一種番瀉葉炮制品的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種番瀉葉炮制品的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 番瀉葉為豆科植物狹葉番瀉Cassia angustifolia Vahi或尖葉番瀉Cassia acu tifolia Delile的干燥小葉。番瀉葉性味甘、苦、寒，歸大腸經(jīng)，具有瀉熱導(dǎo)滯、通便、利水之 功能，主治熱結(jié)積滯、便秘腹痛、水腫脹滿。臨床上主要用于治療便秘、急性胃炎及十二指腸 出血、膽囊炎與膽結(jié)石等疾病，已成為全世界范圍內(nèi)應(yīng)用最廣的致瀉劑。
[0003] 番瀉葉主要含有蒽醌及其衍生物類、黃酮類、多糖類及揮發(fā)油類等化學(xué)成分?，F(xiàn)代 藥理研究表明，番瀉葉具有抗菌、止血、瀉下、肌肉松馳與解痙以及抗胃粘膜損傷等作用，廣 泛應(yīng)用于瀉下藥品和減肥產(chǎn)品中。但大劑量或長(zhǎng)期濫用番瀉葉常發(fā)生不良反應(yīng)，據(jù)報(bào)道番 瀉葉主要或嚴(yán)重的不良反應(yīng)有腹痛、過敏、上消化道大出血、惡性血壓變化、癲癇樣發(fā)作、中 毒、急性尿縮留、成癒性。
[0004] 以番瀉苷A、B、C、D、蘆薈大黃素-二蒽酮-二葡萄糖苷等為代表的二蒽酮類衍生 物統(tǒng)稱為番瀉苷類成分，是番瀉葉中含量較高的有效部分，也是番瀉葉瀉下、抗菌的主要 活性成分，但同時(shí)也是引起番瀉葉副作用的主要成分。蒽醌及其衍生物對(duì)胃腸道有刺激作 用，大劑量或長(zhǎng)期應(yīng)用蒽醌衍生物，具有腸粘膜及神經(jīng)叢損傷作用，使腸道合成產(chǎn)物降低或 加速腸道神經(jīng)肽的衰竭，引起腹痛、上消化道大出血等副作用，此外蒽醌類對(duì)大腦皮質(zhì)的 刺激作用，可導(dǎo)致短暫的腦功能異常，可引起頭暈，口唇、顏面、四肢麻木等副作用，長(zhǎng)期 服用輕者導(dǎo)致低血鉀，重者導(dǎo)致肝硬化。因此，采取適當(dāng)?shù)呐谥品椒ń档头瑸a葉中蒽醌苷 類成分的含量，使其即保持有緩和的瀉下作用同時(shí)也可減少副作用，對(duì)確保番瀉葉的安全 有效使用具有重要意義。
[0005] 我國(guó)有關(guān)番瀉葉藥用的記載始于近代王一仁著《飲片新參》（1935年），僅數(shù)十年 歷史。因此關(guān)于番瀉葉炮制方法并無古代文獻(xiàn)記載，目前的炮制方法是：揀去雜質(zhì)，篩盡灰 塵，折去梗棒；未見關(guān)于采取炮制方法緩和番瀉葉副作用的文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明技術(shù)方案是提供了一種番瀉葉炮制品的制備方法。
[0007] 本發(fā)明提供了一種番瀉葉炮制品的制備方法，它包括如下步驟：
[0008] a、取生品番瀉葉，投入熱水中，翻動(dòng)（即憚制），撈出，瀝干；
[0009] b、置于烘箱中烘干，即得。
[0010] 其中，a步驟所述的熱水的溫度為80_100°C。
[0011] 其中，所述的熱水溫度是100°C。
[0012] 其中，所述的用水量為：1:10-1:20。
[0013] 其中，所述的用水量為1:20。
[0014] 其中，所述的翻動(dòng)時(shí)間0· 5-3min。
[0015] 其中，所述的翻動(dòng)時(shí)間為2min。
[0016] 其中，所述的烘干溫度為50°C。
[0017] 本發(fā)明還提供了所述的制備方法制備的番瀉葉炮制品。
[0018] 其中，所述的番瀉葉炮制品中含番瀉苷A的重量百分含量為1. 41-1. 45% ;番瀉苷 B的重量百分含量為0. 49-0. 42% ;總番瀉苷的重量百分含量為2. 23 - 2. 32%。
[0019] 本發(fā)明還提供了一種番瀉葉炮制品HPLC檢測(cè)方法，它包括如下步驟：
[0020] a、對(duì)照品溶液的制備
[0021] 取番瀉苷A和番瀉苷B對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加入0. 1%碳酸氫 鈉制成每lmL含88 μ g番瀉苷A，60 μ g番瀉苷B混合對(duì)照品溶液；
[0022] b、色譜條件：
[0023] 采用Dikma色譜柱（Diamonsil，4. 6*150mm，5 μπι，）；流動(dòng)相：四氫咲喃一水一醋酸 (20:80:1. 5);流速：0· 8mL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm ;柱溫：30°C，進(jìn)樣量 10 μ L ;
[0024] c、供試品溶液的制備：
[0025] 取番瀉葉細(xì)粉約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0. 1 %碳酸氫鈉溶液 50ml，稱定重量，超聲處理15分鐘（30~40°C )，放冷，再稱定重量，用0. 1 %碳酸氫鈉溶液 補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0026] d、樣品測(cè)定：
[0027] 取番瀉葉各樣品細(xì)粉約0. 5g，精密稱定，按照供試品溶液制備方法制備，各吸取供 試品溶液10 μ L，按照c步驟色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定中番瀉苷A、B峰面積值，以干燥品計(jì) 算含量。
[0028] 本發(fā)明以番瀉葉中總番瀉苷和主要代表性成分番瀉苷A、Β含量為指標(biāo)，通過特定 的炮制方法進(jìn)行篩選和工藝優(yōu)化，以減少番瀉葉中結(jié)合性蒽醌苷類成分含量，緩和其瀉下 作用及相關(guān)副作用，確保其臨床應(yīng)用的安全有效。
【附圖說明】
[0029] 圖1對(duì)照品HPLC色譜圖（1.番瀉苷Β ;2·番瀉苷Α)
[0030] 圖2生品番瀉葉HPLC色譜圖（1.番瀉苷Β ;2.番瀉苷Α)
[0031] 圖3對(duì)照品HPLC色譜圖（1.番瀉苷Β ;2·番瀉苷A)
[0032] 圖4生品番瀉葉HPLC色譜圖（1.番瀉苷Β ;2·番瀉苷A)
[0033] 圖5番瀉苷A標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
[0034] 圖6番瀉苷B標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
[0035] 圖7對(duì)照品與供試品溶液吸收光譜圖（1 :樣品，2 :對(duì)照品）
[0036] 圖8番瀉苷B對(duì)照品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0037] 圖9生品番瀉葉供試品HPLC色譜圖（1 :番瀉苷A ; 2 :番瀉苷B)
[0038] 圖10憚制番瀉葉供試品HPLC色譜圖（1 :番瀉苷A ;2 :番瀉苷B)
[0039] 圖11酒制番瀉葉供試品HPLC色譜圖（1 :番瀉苷A ; 2 :番瀉苷B)
【具體實(shí)施方式】
[0040] 實(shí)施例1本發(fā)明番瀉葉炮制品的含量檢測(cè)方法
[0041] L實(shí)驗(yàn)儀器、試劑與材料
[0042] 1. 1儀器BP211D型電子分析天平（十萬分之一）、BP121S型電子分析天平（萬分 之一）（德國(guó)Sartorius公司）、SB25-12D型超聲波清洗器（寧波新藝超聲設(shè)備有限公司）、 LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）、Agilentl260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公 司）、Agilent8453紫外可見分光光度計(jì)（美國(guó)安捷倫公司）
[0043] 1. 2試劑番瀉苷A對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，僅供實(shí)驗(yàn)室藥品檢驗(yàn)使用， 批號(hào)：110824-201301)、番瀉苷B對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，僅供實(shí)驗(yàn)室藥品檢驗(yàn) 使用，批號(hào)：110825-201301)、四庚基溴化銨（成都貝斯特試劑有限公司，批號(hào)：J1381n，色 譜純）、四氫呋喃（色譜級(jí)，美國(guó)Merck公司）、水為超純水、其余試劑均為分析純級(jí)。
[0044] 1. 3藥材番瀉葉：購(gòu)置成都國(guó)際商貿(mào)城荷花池中藥材專業(yè)市場(chǎng)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大 學(xué)盧先明教授鑒定為豆科植物狹葉番瀉的Cassia angustifolia Vahi的干燥小葉。藥用 大黃：購(gòu)于四川德仁堂中藥飲片有限公司（批號(hào)：130901)。
[0045] 2.實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
[0046] 2. 1 HPLC法測(cè)定番瀉葉中番瀉苷A、B的含量
[0047] 2. 1. 1對(duì)照品溶液的制備
[0048] 取番瀉苷A和番瀉苷B對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加入0. 1%碳酸氫 鈉制成每lmL含88 μ g番瀉苷A，60 μ g番瀉苷B混合對(duì)照品溶液。
[0049] 2. 1. 2色譜條件的選擇研究
[0050] 2. 1. 2. 1 色譜條件一：
[0051] 參照《中國(guó)藥典》2010年版一部番瀉葉項(xiàng)中含量測(cè)定方法：采用依利特0DS (：18色 譜柱（4. 6*150mm，5 μ m，）；以乙腈-5mmol/L四庚基溴化銨的醋酸-醋酸鈉緩沖液（ρΗ5· 0) (1 - 10) (35 :65)混合溶液1000mL中，加入四庚基溴化銨2. 45g為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為 340nm;柱溫為40°C。進(jìn)樣量為10yL。結(jié)果如圖1、2〇
[0052] 在上述色譜條件中，番瀉苷A、B分離較好，但流動(dòng)相配制較為復(fù)雜且目標(biāo)峰保留 時(shí)間較長(zhǎng)，本研究對(duì)色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化。
[0053] 2. 1. 2. 2 色譜條件二：采用 Dikma 色譜柱（Diamonsil，4. 6*150mm，5 μ m，）；流動(dòng) 相：四氫呋喃一水一醋酸（20:80:1. 5);流速：0. 8mL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm ;柱溫：30°C，進(jìn) 樣量lOyL，結(jié)果如圖3、4。
[0054] 該色譜條件下，目標(biāo)峰峰型、分離度較好，且保留時(shí)間大大提前，可縮短檢測(cè)時(shí)間， 提高測(cè)定效率、節(jié)約溶劑。
[0055] 通過比較上述兩種色譜條件，色譜條件二較色譜條件一的更為合理，因此本研究 確定采用色譜條件二作為測(cè)定條件。流動(dòng)相：四氫呋喃-水-醋酸（20:80:1.5);流速： 0· 8mL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm ;柱溫：30°C。進(jìn)樣量 10 μ L。
[0056] 2. 1. 3供試品溶液的制備：
[0057] 參照《中國(guó)藥典》2010版一部番瀉葉含量測(cè)定項(xiàng)下供試品的制備方法制備供試 品溶液：取番瀉葉細(xì)粉約〇. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0. 1 %碳酸氫鈉溶液 50ml，稱定重量，超聲處理15分鐘（30~40°C )，放冷，再稱定重量，用0. 1 %碳酸氫鈉溶液 補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0058] 2. 1. 4線性關(guān)系的考察
[0059] 精密吸取混合對(duì)照品溶液5,10,15, 20, 25 μ L注入液相色譜儀，"2. 1. 2"項(xiàng)下方 法測(cè)定峰面積，并以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：:YA = 74036X-1986, rA= 0. 9999,表明番瀉苷A在0. 43 μ g~2. 19 μ g范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系； YB= 66397X-1268, rB= 0· 9999,番瀉苷B在0· 30yg~1. 52yg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。 結(jié)果見圖5、6。
[0060] 2. 1.5樣品測(cè)定
[0061] 取番瀉葉各樣品細(xì)粉約0. 5g，精密稱定，按照2. 1. 3項(xiàng)下供試品溶液制備方法制 備，各吸取供試品溶液10 μ L，按照"2. 1. 2"項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，測(cè)定中番瀉苷A、B峰 面積值，以干燥品計(jì)算含量。
[0062] 2. 2分光光度法測(cè)定番瀉葉中總番瀉苷的含量
[0063] 2. 2. 1供試品溶液的制備
[0064] 參照2005版《中國(guó)藥典》番瀉葉項(xiàng)下總番瀉苷測(cè)定方法制備供試品溶液：取番瀉 葉藥材粉末（過四號(hào)篩）約〇. 15g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水30mL。混勻，稱定重量， 置水浴中加熱15min，冷卻，稱定