連翹酯苷a對膿毒癥大鼠的治療作用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及膿毒癥的治療領(lǐng)域，具體是一種能降低大鼠的死亡率，并相對延長生存時間的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002]膿毒癥(Sepsis)是指各種致病微生物或其毒素存在于血液或組織中，是機(jī)體對感染的一種全身性炎癥反應(yīng)(SIRS)，是嚴(yán)重感染、重度創(chuàng)傷、大手術(shù)后、重型急性胰腺炎和休克等常見的并發(fā)癥，進(jìn)一步發(fā)展可導(dǎo)致感染性休克、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)和多器官功能障礙綜合征(MODS)，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，對機(jī)體組織器官損傷大、治療難，已經(jīng)成為世界性攻關(guān)難題。國外流行病學(xué)調(diào)查顯示，膿毒癥的病死率已超過急性心肌梗死，每年歐洲和美國死于此病超過35萬人，每年全球有超過1800萬嚴(yán)重膿毒癥病例，且患者數(shù)目每年以
1.5 %速度遞增。每年膿毒癥病人超過300萬人，因此造成多臟衰的死亡人數(shù)高達(dá)50萬人以上。膿毒癥來勢兇猛，病情進(jìn)展迅速，病死率高，給臨床救治帶來極大困難，已成為現(xiàn)代創(chuàng)、燒傷外科及危重病醫(yī)學(xué)面臨的突出難題。
[0003]近年來，國內(nèi)關(guān)于膿毒癥的治療的有關(guān)研究報道主要有，四川醫(yī)學(xué)雜志2011年12月第12期和創(chuàng)傷與急危重病醫(yī)學(xué)2014年I月第I期上分別刊載了 “膿毒癥及其治療研究進(jìn)展”和“膿毒癥和感染性休克治療進(jìn)展”的研究文章。文章中提出膿毒癥的主要治療方案為:1.擴(kuò)容療法，在頸靜脈或鎖骨下中央靜脈內(nèi)插管(CVC)，以便快速補(bǔ)液進(jìn)行液體恢復(fù)；
2.早期正確的抗生素應(yīng)用，要早期靜脈給予廣譜抗生素；3.激素的應(yīng)用，應(yīng)用氫化可的松扭轉(zhuǎn)休克癥狀，降低病死率；4.器官支持治療，如急性腎損傷時要適當(dāng)補(bǔ)液和保持適當(dāng)血管內(nèi)容量、維持適當(dāng)?shù)墓嘧?、避免使用腎毒性藥物。而急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合癥時應(yīng)用機(jī)械通氣進(jìn)行生命支持。
[0004]膿毒癥發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜，確切機(jī)制仍不十分明確，并涉及局部和全身性反應(yīng)的復(fù)雜病理過程，以上療法可以對治療膿毒癥有一定的療效，但其有效特異性不強(qiáng)。我國臨床上使用中藥治療膿毒癥有著長期的用藥經(jīng)驗，如王今達(dá)教授就提出了膿毒癥治療的“三證三法”，即熱證用清熱解毒法，瘀證用活血化瘀法，虛證用扶正固本法；與“菌毒炎并治”細(xì)菌-內(nèi)毒素-炎性介質(zhì)同時治療的方法，將膿毒癥患者的死亡率降低了 50%，并開發(fā)出針對“瘀證”的中藥注射用劑“血必凈”；除活血化瘀法外，還有用清熱解毒方下調(diào)腸道水通道蛋白治療膿毒癥的研究，研究說明清熱解毒方可通過對結(jié)腸水通道蛋白的抑制作用而產(chǎn)生瀉下效應(yīng)治療膿毒癥。目前在大量的臨床觀察及前期動物實驗研究中發(fā)現(xiàn)，中藥連翹對膿毒癥的防治療效甚佳，同時連翹也是歷代溫病學(xué)家手中的利器，研究工作研究中也發(fā)現(xiàn)，連翹提取物對各種革蘭陽性及陰性細(xì)菌有抑制作用。同時體外實驗發(fā)現(xiàn)連翹提取物有很強(qiáng)的摧毀細(xì)菌內(nèi)毒素作用，但是因為中藥成分復(fù)雜，作用機(jī)制尚未完全闡述清楚，影響了其向國際市場的推廣。因此，從中醫(yī)中藥角度出發(fā)，應(yīng)用現(xiàn)代藥理研究方法對中藥進(jìn)行研究，闡明其對膿毒癥的作用機(jī)制，將會是膿毒癥治療進(jìn)展的新的突破點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于闡明連翹對膿毒癥治療的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)理。
[0006]本發(fā)明是采用如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0007]連翹通過50%乙醇大孔樹脂洗脫液，減壓濃縮，回收乙醇，得到洗脫液浸膏354.39g，備用。
[0008]取少量50%乙醇洗脫部位浸膏，無水乙醇溶解，作為樣品，用于點樣。將樣品、對照藥材和連翹苷在硅膠G板上點樣，展開劑分別用氯仿-甲醇、乙酸乙酯-甲醇、乙酸乙酯-乙醇、二氯甲烷-甲醇。每種展開劑按不同的比例配置展開，結(jié)果氯仿-甲醇系統(tǒng)分離間隔好，不拖尾，分離點最多且Rf值合適，是合適的溶劑系統(tǒng)。選擇氯仿-甲醇作為50%乙醇洗脫部位粗分洗脫劑，在該體系中展開，分別用5%香草醛濃硫酸、10%硫酸-乙醇、三氯化鋁試劑顯色，結(jié)果表明5%香草醛濃硫酸顯色明顯，選擇5%香草醛濃硫酸作為顯色劑。用氯仿-甲醇不同比例為展開劑時，可看出不同比例出斑點數(shù)量不同，在10: I左右出點較集中，故采用梯度洗脫時在10: I左右的梯度變換要緩和。
[0009]采用干法上樣，將得到的洗脫液浸膏350g加無水乙醇超聲溶解，用350g硅膠(60-100目)拌樣(I: I拌樣)，在通風(fēng)櫥中揮干溶劑，研磨均勻，即得。
[0010]取硅膠(160-200目)約3000g(l: 8左右)，預(yù)先用氯仿浸泡過夜，濕法裝柱(柱高78cm，柱徑Ilcm)。先用氯仿平衡柱體至液面不再下降，然后將上述樣品緩緩地裝入硅膠柱，邊裝邊敲打使樣品均勻平整的鋪在硅膠上。首先用氯仿洗脫，然后逐漸加入甲醇(0-50% )變換梯度進(jìn)行洗脫。當(dāng)溶劑色帶接近柱底時，開始接收洗脫液，每100ml收集濃縮，薄層色譜對流分實時檢測決定洗脫劑比例的更換。依次為氯仿(12500ml)、三氯甲烷:甲醇=50: I (15000ml),20: I (18000ml)、15: I (22000ml)、10: I (13000ml)、8: I (17000ml)、6: I (21000ml)、5: I (15000ml)、2: I (12000ml)梯度洗脫，經(jīng)薄層檢測合并相同流分，得到9個極性段，從以下3個部分1-1II，三氯甲烷:甲醇(I = 15: K II=10: UIII = 8: I)分離出4個化合物。分離過程見圖8。
[0011]從I部分氯仿:甲醇(15: I)洗脫得到組分Fr.1，將Fr.1濃縮，用熱乙醇溶解后放置，析出大量白色針狀結(jié)晶LQ-1 (2g);從II部分氯仿:甲醇(10: I)洗脫得到組分Fr.2，經(jīng)200-300目硅膠，氯仿:甲醇(4: 1-0: I)梯度洗脫，再經(jīng)反相柱色譜20%-50%甲醇逐級洗脫，得棕黃色粉末LQ-3(0.6g);從III部分氯仿:甲醇(8: I)洗脫得到組分Fr.3，經(jīng)200-300目硅膠，乙酸乙酯:甲醇(7: 1-5: I)梯度洗脫、S^hadex LH-20凝膠柱純化得化合物L(fēng)Q-2(0.1g)和LQ-4(0.1g)，均為黃色粉末。
[0012]在通過運用娃膠柱層析、Saphadex LH-20柱層析、重結(jié)晶等方法從50%連翅乙醇提取物中分離獲得的棕黃色粉末；采用化學(xué)鑒別、核磁共振氫譜(IH-NMR)、核磁共