一種對通便寧片中番瀉苷a和番瀉苷b的定量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥品定量檢測領(lǐng)域，具體涉及一種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的 定量檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 通便寧片是一種中藥復(fù)方制劑。它是上市多年、治療便秘臨床療效確切的藥物。通 便寧片處方主要組成為番瀉葉，且是處方中的君藥。番瀉葉含0.53%~0.75%番瀉苷A和 0.55 %~0.72 %番瀉苷B，番瀉苷A和番瀉苷B是番瀉葉最主要活性成分，瀉效最強。中華人 民共和國衛(wèi)生部藥品標準新藥轉(zhuǎn)正標準第十一冊第28頁收載的通便寧片的質(zhì)量標準中，采 用分光光度計法測定總番瀉苷的含量，該方法測定的為蒽醌類組分，不是番瀉葉的主要有 效成分，且操作繁雜、專屬性差、準確性差、重復(fù)性差，不能有效地控制通便寧片的質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種操作方便、專屬性強、準確度好、穩(wěn)定性好的對通便寧 片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法。
[0004] 為解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：
[0005] -種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，運用高效液相色譜法對番 瀉苷A、番瀉苷B進行定量測定，包括如下步驟：
[0006] 1)供試品溶液制備：取通便寧片，研細;精密稱取，然后加入提取溶劑，超聲處理 10-60min，所述提取溶劑的體積與通便寧片的質(zhì)量比例為30-120mL/g;過濾，向濾液中加入 稀鹽酸，加入的稀鹽酸與提取溶劑的體積比為2-8:100;然后振搖萃取2-3次，其中每次振搖 萃取采用的萃取溶劑與提取溶劑的體積比為1:1，取水層，將水層蒸干，將剩下的殘渣用 〇. 1 %的碳酸氫鈉溶液溶解，過濾，收集濾液，即得；
[0007] 2)對照品溶液制備:取番瀉苷A、番瀉苷B，精密稱定，然后用0.1 %的碳酸氫鈉溶液 溶解，得到對照品溶液，所述對照品溶液中番瀉苷A的濃度為10.90-109.Oyg/mL、番瀉苷B的 濃度為21.05-210.5yg/mL;
[0008] 3)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入高效液相色譜儀，測 定，即得；
[0009] 其中，色譜條件為：以體積比為10-40 :90-60的乙腈:酸鹽緩沖液(ρΗ6.8)為流動 相;檢測波長為200-50011111;柱溫為22-48°(：;色譜柱為(：18柱，理論塔板數(shù)按番瀉苷8峰計算 不少于6000。
[0010] 本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述步驟1)中的提取溶劑為質(zhì)量百分濃度為0-0.1 %的 碳酸氫鈉水溶液。
[0011] 本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述步驟1)中的萃取溶劑為三氯甲烷或乙醚。
[0012] 本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述步驟3)中的酸鹽緩沖液為磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩 沖液和甲酸鹽緩沖液中的一種。
[0013] 本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述步驟3)中的理論塔板數(shù)為6000-7000。本發(fā)明中，優(yōu) 選的方案為，所述對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，包括如下步驟：
[0014] 1)供試品溶液制備:取通便寧片，研細;精密稱取0.8g，然后加入提取溶劑25mL，超 聲處理lOmin，所述提取溶劑為質(zhì)量百分數(shù)為0.1%的碳酸氫鈉水溶液;過濾，向濾液中加入 O.lmL稀鹽酸;然后振搖萃取3次，其中萃取溶劑為乙醚，每次振搖萃取采用的乙醚為25mL， 取水層，將水層蒸干，將剩下的殘渣用0.1%的碳酸氫鈉溶液溶解并定量至10mL，過濾，收集 濾液，即得；
[0015] 2)對照品溶液制備：取番瀉苷A對照品、番瀉苷B對照品適量，減壓干燥24小時，置 棕色量瓶中，加0.1 %碳酸氫鈉溶液制成每lml含番瀉苷AO. lmg、番瀉苷B 0.15mg的混合溶 液，搖勻，即得；
[0016] 3)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入高效液相色譜儀，測 定，即得。
[0017] 其中，色譜條件為：以體積比為40:60的乙腈:醋酸鈉緩沖液(ΡΗ6.8)為流動相;檢 測波長為310nm;柱溫為30°C;色譜柱為C18柱，理論塔板數(shù)按番瀉苷Β峰計算為6500。
[0018]本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述通便寧片為廣州白云山奇星藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的通 便寧片。
[0019] 番瀉葉是通便寧片的君藥，對通便寧片的療效起著關(guān)鍵的作用。番瀉葉主要含有 番瀉苷A、番瀉苷B，藥理實驗表明，番瀉苷A、番瀉苷B可能通過抑制鈉-氫交換體(NHE)導(dǎo)致 腸道中水和電解質(zhì)增多而致瀉，從而達到治療便秘的目的?？梢姺瑸a苷A、番瀉苷B為番瀉葉 中的主要有效成分。
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點:本發(fā)明通過的檢測通便寧片中番瀉苷A和 番瀉苷B的含量作為指標，來評價通便寧片的質(zhì)量，并以此來指導(dǎo)通便寧片的生產(chǎn)，具有極 大的現(xiàn)實意義，能夠有效的控制通便寧片的質(zhì)量;并且經(jīng)過大量實驗篩選出的供試品溶液 的制備方法、以及色譜條件，使得本發(fā)明的檢測方法具有操作方便、準確度好、專屬性強和 穩(wěn)定性好的優(yōu)點。
[0021] 下面結(jié)合附圖及【具體實施方式】對本發(fā)明進行詳細說明。
【附圖說明】
[0022] 圖1為實驗例含量測定方法學(xué)驗證中的通便寧片供試品溶液的高效液相色譜圖；
[0023] 圖2為實驗例含量測定方法學(xué)驗證中的對照品溶液的高效液相色譜圖；
[0024] 圖3為實驗例含量測定方法學(xué)驗證中的陰性樣品高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0025]本發(fā)明提供的檢測方法中所用試劑均由市場購得，其中碳酸氫鈉、三氯甲烷、乙 醚、醋酸鈉、磷酸二氫鉀、甲酸鈉為分析純，乙腈為色譜純，通便寧片由廣州白云山奇星藥業(yè) 有限公司制得，對照品番瀉苷A(批號201301)、番瀉苷B(批號201301)購自中國食品藥品檢 定研究院。
[0026] 實施例1
[0027] -種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，運用高效液相色譜法對番 瀉苷A、番瀉苷B進行定量測定，包括如下步驟：
[0028]供試品溶液的制備：取本品20片，精密稱定，研細，取約0.8g，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，加入水25ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液加入稀鹽酸0. lml，用乙醚振搖萃取2次， 每次25ml，水層蒸干，殘渣用0.1 %的碳酸氫鈉溶液溶解成10ml，濾過，濾液作為供試品溶 液；
[0029] 對照品溶液的制備：取番瀉苷A對照品、番瀉苷B對照品適量，減壓干燥24小時，置 棕色量瓶中，加0.1%碳酸氫鈉溶液制成每lml含番瀉苷A 0. lmg、番瀉苷B 0.15mg的混合溶 液，搖勻，即得；
[0030] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10:90的乙 腈一醋酸鈉緩沖液(PH6.8)為流動相;檢測波長為270nm;柱溫為48°C。理論板數(shù)按番瀉苷B 峰計算應(yīng)不低于6000;
[0031] 測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入高效液相色譜儀，測 定，即得。
[0032] 實施例2
[0033] -種對通便寧片中番瀉苷Α和番瀉苷Β的定量檢測方法，具體操作步驟同實施例1， 不同的是供試品溶液的制備步驟中：采用超聲處理30分鐘，用三氯甲烷振搖萃取2次；色譜 條件與系統(tǒng)適用性試驗步驟中：以40:60的乙腈一醋酸鈉緩沖液(pH6.8)為流動相;柱溫為 25。。。
[0034] 實施例3
[0035] -種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，具體操作步驟同實施例1， 不同的是供試品溶液的制備步驟中：加入水50ml，超聲處理20分鐘，用乙醚振搖萃取3次，每 次50ml;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗步驟中：以30:70的乙腈一醋酸鈉緩沖液(pH6.8)為流 動相，檢測波長為310nm;柱溫為35°C〇
[0036] 實施例4
[0037] -種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，具體操作步驟同實施例1， 不同的是供試品溶液的制備步驟中：加入水50ml，超聲處理40分鐘，用三氯甲烷振搖萃取3 次，每次50ml;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗步驟中：以20:80的乙腈一磷酸鹽緩沖液(pH6.8) 為流動相;檢測波長為310nm，柱溫為40°C。
[0038] 實施例5
[0039] -種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，具體操作步驟同實施例1， 不同的是供試品溶液的制備步驟中：加入0.1%碳酸氫鈉25ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液 加入稀鹽酸0.2ml;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗步驟中：以40: 60的乙腈一磷酸鹽緩沖液 (PH6.8)為流動相;檢測波長為310nm，柱溫為25°C。
[0040] 實施例6
[0041] -種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，具體操作步驟同實施例1， 不同的是供試品溶液的制備步驟中：加入0.1%碳酸氫鈉25ml，超聲處理45分鐘;濾過，濾液 加入稀鹽酸0.2ml，用三氯甲烷振搖萃取2次，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗步驟中：以30: 70 的乙腈一磷酸鹽緩沖液(PH6.8)為流動相，檢測波長為310nm;柱溫為35°C。
[0042] 實施例7
[0043] -種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，具體操作步驟同實施例1， 不同的是供試品溶液的制備步驟中：加入0.1%碳酸氫鈉50ml，超聲處理30分鐘;濾過，濾液 加入稀鹽酸0.5ml，用乙醚振搖萃取3次，每次50ml，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗步驟中：以 35:65的乙腈一甲酸鈉緩沖液(pH6.8)為流動相，檢測波長為354nm;柱溫為40°C。
[0044] 實施例8
[0045] -種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，具體操作步驟同實施例1， 不同的是供試品溶液的制備步驟中：加入0.1%碳酸氫鈉50ml，超聲處理60分鐘;濾過，濾液 加入稀鹽酸0.5ml，用三氯甲烷振搖萃取3次，每次50ml，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗步驟 中：以40:60的乙腈一甲酸鈉緩沖液(pH6.8)為流動相，檢測波長為354nm;柱溫為30°C。
[0046] 實施例9