用于治療和診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡的方法
【專利說明】用于治療和診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡的方法
[000。 交叉引用
[0002] 本申請要求2013年3月15日提交的美國臨時專利申請系列號No. 61/792284的 優(yōu)先權(quán)，該申請W引用方式全文并入本文。
【背景技術(shù)】
[0003] 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE)是自身免疫疾病，其可表征為血液中產(chǎn)生不常見的自身抗 體。運(yùn)些自身抗體與它們各自的抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，該免疫復(fù)合物循環(huán)并最終沉積 在組織中。運(yùn)種免疫復(fù)合物沉積導(dǎo)致慢性炎癥和組織損傷。
[0004] 導(dǎo)致狼瘡的異常自身免疫的確切原因是未知的。遺傳基因、病毒、紫外光和藥品可 能都起到一些作用。遺傳因素增加了發(fā)展自身免疫疾病的趨勢，并且諸如狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎和免疫性甲狀腺素亂之類的自身免疫疾病在狼瘡患者的親屬中比普通人群更常見。一 些科學(xué)家相信狼瘡中的免疫系統(tǒng)仍容易受到外部因素（例如病毒或紫外光）的刺激。通常， 狼瘡的癥狀可W僅由短時暴露于日光而突發(fā)或惡化。
[0005] 由于SLE患者可W具有多種癥狀和相關(guān)器官的不同的組合，單一的檢驗(yàn)不能建立 SLE的診斷。為了幫助醫(yī)生改善SLE診斷的精確性，American化eumatismAssociation建 立了 11個標(biāo)準(zhǔn)。運(yùn)11個標(biāo)準(zhǔn)與在SLE患者中所觀察到的多種癥狀密切相關(guān)。當(dāng)個體具有 運(yùn)些標(biāo)準(zhǔn)中的4個或更多，則強(qiáng)烈建議診斷為SLE。但是，疑似SLE的一些患者可能從未發(fā) 展出足夠用于明確診斷的標(biāo)準(zhǔn)。其他患者僅在觀察幾個月或幾年之后便累積足夠的標(biāo)準(zhǔn)。 然而，在一些環(huán)境下，在僅具有運(yùn)些傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)中的幾個標(biāo)準(zhǔn)的患者中，可W診斷為SLE。在運(yùn) 些患者中，一定數(shù)量的患者可能后來發(fā)展出其他的標(biāo)準(zhǔn)，但是許多患者從未發(fā)展出其他標(biāo) 準(zhǔn)。常用于診斷SLE的11個標(biāo)準(zhǔn)為：
[0006] 1-高于臉頰的觀骨的紅斑或"蝴蝶"紅斑
[0007] 2-盤狀皮膚紅斑巧W導(dǎo)致結(jié)瘤的斑片狀發(fā)紅
[0008] 3-光敏感：對暴露日光產(chǎn)生反應(yīng)的皮膚紅斑 [000引 4-粘膜潰瘍：口腔、鼻或喉魄內(nèi)膜的潰瘍
[0010] 5-關(guān)節(jié)炎：手和足的2處或多處腫脹的壓痛關(guān)節(jié)
[0011] 6-胸膜炎/屯、包炎：屯、臟或肺周圍的內(nèi)膜組織的炎癥，通常與呼吸的胸痛有關(guān)
[0012] 7-腎臟異常：異常量的尿蛋白或成堆的細(xì)胞基本組分（稱為管型）
[001引 8-腦刺激：通過癒痛（驚厥）和/或精神病表明
[0014] 9-血細(xì)胞計數(shù)異常：少量的白細(xì)胞或紅細(xì)胞、或者血小板
[001引10-免疫素亂：異常免疫檢驗(yàn)包括抗dsDNS或抗Sm(Smith)抗體、梅毒的假陽性血 液檢驗(yàn)、抗屯、憐脂抗體、狼瘡抗凝物或陽性LEprep檢驗(yàn)，W及
[001引11-抗核抗體：陽性ANA抗體檢驗(yàn)
[0017] 盡管所述的標(biāo)準(zhǔn)作為運(yùn)些特征（區(qū)別狼瘡與其他相關(guān)的自身免疫疾病）的有用的 提示，但是它們不可避免地容易出錯。測定所述的標(biāo)準(zhǔn)的存在或缺乏通常需要說明。如果 自由標(biāo)準(zhǔn)用于測定跡象或癥狀的存在或缺乏，則人們可W容易地將患者在實(shí)際上未患狼瘡 時就診斷為患有狼瘡。相似地，SLE的臨床表現(xiàn)范圍比11個標(biāo)準(zhǔn)所描述的更多，并且在患 者之間每種表現(xiàn)在活性和嚴(yán)重性水平方面彼此不同。使困難診斷進(jìn)一步復(fù)雜的是，SLE的 癥狀在疾病的過程中不斷演化。在一定時間內(nèi)，新癥狀在之前未受影響的器官中可W發(fā)展。 由于傳統(tǒng)上不具有狼瘡的明確檢驗(yàn)，所W通常被誤診。
[0018] 此外，監(jiān)測疾病活性在護(hù)理狼瘡患者中也是成問題的。狼瘡發(fā)展成一系列耀斑或 急性疾病期后有所緩解。耀斑的癥狀（其在患者之間、甚至在相同的患者中變化相當(dāng)大） 包括不適、發(fā)燒、系統(tǒng)性關(guān)節(jié)痛和光敏性（在短暫暴露于太陽后，發(fā)展成紅斑）。狼瘡的其他 癥狀包括脫發(fā)、粘膜潰瘍W及導(dǎo)致胸痛的屯、臟和肺的內(nèi)膜炎癥。
[0019] 在狼瘡中，紅細(xì)胞、血小板和白細(xì)胞可W被祀向，從而導(dǎo)致貧血癥和出血問題。更 嚴(yán)重的是，血管中免疫復(fù)合物沉積和慢性炎癥可W導(dǎo)致腎相關(guān)的間歇性衰竭，從而需要透 析或腎移植。由于在狼瘡中血管是自身免疫應(yīng)答的主要祀物，所W早發(fā)性中風(fēng)和屯、臟疾病 都是平常的。而且，經(jīng)過一定時間后，運(yùn)些耀斑可W導(dǎo)致不可逆的器官損傷。
[0020] 發(fā)明概述
[0021] 在第一方面中，本發(fā)明提供了用于治療處于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SL巧風(fēng)險下的方 法，其包括：
[0022] (a)在由處于患有SLE風(fēng)險之下的受試對象得到的生物樣品中，根據(jù)W下主要標(biāo) 志物的每一種標(biāo)志物的水平來計算受試對象的SLE風(fēng)險得分：
[0023] (I)紅細(xì)胞C4d(EC4d)標(biāo)志物；
[0024] (II)B細(xì)胞C4d@C4d)標(biāo)志物訊 [002引（m)抗核抗體（ANA);
[0026] 其中所述的受試對象處于患有SLE的風(fēng)險之下，并且其中根據(jù)EC4d標(biāo)志物、BC4d 標(biāo)志物、抗Smith(抗Sm)抗體和雙鏈DM抗體（抗dsDNA)的各個水平，所述的受試對象是 SLE陰性的；化及
[0027] 化）至少部分根據(jù)SLE風(fēng)險得分來治療受試對象的SLE或另一種疾病。
[0028] 在另一個方面中，本發(fā)明提供了用于診斷處于SLE風(fēng)險之下的受試對象患有SLE 可能性的方法，其包括：
[0029] (a)根據(jù)EC4d標(biāo)志物、BC4d標(biāo)志物、抗Smith(抗Sm)抗體和雙鏈DNA抗體（抗 dsDNA)的各個水平，測定處于SLE風(fēng)險之下的受試對象為SLE陰性，和
[0030] 化）在由處于患有SLE風(fēng)險之下的受試對象得到的生物樣品中，根據(jù)W下主要標(biāo) 志物的每一種標(biāo)志物的水平來計算SLE風(fēng)險得分：
[0031] (I)紅細(xì)胞C4d(EC4d)標(biāo)志物；
[0032] (II)B細(xì)胞C4d@C4d)標(biāo)志物；和
[003引 （m)抗核抗體（ANA);
[0034] 其中所述的風(fēng)險得分表明了受試對象患有SLE的可能性。
[0035] 在所述的方法的一個實(shí)施方案中，所述的方法進(jìn)一步包括在由所述的受試對象得 到的生物樣品中測定1、2、3或所有4種被排除（rule-out)的標(biāo)志物的水平，其中所述的標(biāo) 志物選自SS-B化a)標(biāo)志物、Scl-70標(biāo)志物、Jo-1標(biāo)志物和CENP標(biāo)志物，并且其中所述的計 算SLE風(fēng)險得分包括根據(jù)主要標(biāo)志物的每種標(biāo)志物W及一種或多種排除的標(biāo)志物的水平 來計算SLE的風(fēng)險得分。
[0036] 在另一個實(shí)施方案中，所述的方法進(jìn)一步包括在由所述的受試對象得到的生物樣 品中測定MCV標(biāo)志物的水平，并且其中所述的計算SLE風(fēng)險得分包括根據(jù)主要標(biāo)志物的每 種標(biāo)志物、一種或動作排除標(biāo)志物和MCV標(biāo)志物的水平來計算SLE風(fēng)險得分。
[0037] 在另一個實(shí)施方案中，計算SLE風(fēng)險得分包括通過一種或多種轉(zhuǎn)化分析來調(diào)節(jié)一 種或多種主要標(biāo)志物的水平。在一個此類的實(shí)施方案中，所述的一種或多種轉(zhuǎn)化分析包括 邏輯回歸分析，并且其中邏輯回歸分析包括：
[0038] (i)調(diào)節(jié)主要標(biāo)志物的每一種標(biāo)志物的水平，從而產(chǎn)生各主要標(biāo)志物的加權(quán)得分， 和
[0039] (ii)將各主要標(biāo)志物的加權(quán)得分結(jié)合，從而產(chǎn)生SLE風(fēng)險得分。
[0040] 在另一個實(shí)施方案中，計算SLE風(fēng)險得分包括通過一種或多種轉(zhuǎn)化分析來調(diào)節(jié)1、 2、3或所有4種被排除的標(biāo)志物的水平。在一個此類的實(shí)施方案中，所述的一種或多種轉(zhuǎn)化 分析包括邏輯回歸分析，并且其中邏輯回歸分析包括：
[0041] (i)調(diào)節(jié)主要標(biāo)志物的每一種標(biāo)志物的水平W及1、2、3或所有4種被排除的標(biāo)志 物的每一種標(biāo)志物的水平，從而產(chǎn)生各主要標(biāo)志物W及1、2、3或所有4種被排除的標(biāo)志物 的加權(quán)得分，和
[0042] (ii)將各主要標(biāo)志物W及1、2、3或所有4種被排除的標(biāo)志物的加權(quán)得分結(jié)合，從 而產(chǎn)生SLE風(fēng)險得分。
[0043] 在另一個實(shí)施方案中，SLE風(fēng)險得分是通過W下方法計算的：
[0044] (a)測定凈平均巧光強(qiáng)度的自然對數(shù)，其中所述的巧光強(qiáng)度是通過巧光激活細(xì)胞 分選術(shù)（FAC巧針對EC4d和BC4d而測定的；
[0045] 化）根據(jù)預(yù)定的闊值來測定ANA是否為陰性（值為0)、中陽性（值為1)或強(qiáng)陽性 (值為2);
[0046](C)測定任何被排除的標(biāo)志物是否落入上述預(yù)定闊值并因此為陽性（值為1)，或 者被排除的標(biāo)志物是否均未落入上述預(yù)定闊值并因此均為陰性（值為0) 及
[0047] (d)將（a)-(c)中測定的值結(jié)合，從而得到SLE風(fēng)險得分。
[0048] 附圖簡述
[0049] 圖1為示出本發(fā)明方法的一個實(shí)施方案的流程圖，其中所述的方法用于根據(jù)細(xì)胞 基補(bǔ)體激活產(chǎn)物的血液樣品水平（包含2個檢測層）來診斷SLE。
[0050] 圖2為在抗dsDNA陰性受試對象中的指數(shù)得分。RA:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；PM/DM:多 肌炎/皮肌炎；Scl:硬皮?。籗S:Sjogren綜合征；NHV:正常的健康志愿者。
[00川發(fā)明詳述
[0052] 本文所述的所有參考文獻(xiàn)均W引用方式并入本文。除非內(nèi)容中清楚地作出相反的 指示，本文所公開的與本發(fā)明相同或不同方面的一個或多個其他實(shí)施方案結(jié)合。
[0053] 除非內(nèi)容中清楚地作出相反的要求，否則在整個說明書和權(quán)利要求書中，詞語"包 括"（動詞形式）、"包括"（分詞形式）等與專用的或窮舉的含義相反，將解釋為包括一切在 內(nèi)的含義；換言之，為"包括但不限于"的含義。此外，使用單數(shù)或復(fù)數(shù)的詞語分別包括復(fù)數(shù) 或單數(shù)。此外，當(dāng)詞語"在此"、"上文"、"下文"和相似意義的詞語用于本申請中時，是指本 申請作為一個整體，而非本申請的任何特定的部分。如本文所用，除非內(nèi)容中清楚地作出相 反的指示，單數(shù)形式"a"、"an"和"the"包括復(fù)數(shù)指示物。除非明確地作出相反的陳述，否 貝IT和"如本文所用，可W與"或"交換使用。
[0054] 本公開的實(shí)施方案的描述無意于窮舉的，或者將本公開限定為所公開的精確形 式。盡管為了說明本文描述了本公開的具體的實(shí)施方案和實(shí)施例，但是相關(guān)領(lǐng)域的那些技 術(shù)人員將意識到，多種相當(dāng)?shù)男薷目蒞在本公開的范圍內(nèi)。例如盡管方法的步驟或功能W 給定的順序提出，但是備選的實(shí)施方案可不同的順序發(fā)揮功能，或者可基本同時 地發(fā)揮功能。本文提供的公開的教導(dǎo)可W視情況而應(yīng)用于其他過程或方法中。本文所述的 多個實(shí)施方案可W結(jié)合，從而提供其他的實(shí)施方案。
[00巧]在第一方面中，本發(fā)明提供了用于治療處于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SL巧風(fēng)險之下的受 試對象的方法，其包括：
[0056] (a)在由處于患有SLE風(fēng)險之下的受試對象得到的生物樣品中，根據(jù)W下主要標(biāo) 志物的每一種標(biāo)志物的水平來計算受試對象的SLE風(fēng)險得分（也稱為"指數(shù)得分：
[0057] (I)紅細(xì)胞C4d(EC4d)標(biāo)志物；
[0058] (II)B細(xì)胞C4d@C4d)標(biāo)志物訊 [005引（m)抗核抗體（ANA);
[0060] 其中所述的受試對象處于患有SLE的風(fēng)險之下，并且其中根據(jù)EC4d標(biāo)志物、BC4d 標(biāo)志物、抗Smith(抗Sm)抗體和雙鏈DM抗體（抗dsDNA)的各個水平，所述的受試對象是 SLE陰性的；化及
[0061] 化）至少部分根據(jù)SLE風(fēng)險得分來治療受試對象的SLE或另一種疾病。
[0062] 在第二方面中，本發(fā)明提供了用于診斷處于SLE風(fēng)險之下的受試對象患有SLE可 能性的方法，其包括：
[0063] (a)根據(jù)EC4d標(biāo)志物、BC4d標(biāo)志物、抗Smith(抗Sm)抗體和雙鏈DNA抗體（抗 dsDNA)的各個水平，測定處于SLE風(fēng)險之下的受試對象為SLE陰性，和
[0064] 化）在由處于患有SLE風(fēng)險之下的受試對象得到的生物樣品中，根據(jù)W下主要標(biāo) 志物的每一種標(biāo)志物的水平來計算SLE風(fēng)險得分：
[0065] (I)紅細(xì)胞C4d(EC4d)標(biāo)志物；
[0066] (II)