一種合成地加瑞克的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥合成領(lǐng)域，具體涉及一種合成地加瑞克的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 地加瑞克是丹麥輝凌制藥有限公司研發(fā)的促性腺激素釋放激素(GnRH)受體抑制 劑類藥物，可逆性抑制垂體GnRH受體來(lái)減少促性腺激素釋放繼而抑制睪酮的釋放。本品通 過(guò)抑制對(duì)前列腺癌持續(xù)生長(zhǎng)至關(guān)重要的睪酮來(lái)延緩前列腺癌的生長(zhǎng)和惡化。以激素治療前 列腺癌來(lái)降低睪酮濃度的初期卻造成睪酮濃度激增，此初始刺激該激素受體可暫時(shí)性促進(jìn) 腫瘤生長(zhǎng)而不是抑制它，而地加瑞克則不會(huì)。美國(guó)FDA于2008年12月批準(zhǔn)地加瑞克上市，主 要針對(duì)晚期前列腺癌患者，通過(guò)抑制睪丸激素來(lái)延緩前列腺癌的病程發(fā)展。
[0003] m期臨床研究顯示，地加瑞克降低睪酮濃度的效果至少可與亮丙瑞林儲(chǔ)庫(kù)型控釋 注射劑(Lupron Depot)相媲美，而且降低睪酮濃度在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著快。在治療的第3日，本 品組96%達(dá)到去生殖腺的睪酮濃度，亮丙瑞林組效果為0%。第14日，本品組99%達(dá)到去生 殖腺的睪酮濃度，亮丙瑞林組為18%。
[0004] 在臨床研究中，前列腺特異抗原(PSA)濃度可作為監(jiān)測(cè)的第2個(gè)療效判斷終點(diǎn)。使 用地加瑞克2周后降低PSA 64%，1月后85%，3月后95%，在治療的整個(gè)1年中始終抑制PSA。
[0005] 地加瑞克結(jié)構(gòu)式為：
[0006] Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Aph(Hor)-D-Aph(Cbm)-Leu-Lys(iPr)-Pr〇-D-Ala- NH2
[0007] 國(guó)內(nèi)外關(guān)于地加瑞克制備報(bào)道的報(bào)道很多，美國(guó)專利US5925730采用Boc固相合成 方法，該方法規(guī)模很小，僅報(bào)告了純度，產(chǎn)品純度為98%，同時(shí)該方法需要使用氫氟酸(HF) 裂解，對(duì)人和環(huán)境有較大的危害，不適合大規(guī)模工業(yè)合成。
[0008] 中國(guó)專利CN201310336446.7采用Fmoc合成方法，該方法報(bào)道的制備規(guī)模同樣很 小，為了避免Aph(Hor)在堿性條件下重排產(chǎn)物乙內(nèi)酰脲毒性降解產(chǎn)物的產(chǎn)生，在工藝過(guò)程 中采用了固相片段縮合法以及特有保護(hù)氨基酸Aph(Mmt/Dmt)和Aph(Cbm)，操作相對(duì)復(fù)雜， 所使用的保護(hù)氨基酸和片段價(jià)格昂貴，生產(chǎn)成本較高；中國(guó)專利CN201210460195.9采用 Fmoc固相合成方法，該方法報(bào)道的制備規(guī)模同樣很小，為了避免Aph(Hor)在堿性條件下重 排產(chǎn)物乙內(nèi)酰脲的產(chǎn)生，對(duì)Aph采用了可選擇性脫保護(hù)的保護(hù)基Trt，但是其在脫保護(hù)過(guò)程 中采用TFA/DCM，會(huì)導(dǎo)致其采用的保護(hù)氨基酸Lys(iPr，Boc)中Boc部分脫落，從而讓Lys (iPr)裸露的氨基與后續(xù)的L-4,5_，二氫乳清酸反應(yīng)生成新雜質(zhì)，同樣其操作也相對(duì)復(fù)雜， 所使用的保護(hù)氨基酸價(jià)格昂貴，生產(chǎn)成本較高;此外上述2個(gè)專利還存在地加瑞克收率不高 的問(wèn)題，在40%做左右，這些和其總體的合成工藝有關(guān)。
[0009] 中國(guó)專利CN201410427405.4采用Fmoc固相合成方法，該方法操作路線最簡(jiǎn)單，收 率也相對(duì)前述2個(gè)中國(guó)專利高一些，但其無(wú)法避免結(jié)構(gòu)中的Aph(Hor)在堿性條件下重排產(chǎn) 物乙內(nèi)酰脲降解產(chǎn)物的產(chǎn)生，同時(shí)所使用的Aph(Cbm)和Aph(Hor)的保護(hù)氨基酸同樣非常昂 貴，工藝成本較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種新的合成地加瑞克的方法，使得本發(fā)明所 述方法在保證地加瑞克的純度前提下提高其總收率，且同時(shí)避免重排產(chǎn)物乙內(nèi)酰脲的產(chǎn) 生。
[0011] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0012] -種合成地加瑞克的方法，包括以下步驟：
[0013] 步驟1、保護(hù)的D-丙氨酸在縮合試劑和活化試劑作用下和氨基偶聯(lián)有保護(hù)基的氨 基樹(shù)脂進(jìn)行酯化反應(yīng)，得到肽樹(shù)脂1;
[0014] 步驟2、按照地加瑞克氨基酸序列C端到N端的順序，從肽樹(shù)脂1出發(fā)，在縮合試劑和 活化試劑作用下，將保護(hù)的Pro、保護(hù)的Lys(ipr)、保護(hù)的Leu和Boc-D-Aph(Fmoc)進(jìn)行逐一 延伸偶聯(lián)，然后去除D-Aph(Fm 〇c)中的側(cè)鏈Fmoc保護(hù)基生成D-Aph(NH2)，獲得肽樹(shù)脂2,所述 保護(hù)的Lys(ipr)為保護(hù)的Lys(ipr，Z);
[0015] 步驟3、將肽樹(shù)脂2中D_Aph(NH2)中的側(cè)鏈氨基在有機(jī)堿的催化下與叔丁基異氰酸 酯反應(yīng)生成D-Aph( tBu-Cbm)，獲得肽樹(shù)脂3;
[0016] 步驟4、按照地加瑞克氨基酸序列C端到N端的順序，從肽樹(shù)脂3出發(fā)，在縮合試劑和 活化試劑作用下，依次延伸偶聯(lián)保護(hù)的Aph(Boc)、保護(hù)的Ser(Bzl)、保護(hù)的D-Pal、保護(hù)的D-Cpa、保護(hù)的Ac-D-Nal，得到肽樹(shù)脂4;
[0017] 步驟5、脫除肽樹(shù)脂4中保護(hù)的Aph(Boc)中的側(cè)鏈Boc保護(hù)基，在縮合試劑和活化試 劑作用下接入L-4，5-，二氫乳清酸，獲得地加瑞克樹(shù)脂；
[0018] 步驟6、地加瑞克樹(shù)脂經(jīng)酸解劑酸解后獲得地加瑞克粗品，所述酸解劑為溴化氫的 三氟醋酸溶液；
[0019] 步驟7、地加瑞克粗品純化后獲得地加瑞克純品。
[0020] 地加瑞克主鏈氨基酸有10個(gè)，組成如下：
[0021 ] Ac-D-Na 11-D-Cpa2-D-Pal 3-Ser4-Aph (Hor) 5-D~Aph (Cbm) 6-Leu7-Ly s (iPr) 8-Pro9- D_Ala10_NH2 〇
[0022] 其中，地加瑞克C端的氨基為采用酸解劑從氨基樹(shù)脂上裂解下來(lái)的氨基，其并不屬 于氨基酸上的氨基。
[0023] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中采用的合成工藝易造成地加瑞克總收率較低，且易產(chǎn)生重 排產(chǎn)物乙內(nèi)酰脲的缺陷，本發(fā)明整體將地加瑞克的合成從第5位和第6位氨基酸處分為兩個(gè) 部分進(jìn)行合成，并針對(duì)其中的部分保護(hù)氨基酸采用適宜的保護(hù)基，最后配合使用特定的酸 解劑完成整個(gè)合成過(guò)程，在保證純度的前提下，提高地加瑞克的總收率，并完全避免排產(chǎn)物 乙內(nèi)酰脲的產(chǎn)生。
[0024] 本發(fā)明所述保護(hù)基是在氨基酸合成領(lǐng)域常用的保護(hù)氨基酸主鏈以及側(cè)鏈上氨基、 羧基等干擾合成的基團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)，防止氨基、羧基等在制備目標(biāo)產(chǎn)物過(guò)程中發(fā)生反應(yīng)，生 成雜質(zhì)，如本發(fā)明通過(guò)Bzl保護(hù)基保護(hù)絲氨酸的側(cè)鏈;通過(guò)Z保護(hù)基保護(hù)N 6-(l-甲基乙基)賴 氨酸(Ly s (ipr))的側(cè)鏈，通過(guò)Boc保護(hù)第五位Aph。此外，在本發(fā)明所述方法涉及的保護(hù)的氨 基酸中，N端均優(yōu)選通過(guò)Fmoc保護(hù)基進(jìn)行保護(hù)。被保護(hù)基保護(hù)的氨基酸稱為保護(hù)的氨基酸。 作；為優(yōu)選，驟1所述保護(hù)的D-丙氨酸為Fomc-D-Ala或Boc-D-Ala，步驟2所述保護(hù)的Pro、保 護(hù)的Lys (ipr)、保護(hù)的Leu為：
[0025] Fmoc-Pro、Fmoc_Lys(ipr，Z)、Fmoc_Leu;或Boc-Pro、Boc_Lys(ipr，Z)、Boc_Leu;
[0026] 步驟4所述保護(hù)的Aph(Boc)、保護(hù)的Ser (Bz 1)、保護(hù)的D-Pal、保護(hù)的D-Cpa、保護(hù)的 D-Nal 為：
[0027] Fmoc-Aph(Boc)、Fmoc-Ser(Bzl)、Fmoc-D_Pal、Fmoc-D-Cpa、Fmoc-D_Nal〇
[0028] 作為優(yōu)選，所述氨基樹(shù)脂為MBHA樹(shù)脂。
[0029] MBHA樹(shù)脂的結(jié)構(gòu)式如下，左側(cè)的圓球表示聚苯乙烯樹(shù)脂：
[0031]作為優(yōu)選，所述保護(hù)的D-丙氨酸和氨基偶聯(lián)有保護(hù)基的氨基樹(shù)脂的摩爾比為1-6: 1，更優(yōu)選為2.5-3.5:1。
[0032]作為優(yōu)選，所述氨基樹(shù)脂的取代值為0.2-1.8mm〇l/g氨基樹(shù)脂，更優(yōu)選為0.5_ 1.0mmol/g氨基樹(shù)脂。
[0033] 作為優(yōu)選，所述縮合試劑優(yōu)選為N，N-二異丙基碳二亞胺(DIC)、N，N-二環(huán)己基碳二 亞胺(DCC)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有機(jī)堿(PyBOP/有機(jī)堿）、2-(7_氮 雜-1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯/有機(jī)堿(HATU/有機(jī)堿）、苯并三 氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸鹽/有機(jī)堿(HBTU/有機(jī)堿）、0-苯并三氮唑-N，N，N'，N'_ 四甲基脲四氟硼酸酯/有機(jī)堿(TBTU/有機(jī)堿）中的一種。所述縮合試劑的摩爾用量?jī)?yōu)選為多 肽樹(shù)脂中氨基總摩爾數(shù)的1~6倍，更優(yōu)選為2.5~3.5倍。
[0034] 需要說(shuō)明的是，所述PyBOP/有機(jī)堿、HATU/有機(jī)堿、HBTU/有機(jī)堿、TBTU/有機(jī)堿，在 本發(fā)明中屬于四種雙體系的縮合試劑，即PyBOP、HATU、HBTU在使用時(shí)需要分別和有機(jī)堿組 合在一起成為一種縮合試劑使用，其中所述有機(jī)堿和?780?、撤1'1]、冊(cè)1'1]381'1]的摩爾比優(yōu)選 為為1.3-3.0:1，更優(yōu)選為1.3-2:1。
[0035]作為優(yōu)選，所述縮合試劑中的有機(jī)堿優(yōu)選為N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺 (TEA)或N-甲基嗎啡啉(NMM)，更優(yōu)選為DIPEA。
[0036]作為優(yōu)選，所述活化試劑為1-羥基苯并三唑(HOBt)或N-羥基-7-氮雜苯并三氮唑 (HOAt)。所述活化試劑的用量?jī)?yōu)選為肽樹(shù)脂中氨基總摩爾數(shù)的1~6倍，更優(yōu)選為2.5~3.5 倍。
[0037] 作為優(yōu)選，所述酯化反應(yīng)和延伸偶聯(lián)的反應(yīng)溶劑均采用DMF。
[0038] 本發(fā)明所述延伸偶聯(lián)是指在第一個(gè)氨基酸與氨基樹(shù)脂偶聯(lián)后，剩余氨基酸按照地 加瑞克氨基酸的C端到N端的順序逐個(gè)和前一個(gè)偶聯(lián)的氨基酸發(fā)生縮合反應(yīng)(主鏈氨基和羧 基的縮合反應(yīng))進(jìn)行偶聯(lián)。本發(fā)明偶聯(lián)時(shí)，每次延伸偶聯(lián)時(shí)所述保護(hù)的氨基酸和對(duì)應(yīng)肽樹(shù)脂 的摩爾比優(yōu)選為1-6:1，更優(yōu)選為2.5-3.5:1;所述偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為60~300分鐘，更優(yōu) 選為120~180分鐘。需要說(shuō)明的是，本發(fā)明所述肽樹(shù)脂指任意個(gè)數(shù)氨基酸按照地加瑞克氨 基酸順序和氨基樹(shù)脂相連接形成的肽樹(shù)脂，這其中也包括肽樹(shù)脂1。所述對(duì)應(yīng)的肽樹(shù)脂是指 D-Ala和氨基樹(shù)脂偶聯(lián)形成的肽樹(shù)脂l、Pro和肽樹(shù)脂1偶聯(lián)形成的肽樹(shù)脂5、LyS(iPr)和肽樹(shù) 月旨5偶聯(lián)形成的肽樹(shù)脂6、Leu和肽樹(shù)脂6偶聯(lián)形成的肽樹(shù)脂7、B 〇C-D-Aph(Fm〇C)和肽樹(shù)脂7偶 聯(lián)形成的肽樹(shù)脂2、Aph(Boc)和肽樹(shù)脂2偶聯(lián)形成的肽樹(shù)脂8、Ser和肽樹(shù)脂8偶聯(lián)形成的肽樹(shù) 月旨9、D-Pal和肽樹(shù)脂9偶聯(lián)形成的肽樹(shù)脂10、D-