[0036] 從上述試驗(yàn)結(jié)果可以看出：以乙腈-水作為流動(dòng)相，體積比為25:75時(shí)，出峰時(shí)間 合適，分離度好，實(shí)現(xiàn)了對二苯乙烯苷順反異構(gòu)體很好的分離。（乙腈-水作為流動(dòng)相的分 析液相色譜圖見圖la、圖Ib和圖Ic)。
[0037] 實(shí)施例2 :何首烏中順式和反式二苯乙烯苷對照品的制備
[0038] (1)何首烏中二苯乙烯苷粗提物的制備
[0039] 何首烏藥材500g，粉粹，70 %乙醇超聲提取2次，每次0. 5h，過濾，合并濾液，減壓 濃縮至無醇味。濃縮液用等體積石油醚萃取3次，萃取后水相用氨水調(diào)pH至10,用等體積 乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯相減壓濃縮，得提取物3g，冰箱中冷藏保存?zhèn)溆谩?br>[0040] (2)半制備高效液相色譜分離純化
[0041] 將步驟（1)的提取物用甲醇溶解，再用微孔濾膜（0.45 μπι)進(jìn)行過濾，制得樣 品液，采用半制備高效液相色譜進(jìn)行純化，色譜條件為：色譜柱為Shim-pack PREP-ODS 柱（20mmX250mm，15 μπι)，流動(dòng)相為乙腈-7義，體積比25:75,流速10mL/min，檢測波長為 320nm，進(jìn)樣量為200 μ L，收集色譜峰，采用高效液相色譜法檢測其純度，合并相同餾分，即 分離得到順式和反式二苯乙烯苷對照品，順式-二苯乙烯苷的純度為98. 90%，反式-二苯 乙烯苷的純度為99. 66%。
[0042] 重復(fù)進(jìn)樣，連續(xù)制備，制備液相色譜圖見圖2,圖2中I為順式-二苯乙烯苷，II為 反式-二苯乙稀苷。
[0043] 對制備的產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，結(jié)果如下：
[0044] 峰 1(圖 2 中 I): ESI-MS m/z 405 [M-H] . 1H-NMR (DMSO, IOlMHz) δ Η 7.73(lH,d，J = 12.4Hz,H-a)，7.03(2H，d，J = 8.4Hz,H-2'，6'），6.61(2H，d，J = 8. 4Hz, H-3'，5，），6. 40 (1H, d, J = 12. 4Hz, H- β )，6. 15 (1H, d, J = 2. 4Hz, H-6)，6. 02 (1H, d，J =2. 4Hz，H-4)，4.40(1? d，J = 8.0Hz，H-l"），3.23-3. 70 (6H，m，H-2"，6"）.13C-NMR(DMS 0, 400MHz) δ c 157. 0 (C-4? ), 154. 4 (C-3), 150. 6 (C-5), 136. 8 (C-2), 132. 6 (C- β ), 130. 5(C-2'，6'），130.0 (C-l'），128. 0(C-a )，125. 2(C-1), 115. 4(C-3'，5'），106. 8(C-1"），106. 5 (C-6), 103. 2(C-4), 77. 7(C-5"），76. 7(C-3"），74. 5(C-2"），70. 2(C-4"），61. 3(C-6"）。 通過與文獻(xiàn)（董麗華，郭盼盼，郭棟，閆文英，王春英.順式二苯乙烯苷的制備及結(jié) 構(gòu)鑒定，河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014, 35(2) :166-169)比較，鑒定為順式-二苯乙烯苷 (Cis-2, 3, 5, 4' -tetrahydroxy stilbene_2-〇-β -D-glycoside)〇
[0045] 峰 2 (圖 2 中 II) :ESI-MS m/z 405 [M-H] · 1H-NmiUDMSO, 101MHz) δ H 7.67(lH，d，J = 16.4Hz，H-a)，7.44(2H，d，J = 8.4Hz，H-2'，6'），6.88(lH，d，J = 16. 4Hz, H- β )，6. 74 (2H, d, J = 8. 4Hz, H-3'，5，），6. 54 (1H, d, J = 2. 8Hz, H-6)，6. 18 (1H, d，J =2. 8Hz，H-4)，4. 40 (1H，d，J = 8. OHz，H-l")，3. 68 (1H，d，J = 11. 2Hz，H-6")，3. 55 (1H，dd，J =11.2, 4. 4Hz，H-6"），3.23-3. 35 (4H，m，H-2"，5"）.13C NMR(DMSO, 400MHz) δ c 157.6 (C-4， )，155. 1(05)，151. 1(03)，136.8(02)，132.4(01)，129.0(01'），128.9(0)，128.6(C-2'，6 '），121. 0(C-)，115. 9(C-3'，5'），107. 2(C-1"），103. l(C-4)，101. 5(C-6)，77. 6(C-5"），76. 6( C-3")，74. 5 (C-2")，69. 8 (C-4")，61. 2 (C-6")。通過與文獻(xiàn)（萬近福，楊昌紅，董明，韋建 榮.珍珠菜的化學(xué)成分研究，天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2011，23:59-62)比較，鑒定為反式-二 苯乙稀苷（Trans-2, 3, 5, 4, -tetrahydroxystilbene-2-Ο-β -D-glycoside) 〇
[0046] 上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種何首烏中順式和反式二苯乙烯苷對照品的制備方法，其特征在于，包括以下步 驟： (1) 將何首烏藥材干燥，粉碎，加入體積濃度為60-80 %的乙醇溶液提取，乙醇溶液的 加入體積與何首烏藥材的質(zhì)量比為lg: (6-10)ml，提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，得濃縮 液； (2) 向步驟（1)制得的濃縮液中加入石油醚萃取，萃取后的水相調(diào)節(jié)pH至9-11，加入 乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相濃縮，得提取物； (3) 將步驟（2)的提取物采用半制備高效液相色譜進(jìn)行分離純化，色譜條件為：色譜柱 為Shim-pack PREP-ODS柱，流動(dòng)相為乙腈-水，體積比25:75,收集色譜峰，檢測其純度，合 并相同餾分，即分離得到順式和反式二苯乙烯苷對照品。2. 如權(quán)利要求1所述的何首烏中順式和反式二苯乙烯苷對照品的制備方法，其特征在 于，步驟（1)中，加入乙醇溶液進(jìn)行超聲提取，提取次數(shù)為2-4次，每次0. 5-1小時(shí)。3. 如權(quán)利要求1所述的何首烏中順式和反式二苯乙烯苷對照品的制備方法，其特征在 于，步驟（2)中，石油醚的加入量與濃縮液的體積比為I :(1-2)。4. 如權(quán)利要求1所述的何首烏中順式和反式二苯乙烯苷對照品的制備方法，其特征在 于，步驟⑵中，乙酸乙酯的加入量與濃縮液的體積比為I :(1-2)。5. 如權(quán)利要求1所述的何首烏中順式和反式二苯乙烯苷對照品的制備方法，其特征在 于，步驟（2)中，萃取后的水相中加入氨水進(jìn)行pH調(diào)節(jié)。6. 如權(quán)利要求1所述的何首烏中順式和反式二苯乙烯苷對照品的制備方法，其特征在 于，步驟（3)中，在采用半制備高效液相色譜進(jìn)行分離純化前，將步驟（2)制備的提取物用 甲醇溶解，再用微孔濾膜進(jìn)行過濾，制得樣品液。7. 如權(quán)利要求1所述的何首烏中順式和反式二苯乙烯苷對照品的制備方法，其特征在 于，步驟（3)中，純度檢測采用的方法是高效液相色譜法，色譜條件為：色譜柱為YMC-Pack (：18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水，體積比25:75，流速為1.〇11117111111，檢測波長為32〇11111。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種何首烏中順式和反式二苯乙烯苷對照品的制備方法，包括以下步驟：(1)將何首烏藥材干燥，粉碎，加入乙醇溶液提取，提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，得濃縮液；(2)向濃縮液中加入石油醚萃取，萃取后的水相調(diào)節(jié)pH至9-11，加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相濃縮，得提取物；(3)提取物采用半制備高效液相色譜進(jìn)行分離純化，色譜條件為：色譜柱為Shim-pack？PREP-ODS柱，流動(dòng)相為乙腈-水，體積比25:75，檢測波長為320nm，收集色譜峰，檢測其純度，合并相同餾分，即分離得到順式和反式二苯乙烯苷對照品。本發(fā)明制備得到高純度反式-二苯乙烯苷和順式-二苯乙烯苷單體，為研究其生理活性試驗(yàn)提供了純品。
【IPC分類】C07H1/08, C07H15/203
【公開號(hào)】CN105061524
【申請?zhí)枴緾N201510471926
【發(fā)明人】王岱杰, 王曉, 耿巖玲, 段文娟, 趙恒強(qiáng), 于金倩, 閆慧嬌
【申請人】山東省分析測試中心
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年8月4日