一種川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯的質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥質(zhì)量控制方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于時(shí)間區(qū)間的GC-MS分 離分析法，對(duì)川芎揮發(fā)油中的總苯酞內(nèi)酯進(jìn)行定量分析的控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 對(duì)照品是藥品質(zhì)量評(píng)價(jià)和監(jiān)督檢驗(yàn)工作的關(guān)鍵。在實(shí)際工作中，因有些對(duì)照品本 身價(jià)格昂貴，檢驗(yàn)成本很高，而有些對(duì)照品又由于不穩(wěn)定而無(wú)法提供，這些都影響了對(duì)藥品 含量的測(cè)定，導(dǎo)致藥品質(zhì)量難以控制，是影響藥品質(zhì)量的評(píng)價(jià)和監(jiān)督檢驗(yàn)的一個(gè)重要因素。
[0003] 川芎揮發(fā)油具有擴(kuò)張血管、抗血小板聚集、鎮(zhèn)痛、抗血栓等藥理活性。中國(guó)專利 CN104090045A公開了同時(shí)定量檢測(cè)藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A的方法，主要利用液相色譜-紫 外檢查法測(cè)定丁苯酞、藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A對(duì)照品的響應(yīng)值(即峰面積），分別計(jì)算藁本 內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A與丁苯酞的相對(duì)校正因子，利用相對(duì)校正因子，達(dá)到不采用藁本內(nèi)酯和 洋川芎內(nèi)酯A對(duì)照品就可以測(cè)定中藥材中兩者含量的目的。中國(guó)專利CN101949899A公開了 藁本內(nèi)酯的定量檢測(cè)方法，以丁苯酞為替代對(duì)照品，采用高效液相色譜法測(cè)定被測(cè)樣品中 藁本內(nèi)酯和替代對(duì)照品丁苯酞的峰面積，根據(jù)丁苯酞的濃度，用校正因子計(jì)算被測(cè)成分藁 本內(nèi)酯的濃度。以上兩篇專利分別公開了藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A，以及藁本內(nèi)酯的定量檢 測(cè)方法，而現(xiàn)有的成分分析表明川芎揮發(fā)油中發(fā)揮藥理作用的主要成分為結(jié)構(gòu)相似的苯酞 內(nèi)酯類化合物。因此，測(cè)定芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯的含量至關(guān)重要，對(duì)研究川芎揮發(fā)油的藥 理作用具有重大意義。
[0004] 目前，尚未見關(guān)于川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯定量分析方法的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯的質(zhì) 量控制方法。本發(fā)明建立了一種基于時(shí)間區(qū)間的氣相色譜GC-質(zhì)譜MS分離分析法分析方法， 對(duì)川芎揮發(fā)油的總苯酞內(nèi)酯進(jìn)行了定量分析，為結(jié)構(gòu)相似的有效成分群的質(zhì)量控制提供了 一種新方法。
[0006] 本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：
[0007] 本發(fā)明的一種川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯的質(zhì)量控制方法，也即一種川芎揮發(fā)油中 總苯酞內(nèi)酯的定量分析方法、川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯的檢測(cè)方法，包括：
[0008] 以鄰苯二甲酸二乙酯為內(nèi)標(biāo)品，以丁苯酞和藁本內(nèi)酯為對(duì)照品，采用氣相色譜GC-質(zhì)譜MS分離分析法，分別測(cè)定被測(cè)樣品中內(nèi)標(biāo)品的峰面積1以及丁苯酞和藁本內(nèi)酯之間所 有組分的峰面積之和A t，根據(jù)內(nèi)標(biāo)的濃度匕，用丁苯酞相對(duì)校正因子fls按下述公式計(jì)算被 測(cè)成分總苯酞內(nèi)酯濃度C t:
[0009] Ct = fisXCsXAt/As
[0010] 其中，丁苯酞相對(duì)校正因子fls=l. 0436, 丁苯酞相對(duì)校正因子fls按下式計(jì)算得 到：
[0011] fis=(CiXAs)/(CsXAi)
[0012]式中，Ci為丁苯酞的濃度，Ai為丁苯酞的峰面積。
[0013]所述氣相色譜的條件為：1)載氣為高純氦氣;2)流速為1.0ml/min;3)程序升溫:起 始溫度60°C，以6°C/min的速度升溫至170°C，然后以1.5°C/min的速度升溫至180°C，最后以 25°C/min的速度升溫至250°C，保持2min;4)進(jìn)樣口溫度250°C，檢測(cè)器溫度280°C，分流比 30:1，進(jìn)樣量1.(^1;
[0014] 所述質(zhì)譜的條件為:EI離子源，溫度230°C，電子能量70eV，電子倍增器高壓1100V， 溶劑不延遲。
[0015] 所述內(nèi)標(biāo)品、對(duì)照品和被測(cè)樣品的溶液配制具體如下：
[0016] (1)內(nèi)標(biāo)品貯備液:取鄰苯二甲酸二乙酯，無(wú)水乙醇稀釋成濃度為2.85mg/ml的溶 液，置4°C冰箱保存，備用；
[0017] ⑵對(duì)照品貯備液：
[0018] a.取丁苯酞，無(wú)水乙醇稀釋成濃度為10.72mg/ml的溶液，置4°C冰箱保存，作為對(duì) 照品It備液A;
[0019] b.取藁本內(nèi)酯，無(wú)水乙醇稀釋成濃度為1.75mg/ml的溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配，作為對(duì)照品 貯備液B;
[0020] (3)對(duì)照品溶液:將對(duì)照品貯備液A、對(duì)照品貯備液B和內(nèi)標(biāo)品貯備液混合，用無(wú)水 乙醇稀釋定容，制得對(duì)照品溶液;所述對(duì)照品溶液中，丁苯酞、藁本內(nèi)酯和內(nèi)標(biāo)品的濃度分 別為0 · 2148mg/ml、0 · 70mg/ml和0 · 085mg/ml;
[0021] (4)被測(cè)樣品溶液:稱取川芎揮發(fā)油O.Olg，加無(wú)水乙醇稀釋定容至lml，搖勻，量取 1〇〇μ1，加入30μ1內(nèi)標(biāo)品貯備液，用無(wú)水乙醇稀釋定容至lml棕色量瓶中，搖勻。
[0022] 本發(fā)明的研究意義在于川芎揮發(fā)油中含有多種結(jié)構(gòu)相似的苯酞內(nèi)酯類成分，它們 均為藥理活性成分。由于藁本內(nèi)酯和洋川芎內(nèi)酯A穩(wěn)定性差，常常存在相互之間轉(zhuǎn)化。因此 本發(fā)明建立了一種測(cè)定總苯酞內(nèi)酯含量的方法，而不是其中的一種或兩種成分，如藁本內(nèi) 酯和洋川芎內(nèi)酯A。主要解決兩個(gè)關(guān)鍵問題，一是采用何種方法確定苯酞內(nèi)酯成分，二是確 定后采用何種方法進(jìn)行含量測(cè)定。首先，鑒于川芎揮發(fā)油中含有的苯酞內(nèi)酯類成分結(jié)構(gòu)相 似，因此沸點(diǎn)也相近，在氣相色譜-質(zhì)譜中出峰時(shí)間相對(duì)集中的特點(diǎn)，首先確定了苯酞內(nèi)酯 類成分的保留時(shí)間區(qū)間，在實(shí)際研究中，根據(jù)川芎揮發(fā)油的氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果，確定 了丁苯酞和藁本內(nèi)酯2個(gè)參照物之間的所有色譜峰為總苯酞內(nèi)酯類成分，均予以定量。其 次，利用氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)法，采用鄰苯二甲酸二乙酯為內(nèi)標(biāo)，測(cè)定丁苯酞對(duì)照品和內(nèi)標(biāo) 的響應(yīng)值，計(jì)算兩者的相對(duì)校正因子，默認(rèn)所有苯酞內(nèi)酯類成分具有相同的相對(duì)校正因子， 達(dá)到測(cè)定川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯含量的目的。
[0023] 鑒于川芎揮發(fā)油中含有結(jié)構(gòu)相似的苯酞類內(nèi)酯成分，且在GC-MS色譜中出峰時(shí)間 相對(duì)集中的特點(diǎn)，使用丁苯酞和藁本內(nèi)酯2個(gè)參照物，兩者之間的色譜峰均予以定量(稱為 時(shí)間區(qū)間法）。由于丁苯酞的穩(wěn)定性好(藁本內(nèi)酯穩(wěn)定性差），本發(fā)明以鄰苯二甲酸二乙酯為 內(nèi)標(biāo)品，以丁苯酞和藁本內(nèi)酯為對(duì)照品，采用GC-MS分離分析法，建立了揮發(fā)油中以丁苯酞 為計(jì)的總苯酞內(nèi)酯含量測(cè)定方法，探索了該方法的可行性，以此實(shí)現(xiàn)質(zhì)量控制目的。
[0024] 本發(fā)明的質(zhì)量控制方法準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性等均滿足含量測(cè)定要求， 有較強(qiáng)的實(shí)際操作性，為川芎揮發(fā)油的質(zhì)量控制提供了一種新思路。
【附圖說明】
[0025] 圖1為對(duì)照品溶液的氣相色譜圖，
[0026] 圖2為川芎揮發(fā)油樣品溶液的氣相色譜圖；
[0027]其中，1-內(nèi)標(biāo)品鄰苯二甲酸二乙酯、2-丁苯酞、3-藁本內(nèi)酯、4-丁烯基苯酞、5-洋川 芎內(nèi)酯A。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0029] 實(shí)施例1
[0030] 1、儀器與試藥
[0031] 1.1儀器GC6890N-MS5973N型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Agilent Technologies，美 國(guó)）；XS205十萬(wàn)分之一電子天平(METTLER TOLEDO,瑞士）。
[0032] 1.2試劑和藥品無(wú)水乙醇(HPLC級(jí)，批號(hào)1205143,美國(guó)TEDIA公司）鄰苯二甲酸二乙 酯（含量99.5%，批號(hào)40129,德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH公司）；川芎（批號(hào)20130128、 140310、150315,四川都江堰市石羊鎮(zhèn)竹瓦村毫州市遠(yuǎn)興市中藥飲片廠提供）；丁苯酞對(duì)照 品（含量99.6%，批號(hào)101035-200901，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；藁本內(nèi)酯對(duì)照品（含量 91.5%，批號(hào)111737-201305,中國(guó)藥品生物制品檢定所）。
[0033] 2、方法
[0034] 2.1 氣相色譜條件：色譜柱Agilent DB-5MS UI型毛細(xì)管柱（30mX0.250mmX0.25y m)，載氣為高純氦氣，流速為1.0ml/min。程序升溫:起始溫度60°C，以6°C/min的速度升溫至 170°C，然后以1.5°C/min的速度升溫至180°C，最后以25°C/min的速度升溫至250°C，保持 211^11。進(jìn)樣口溫度250°(：，檢測(cè)器溫度280°(：，分流比30 :1，進(jìn)樣量1.(^1。
[0035]質(zhì)譜條件:EI離子源，溫度230°C，電子能量70eV，電子倍增器高壓1100V，溶劑不延 遲。
[0036] 2.2川芎揮發(fā)油提取
[0037]川芎藥材粉碎，通過中國(guó)藥典規(guī)定的二號(hào)至三號(hào)篩，稱取適量，加10倍量的水浸泡 12小時(shí)后，按照中國(guó)藥典2010年版一部附錄XD的操作進(jìn)行揮發(fā)油提取。收集揮發(fā)油， 5000r/min離心5min，去除殘留的水，油中加入無(wú)水硫酸鈉，密封避光，放置-20°C保存。 [0038] 2.3溶液的配制
[0039] (1)內(nèi)標(biāo)品貯備液:取鄰苯二甲酸二乙酯，無(wú)水乙醇稀釋成濃度為