一種桑葚多糖的提取方法及其產(chǎn)品的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種桑葚多糖的提取方法及其產(chǎn)品，屬于中藥提取技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 桑葚（Fructus Mori)又名桑率、桑果、葚子、烏葚等，是?？粕俣嗄晟淙~喬木 桑樹的成熟果穗的統(tǒng)稱，原產(chǎn)于中國中部約有四千年的栽培史，品種較多栽培范圍廣泛，資 源較為豐富。新鮮桑葚不但有甘美的滋味，并且含有大量的維生素、氨基酸、礦物元素、微 量元素、無機(jī)鹽類、果膠、黃酮、生物堿、酚類及糖類等多種營養(yǎng)成分，又具有食用和醫(yī)療保 健的作用，因而被廣大人群所喜愛。桑葚是被國家衛(wèi)生部列為首批"既是食品又是藥品"的 農(nóng)產(chǎn)品之一。我國許多中醫(yī)名著如《本草綱目》、《中藥大辭典》等，認(rèn)為桑葚性寒，具有滋陰 養(yǎng)血、鎮(zhèn)靜安神、補(bǔ)肝益腎、養(yǎng)顏益智、烏發(fā)明目、生津止渴、延年祛斑、降壓消渴和解酒的功 效，還可以用于治療肝腎陽虛、心悸失眠、腸燥便秘、須發(fā)早白等癥。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對桑葚 進(jìn)行藥理、藥效毒理測試的研究，發(fā)現(xiàn)桑葚具有促進(jìn)造血細(xì)胞的生長，提高動物體內(nèi)酶的活 性，抗誘變，抗菌，抗病毒，抗輻射，抑制腫瘤及有害物質(zhì)的生成，增強(qiáng)免疫力、抗寒功能及耐 勞能力，抗氧化，延緩細(xì)胞衰老，防止血管硬化，調(diào)節(jié)血糖和血脂，護(hù)肝等功效。
[0003] 桑葚多糖是由多個相同或不同的單糖以糖苷鍵連接而成的高聚合物，具有較為廣 泛的生物活性。主要包括參與機(jī)體代謝、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、延緩細(xì)胞衰老、防止血管硬化、防 衰老、調(diào)節(jié)血糖、抗菌、抗病毒、抗輻射、抑制腫瘤、抗氧化等生物活性。
[0004] 《桑葚多糖提取、純化分離及其降糖作用的研究》（趙喜蘭，《食品工業(yè)科技》，2011 年第2期）公開了一種用回流提取并經(jīng)樹脂純化得到桑葚多糖的方法?！渡］囟嗵翘崛》?法的比較》（劉勝利等，《安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)》，2012年第5期）中對不同的桑葚多糖提取方法進(jìn) 行了比較。
[0005] 傳統(tǒng)的桑葚多糖提取方法主要有回流提取法、超聲波輔助提取法、熱水提取法、堿 提取法或酸提取法，總體上呈現(xiàn)提取效率低、提取得率低、工藝復(fù)雜、污染環(huán)境等諸多缺陷， 不適合工業(yè)化大生產(chǎn)。因此提供一種高效、安全環(huán)保、工藝簡單的提取方法，顯得尤為必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種桑葚多糖的提取方法，采用 生物酶酶解與超聲相結(jié)合，具有提取效率高、提取物得率高、安全環(huán)保，適合工業(yè)化大生產(chǎn) 的特點(diǎn)。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：
[0008] -種桑葚多糖的提取方法，包括以下步驟：
[0009] (1)除雜：將桑葚原料進(jìn)行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0010] (2)脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先后加入乙醇、乙醚進(jìn)行回流， 回流完畢后，晾干，備用；
[0011] (3)將步驟（2)所得產(chǎn)物置于容器中，加入水，調(diào)節(jié)pH值，保溫，加入葡萄糖氧化酶 進(jìn)行酶解；
[0012] (4)將步驟⑶中酶解產(chǎn)物進(jìn)行超聲處理，得提取液；
[0013] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮，醇沉兩次，離心，收集沉淀物，沉淀物 用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。
[0014] 進(jìn)一步地，前述提取方法，包括以下步驟：
[0015] (1)除雜：將桑葚原料進(jìn)行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0016] (2)脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先加入75%~100%乙醇回流 兩次，再加入90%~100%乙醚回流兩次，每次回流60~150分鐘，回流完畢后，晾干，備 用；
[0017] (3)將步驟（2)所得產(chǎn)物置于容器中，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量6~25倍的水， 調(diào)節(jié)pH值為3~7,保持溫度在25°C~75°C，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量0. 001~0. 006 倍的葡萄糖氧化酶進(jìn)行酶解，酶解時間為15~120分鐘；
[0018] (4)將步驟（3)中酶解產(chǎn)物進(jìn)行超聲處理，超聲頻率為20~lOOKHz，時間為10~ 40分鐘，得提取液；
[0019] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/5~1/3,乙醇沉淀兩 次，兩次均加入4~6倍體積、濃度為90 %~100 %的乙醇，均放置于3 °C~5 °C下保持 12h~48h ;醇沉后離心，收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提 取物。
[0020] 更優(yōu)選的提取方法，包括以下步驟：
[0021] (1)除雜：將桑葚原料進(jìn)行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0022] (2)脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先加入無水乙醇回流兩次，再加 入無水乙醚回流兩次，每次回流105分鐘，回流完畢后，晾干，備用；
[0023] (3)將步驟⑵所得產(chǎn)物置于容器中，加入步驟⑵所得產(chǎn)物重量11倍的水，調(diào) 節(jié)pH值為5,保持溫度在58°C，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量0. 003倍的葡萄糖氧化酶進(jìn)行 酶解，酶解時間為38分鐘；
[0024] (4)將步驟⑶中酶解產(chǎn)物進(jìn)行超聲處理，超聲頻率為80KHz，時間為20分鐘，得 提取液；
[0025] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/4,乙醇沉淀兩次，兩次 均加入5倍體積、濃度為95%的乙醇，均放置于4°C下保持30h ;醇沉后離心，收集沉淀物， 沉淀物用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。
[0026] 前述提取方法中，所述的葡萄糖氧化酶為0. 2wt%~0. 4wt%葡萄糖氧化酶水溶 液。
[0027] 以上所述桑葚多糖的提取方法提取得到的桑葚多糖提取物。
[0028] 前述的桑葚多糖提取物中含有多糖、糖醛酸、蛋白質(zhì)和硫酸酯，其中多糖的重量百 分含量大于55%，糖醛酸的重量百分含量大于12%。
[0029] 前述桑葚多糖提取物，按照重量百分?jǐn)?shù)計(jì)，其中含有多糖6 5 %~7 0 %、糖醛酸 16%~21 %、蛋白質(zhì)1 %~2%和硫酸酯5%~7%。
[0030] 進(jìn)一步地，按照重量百分?jǐn)?shù)計(jì)，前述桑葚多糖提取物中含有多糖67. 9%、糖醛酸 18. 5%、蛋白質(zhì)1. 6%和硫酸酯6. 2%。
[0031] 前述桑葚多糖提取物中，所述多糖由質(zhì)量比為1.8~2.4 : 0.3~1 : 1.9~ 2.5 : 60~61 : 2. 8~3.4 : 18~18.8 : 12. 2~13的鼠李糖殘基、巖藻糖殘基、木糖 殘基、甘露糖殘基、半乳糖殘基、半乳糖醛酸殘基和葡萄糖殘基組成。
[0032] 進(jìn)一步地，前述桑葚多糖提取物中，所述多糖由質(zhì)量比為 2. 1 : 0.6 : 2.2 : 60. 5 : 3.1 : 18.4 : 12. 5的鼠李糖殘基、巖藻糖殘基、木糖殘基、甘 露糖殘基、半乳糖殘基、半乳糖醛酸殘基和葡萄糖殘基組成。
[0033] 為了確保本發(fā)明的桑葚多糖的提取方法科學(xué)、合理，發(fā)明人進(jìn)行了相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研 究和篩選，才得以確定本發(fā)明的技術(shù)方案。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下：
[0034] 1?儀器與試藥
[0035] 1. 1 儀器
[0036] 三角瓶、具塞試管、移液管、量筒、燒杯、試劑瓶、容量瓶、離心管、電子天平、臺 秤、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、水浴鍋、高速萬能粉碎機(jī)、紫外可見分光光度計(jì)、 PHS-3C+酸度計(jì)（pH精確0. 01)、溫度計(jì)、冰柜、恒溫培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀等。
[0037] 1. 2 試藥
[0038] 如表1所示。
[0039] 表 1
[0040]
[0041] 2?方法與結(jié)果
[0042] 2. 1桑葚多糖提取工藝
[0043] 2. 1. 1工藝流程
[0044] 原材料一除雜一脫脂、脫色一加適量水一調(diào)節(jié)適當(dāng)pH、溫度一酶解一超聲一過濾、 濃縮一醇沉一桑葚多糖提取物
[0045] 2. 1. 2操作過程
[0046] A?桑葚預(yù)處理過程：
[0047] 1)用清水將原料進(jìn)行水洗，去除桑葚原料中的雜質(zhì)，干燥，粉碎，備用；
[0048] 2)將1)中粉碎的桑葚置于容器中，加入75%~100%的乙醇，回流兩次，每次回流 60~150分鐘；
[0049] 3)加入90%~100%的乙醚，回流兩次，每次回流60~150分鐘，晾干，備用。
[0050] B.酶解過程：將A項(xiàng)中所得產(chǎn)物置于容器中，加入7K，水的用量為A項(xiàng)中所得產(chǎn)物 重量6~25倍，調(diào)節(jié)pH值為3~7,保持溫度在25°C~75°C，加入葡萄糖氧化酶，酶的用量 為A項(xiàng)中所得產(chǎn)物重量的0. 001~0. 006倍，進(jìn)行酶解，酶解時間為15~120分鐘。
[0051] C.超聲過程：將B項(xiàng)中酶解產(chǎn)物進(jìn)行超聲處理，超聲頻率為20~lOOKHz，時間為 10~40分鐘，得提取液。
[0052] D.醇沉過程：將提取液趁熱過濾，得濾液，濃縮濾液至原來體積的1/5~1/3,醇沉 兩次，兩次均加入4~6倍體積、濃度為90 %~100 %的乙醇，均放于溫度3 °C~5 °C的環(huán)境 下并且保持12~48小時進(jìn)行醇沉，醇沉后離心，收集沉淀。沉淀用無水乙醇反復(fù)洗滌，干