培養(yǎng)基中，按照同一濃度的不同聚合度瓊膠寡糖 (DP3、DP5、DP8)添加至培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為無氧環(huán)境下，4°C，靜置培養(yǎng)，每隔3天取樣至顯 微鏡下觀察活菌數(shù)量，如表1所示。
[0037] 表1不同聚合度瓊膠寡糖提高保加利亞乳桿菌在低溫貯藏下菌活力
[0038]
[0039]結(jié)果表明，在江蘺菜瓊膠寡糖(DP3)的條件下，對保加利亞乳桿菌在低溫貯藏下的 保護(hù)作用最好。
[0040] 實(shí)施例3:不同濃度江蘺瓊膠寡糖對提高保加利亞乳桿菌在低溫貯藏下菌活力的 影響
[0041] 利用以上制備寡糖方法制備出不同濃度的瓊膠寡糖，將其添加至已發(fā)酵達(dá)到〇D600 值為1.2的保加利亞乳桿菌的MRS培養(yǎng)基中，將聚合度3的不同濃度的瓊膠寡糖（1 g/L、3g/L、 5g/L、7g/L、10g/L)添加至培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為無氧環(huán)境下，4°C，靜置培養(yǎng)，每隔3天取樣 至顯微鏡下觀察活菌數(shù)量，如表2所示。
[0042]表2不同濃度江蘺瓊膠寡糖提高保加利亞乳桿菌在低溫貯藏下菌活力
[0043]
[0045]結(jié)果表明，在江蘺菜瓊膠寡糖濃度為l-10g/L條件下，對保加利亞乳桿菌在低溫貯 藏下具有保護(hù)作用，而在5g/L的條件下，對保加利亞乳桿菌在低溫貯藏下的保護(hù)作用最好。 [0046]實(shí)施例4:不同聚合度瓊膠寡糖對保加利亞乳桿菌在固態(tài)菌劑制備中的作用 [0047]利用以上制備寡糖方法制備出不同聚合度的瓊膠寡糖添加至已發(fā)酵達(dá)到OD 6qo值 為1.2的保加利亞乳桿菌的菌液中，將濃度為5g/L的不同聚合度瓊膠寡糖(DP3、DP5、DP8)添 加至混合液中，通過利用噴霧干燥機(jī)制備固態(tài)菌劑，噴霧干燥機(jī)工作參數(shù)為麥芽糊精添加 量25%，進(jìn)風(fēng)溫度130°(：，進(jìn)風(fēng)速度4111 3/1^11，進(jìn)料速率70〇1111711，空氣壓力0.310^。稱取制備 的固態(tài)菌劑lg進(jìn)行涂布平板測定活菌數(shù)，如圖1所示。
[0048]結(jié)果表明，提高固態(tài)菌劑菌活力的制備中聚合度3-8均有效果，但最優(yōu)寡糖聚合度 為3〇
[0049 ]實(shí)施例5:不同濃度瓊膠寡糖對保加利亞乳桿菌在固態(tài)菌劑制備中的作用 [0050]利用以上制備寡糖方法制備出不同濃度的瓊膠寡糖添加至已發(fā)酵達(dá)到OD600值為 1.2的保加利亞乳桿菌的菌液中，將聚合度為5的不同濃度瓊膠寡糖（lg/L-10g/L)添加至混 合液中，通過利用噴霧干燥機(jī)制備固態(tài)菌劑，噴霧干燥機(jī)工作參數(shù)為麥芽糊精添加量25%， 進(jìn)風(fēng)溫度130°C，進(jìn)風(fēng)速度4m 3/min，進(jìn)料速率700mL/h，空氣壓力0.3MPa。稱取制備的固態(tài)菌 劑lg進(jìn)行涂布平板測定活菌數(shù)，如圖2所示。
[0051] 結(jié)果表明，提高固態(tài)菌劑菌活力的制備中濃度l-10g/L均有效果最優(yōu)寡糖濃度為 5g/L〇
[0052] 實(shí)施例6:瓊膠寡糖提高保加利亞乳桿菌在胃腸模擬液中耐受性作用工藝流程 [0053]利用以上制備寡糖方法制備出聚合度3-8的瓊膠寡糖，將已發(fā)酵達(dá)到OD600值為1.2 的保加利亞乳桿菌的菌液與不同濃度瓊膠寡糖混合，再與胃腸液按l :l(v/v)混合，培養(yǎng)條 件為37 °C水浴加熱反應(yīng)3h，靜置培養(yǎng)，從0時每隔45min取樣進(jìn)行稀釋涂布平板，平板培養(yǎng)條 件為無氧環(huán)境下，在42 °C生物培養(yǎng)箱靜止培養(yǎng)2天，數(shù)菌落數(shù)量，最優(yōu)條件如圖3及圖4所示。 [0054]結(jié)果表明，提高消化道耐受性能力中最優(yōu)寡糖添加量是聚合度為3和濃度為5g/L。 [0055]在本發(fā)明中，平均聚合度3-8和濃度l-10g/L江蘺菜瓊膠寡糖具有提高保加利亞乳 桿菌液體和固態(tài)菌劑制備在保藏過程中活力的作用。本發(fā)明首次利用江蘺菜瓊膠寡糖對益 生菌培養(yǎng)成分進(jìn)行添加或替換，使保加利亞乳桿菌在低溫貯藏下減緩了菌體的死亡，提高 了保加利亞乳桿菌的活性。本發(fā)明延長了保加利亞乳桿菌的保藏時間，且瓊膠寡糖作為益 生元對保加利亞乳桿菌在低溫、消化環(huán)境下的保護(hù)作用大大增強(qiáng)，從而提高了產(chǎn)品益生菌 的品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)價值。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有 變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種瓊膠寡糖作為保護(hù)劑保藏保加利亞乳桿菌的方法，其特征在于:包括以下步驟： 步驟一、制備瓊膠寡糖:將江蘺清洗除雜，烘干，加入江蘺重量30倍的水使江蘺充分溶 脹，置于80°C的水浴中加熱2h;高壓滅菌，121°C滅菌20min;將江蘺趁熱擠膠，用濾布包裹江 蘺，并利用壓力機(jī)擠壓，收集擠膠濾出的多糖溶液，冷卻、烘干、粉碎成顆粒，即得江蘺粗多 糖；將冷卻的粗多糖溶解水中，制成濃度為5g/L的多糖溶液，加入瓊膠酶處理；加酶量為 15% (v/v)，酶活為300U/mL;酶解20-1280min，以制備寡糖溶液，冷凍干燥，或真空干燥成固 體粉末，制得聚合度為3-8的瓊膠寡糖； 步驟二、菌種培養(yǎng):制備MRS培養(yǎng)基，瓊膠寡糖作為碳源，接種保加利亞乳桿菌OD600值為 0.8的菌液，接種量為2 %，無氧環(huán)境下，42 °C，靜置培養(yǎng)2-3天； 步驟三、液體菌保藏:在〇D_值為1.2保加利亞乳桿菌液體中，添加濃度為l-10g/L且聚 合度為3-8的瓊膠寡糖，放置4 °C下貯藏； 步驟四、固體菌劑保藏:在0D6QQ值為1.2保加利亞乳桿菌液體中，添加濃度為5g/L且聚 合度為3的瓊膠寡糖，噴霧干燥制備固體菌劑，噴霧干燥條件為:麥芽糊精添加量25%，進(jìn)風(fēng) 溫度130°C，進(jìn)風(fēng)速度4m3/min，進(jìn)料速度700mL/h，空氣壓力0.3Pa，制備固體菌劑，制備好的 固體菌劑放置在常溫或-20°C貯藏。2. 如權(quán)利要求1所述的一種瓊膠寡糖作為保護(hù)劑保藏保加利亞乳桿菌的方法，其特征 在于:所述步驟一中，酶解時間為20min，制得聚合度為8的瓊膠寡糖。3. 如權(quán)利要求1所述的一種瓊膠寡糖作為保護(hù)劑保藏保加利亞乳桿菌的方法，其特征 在于:所述步驟一中，酶解時間為80min，制得聚合度為5的瓊膠寡糖。4. 如權(quán)利要求1所述的一種瓊膠寡糖作為保護(hù)劑保藏保加利亞乳桿菌的方法，其特征 在于:所述步驟一中，酶解時間為1280min，制得聚合度為3的瓊膠寡糖。5. 如權(quán)利要求1所述的一種瓊膠寡糖作為保護(hù)劑保藏保加利亞乳桿菌的方法，其特征 在于:所述步驟二中，MRS培養(yǎng)基的組成為:牛肉蛋白粉10g、魚肉汁10g，酵母浸出汁粉5g，瓊 膠寡糖20g，醋酸鈉5g，梓檬酸二銨2g，吐溫80 0 . lg，硫酸鎂0.58g，硫酸猛0.28g，蒸溜水 1000ml; 121 °C高壓滅菌15min，調(diào)節(jié)pH6 · 2-6 · 4。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種瓊膠寡糖作為保護(hù)劑保藏保加利亞乳桿菌的方法，包括以下步驟：步驟一、制備瓊膠寡糖；步驟二、菌種培養(yǎng)：制備MRS培養(yǎng)基，瓊膠寡糖作為碳源，接種保加利亞乳桿菌OD600值為0.8的菌液，接種量為2％，無氧環(huán)境下，42℃，靜置培養(yǎng)2-3天；步驟三、液體菌保藏：在0D600值為1.2保加利亞乳桿菌液體中，添加濃度為1-10g/L且聚合度為3-8的瓊膠寡糖，4℃下貯藏；步驟四、固體菌劑保藏：在0D600值為1.2保加利亞乳桿菌液體中，添加濃度為5g/L且聚合度為3的瓊膠寡糖，噴霧干燥制備固體菌劑。本發(fā)明具有提高保加利亞乳桿菌液體和固態(tài)菌劑制備在保藏過程中活力的作用，可用于乳酸菌發(fā)酵企業(yè)及乳制品生產(chǎn)企業(yè)，以生產(chǎn)高活性乳酸菌制品以及高耐藏性的乳制品。
【IPC分類】C12P19/14, C12P19/00, C12R1/225, C12N1/04
【公開號】CN105647808
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】林坤城, 肖安風(fēng), 郭東旭, 鄭毅, 洪清林, 嵇海峰, 姜澤東, 倪輝, 吳昌正
【申請人】福建省綠麒食品膠體有限公司, 集美大學(xué)
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年2月25日