Januaryll, 2002, "General Principles of Software Validation))(使用，例如可商 購的程序像微軟的訪問程序）的要求的能力。該數(shù)據(jù)庫包括(但不限于）從該貨物包獲得的 信息以便協(xié)調(diào)該客戶樣品與該客戶；例如包括在特定患者的條形碼裝運容器內(nèi)的信息。這 種信息還將以標(biāo)準(zhǔn)化的形式被包括。該數(shù)據(jù)庫將被以組件的形式類似于以標(biāo)準(zhǔn)形式的整理 被整理、將是可檢索的、并且將被程序設(shè)計為產(chǎn)生與這個過程相關(guān)的所有不同形式。
[0085] 在建立可接受的客戶樣品時，一個小瓶將膠原酶、中性蛋白酶、以及DNA酶（DNase I)各自從一個冷凍機中移出并且在一個生物安全柜（biosafety cabinet)中解凍用 于在一種消化溶液中使用。在本實例中，使用預(yù)限定的膠原酶與中性蛋白酶的混合物， Roche Liberase?,它含有膠原酶I和膠原酶π二者，加上嗜熱菌蛋白酶、中性蛋白酶。在 室溫下解凍并且無需保護(hù)這些溶液的完整性和生活力的輔助支持。
[0086] 將客戶樣品從該外運輸容器中移出并且在該客戶樣品容器內(nèi)手動地輕輕地?fù)u動 以便使脂肪和在該培養(yǎng)基中的任何沉淀物再懸浮，并且進(jìn)一步確保無菌的測試樣品將是這 些內(nèi)含物的代表。用來自噴藥瓶的醇(具有過濾消毒的70%的乙醇或異丙醇)擦拭該樣品容 器以便確保它沒有被污染。
[0087] 升高或"吊起"該客戶樣品容器并且允許其靜置不受干擾持續(xù)約五（5)分鐘以便注 意到可見血的存在并且估計來自溶解了的脂肪的油的量(作為存在于該客戶樣品中的全部 脂肪組織的一個部分)。以一種限定的方式將這種觀察記錄在一個預(yù)設(shè)計的形式中。觀察 例如存在的油的量將成為一個標(biāo)準(zhǔn)化的形式的一部分，并且因此該信息變成數(shù)據(jù)庫的一部 分。掃描在這些容器上的條形碼，并且在條形碼中的信息將會輸入該數(shù)據(jù)庫。
[0088] 測試該脂肪組織樣品在該客戶樣品容器范圍內(nèi)的無菌性以便確保品質(zhì)。通過該客 戶樣品容器的一個底口的移出允許通過重力提取從而消除對"泵"等的任何需求。無菌和 微生物測試是通過標(biāo)準(zhǔn)的商業(yè)系統(tǒng)例如BacT/Alert或類似測試進(jìn)行的。進(jìn)行特定的測試 程序以便符合并接受所要求的AABB或其他專門組織檢定并且如適用的話遵循特定的當(dāng)前 和將來的FDA條例。將無菌樣品保持在室溫下直到送到污染測試實驗室。
[0089] 通過消毒該客戶樣品容器的頂口之一，通過用70%或無菌醇以拭子擦拭、并且添 加限定量值的鹽溶液來清洗該脂肪組織樣品。該限定的量值是至少等于脂肪組織樣品的體 積以便有效地清洗它。通過使用一個60cc的注射器(具有一個18計量針頭）添加該鹽溶 液，例如漢克平衡鹽溶液（Hank，s Balanced Salt Solution) (HBSS)。
[0090] 輕輕地?fù)u動該客戶樣品容器并且允許其靜置不受干擾持續(xù)限定的時間段；約五分 鐘。使用用于獲得該無菌樣品的同一口移出該洗液并將其丟棄。允許該容器"吊起"在一 個高的位置不受干擾直到觀察到脂肪以一個單層漂浮在該容器的頂部。將從該脂肪組織樣 品中分散出的油移出。
[0091] 將制備的消化溶液注入該客戶樣品容器(具有該客戶/脂肪組織樣品)以便在該客 戶樣品容器內(nèi)形成一種消化混合物。用醇拭子擦拭消化溶液(如早先討論的一樣解凍用于 在此使用）小瓶的外面以便確保無菌。
[0092] 使用無菌的2ml移液管將該溶液轉(zhuǎn)移至50mL的離心管(含有預(yù)熱至37攝氏度的 48mL HBSS)中。蓋上該管并且通過輕度振蕩混合。這種稀釋比的基礎(chǔ)是酶母液的濃度和 酶活性，它們是基于（i.)產(chǎn)品科學(xué)試驗報告（ii.)經(jīng)驗，以及（iii.)本領(lǐng)域中所已知的。 本申請的方法通過將酶稀釋基于比活性而不是質(zhì)量消除了這種變量，使得該方法更可再現(xiàn) 的；對于一種商業(yè)方法是關(guān)鍵性的。
[0093] 使用該客戶樣品容器的頂口之一將該消化溶液注入這個清洗過的脂肪組織樣品 中。將該消化混合物在37攝氏度下孵育45分鐘同時在每分鐘24擺的擺動平臺上振蕩。在 消化結(jié)束時，將該脂肪組織從一種尺寸上高達(dá)4毫米的組織碎片的懸液液轉(zhuǎn)化為一種更均 勻的（smoother)懸液液，其中大多數(shù)組織碎片直徑上小于1毫米，如將大多數(shù)脂肪組織解 離成分離的成熟脂肪細(xì)胞和基質(zhì)-血管部分細(xì)胞，盡管一些發(fā)白的結(jié)締組織可能仍然是完 整的。此后，以低的速度離分該溶液以便將成熟脂肪細(xì)胞從該消化混合物的其余部分中離 分出來。
[0094] 通過一個無菌的40微米的濾網(wǎng)將離心過的消化混合物的基質(zhì)血管部分（"SVF"） 相收回。在該客戶樣品容器內(nèi)的消化混合物的離心用于將SVF從這些脂肪細(xì)胞和未消化的 脂肪組織中離分出來。將這種SVF從該客戶樣品容器移至一個離心管中并且再離心允許在 該管的底部形成一種"緊密的"小粒(如在此所討論的)，這樣使得可以移出大于百分之95， 并且多達(dá)百分之99的酶溶液。
[0095] 從該客戶樣品容器移出后，在兩個50mL的管中將過濾過的消化混合物的懸浮液 離心，從而分離一種"第一"基質(zhì)血管小粒。移出離心過濾的懸浮液的上清液。通過在一種 紅血細(xì)胞溶解緩沖劑中研磨來使該基質(zhì)血管"緊密"第一小粒再懸浮，消除紅血細(xì)胞，以及 移出殘留的酶和碎片，從而形成一種細(xì)胞懸浮液，將這種細(xì)胞懸浮液離心以便形成一種"第 二"小粒。移出離心過的細(xì)胞懸浮液的上清液。
[0096] 通過滴定添加 HBSS使該第二小粒再懸浮而形成一種"第二細(xì)胞懸浮液"。對該第 二細(xì)胞懸浮液計數(shù)并且通過使用小等分部分（20微升）的該第二細(xì)胞懸浮液(與等體積的 口丫陡橙和碘化丙錠色素的混合物混合）對有效性進(jìn)行分析并且使用Nexcelom Cellometer Vision 器械（Nexcelom Biosciences)計數(shù)。 將該第二細(xì)胞懸浮液離心以便形成一種"第三"小粒，將該小粒存儲在一個生物安全柜 中用于進(jìn)一步加工。
[0097] 該"第三小粒"限定了一種干細(xì)胞小粒產(chǎn)品，例如清洗過的SVF小粒，它包括以下 各項的細(xì)胞的混合物：前脂肪細(xì)胞、脂肪衍生的間質(zhì)干細(xì)胞、微血管內(nèi)皮細(xì)胞、內(nèi)皮祖細(xì)胞、 單核細(xì)胞、以及少量的血管平滑肌細(xì)胞。該混合物必須不含有成熟的脂肪細(xì)胞，并且在該混 合物中的至少1%的有核細(xì)胞必須是脂肪衍生的間質(zhì)干細(xì)胞?；旌衔锘?干細(xì)胞小粒產(chǎn)物" 或"清洗過的SVF小粒"必須呈現(xiàn)不小于35%的對于吖啶橙/碘化丙錠或臺盼藍(lán)染料排斥 測定的結(jié)合活力。進(jìn)一步地，其中含有的脂肪衍生的間質(zhì)干細(xì)胞當(dāng)置于與細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域中 的普通技術(shù)人員已知的在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件下的適合的培養(yǎng)基的接觸中時必須能夠增殖。
[0098] 在一個T25培養(yǎng)瓶中接種（plate)最小量的1.0 xltl6SVF ("第三小粒"）用于裝運 至化妝產(chǎn)品加工設(shè)施("CCPF"）加上一個額外的用于產(chǎn)生備份"PI"的燒瓶，用于在指定的 存儲設(shè)施中存儲。對于該化妝產(chǎn)品加工設(shè)施燒瓶的接種相對于總SVF產(chǎn)率應(yīng)該是如下的規(guī) 模：
【主權(quán)項】
1. 一種用于加工和生產(chǎn)干細(xì)胞化妝品的商業(yè)方法，該方法包括以下步驟： a. 指定一種基于干細(xì)胞的生物材料； b. 針對限定的用于收集、加工、和運輸這種基于干細(xì)胞的生物材料的服務(wù)收取一定的 費用； c. 獲得這種基于干細(xì)胞的生物材料； d. 對這種基于干細(xì)胞的生物材料進(jìn)行加工以便形成至少一種生物產(chǎn)品； e. 對該至少一種生物產(chǎn)品進(jìn)行測試用于質(zhì)量控制； f. 制備一種用于特定化妝產(chǎn)品的載體配制品；并且 g. 將該至少一種生物產(chǎn)品與該用于特定化妝產(chǎn)品的載體配制品結(jié)合以便獲得一種特 定化妝產(chǎn)品。
2. 如權(quán)利要求1所述的商業(yè)方法，其中該商業(yè)方法包括對該至少一種生物產(chǎn)品進(jìn)行深 冷保存。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的商業(yè)方法，其中該商業(yè)方法進(jìn)一步包括由一位服務(wù)提供者 使用該特定化妝產(chǎn)品來協(xié)調(diào)一種化妝程序。
4. 如權(quán)利要求3所述的商業(yè)方法，其中根據(jù)一位客戶的再次訂購可以重復(fù)步驟d、e、f 和g以便從該至少一種生物產(chǎn)