Rxr在構(gòu)建1型單純皰疹病毒(hsv-1)易感模型中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
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[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及RXR在構(gòu)建I型單純皰疹病毒(HSV-1)易感模型中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]在病毒感染期間免疫激活導(dǎo)致視黃醇X受體下調(diào)，后簡稱(RXR)，RXR屬于核受體，在細(xì)胞以及整個(gè)機(jī)體代謝中都是必不可少的。然而，RXR在抵御病毒感染的宿主防御中的作用仍然是未知的。核受體(NRs)代表一個(gè)大家族的轉(zhuǎn)錄因子參與的廣譜生物學(xué)時(shí)間，例如發(fā)育、生殖以及代謝。(Robinson-Rechavi等2003)許多NR的超家族成員已經(jīng)成為炎癥和免疫反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子(Daynes和Jones，2002 ; Joseph等2003 ；Ogawa等2005)，它們使巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞感受其脂質(zhì)環(huán)境并塑造其免疫反應(yīng)。(Nagy等2012) RXR占據(jù)在核受體的中心位置，因?yàn)樗麄兛梢耘c其他家族成員一起形成異二聚體，因此參與多種生理過程包括細(xì)胞分化，免疫反應(yīng)以及脂質(zhì)代謝和糖代謝(kefebvre等2010 ；Roszer等2013)。RXR也能夠形成同二聚體激活其靶基因(A等人2004 ;Zhang等1992)最近研究進(jìn)展表明，RXR是巨噬細(xì)胞的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在免疫和代謝性紊亂中起到關(guān)鍵作用。RXR有三種同型異構(gòu)體，RXR(NR2B1)RXR(NR2B2)，RXR(NR2B3)。每個(gè)同型異構(gòu)體存在于特定的幾個(gè)亞型中，在發(fā)育過程中具有特異的組織分布和表達(dá)模式。(Roszer等2013)以往的研究表明，在骨髓細(xì)胞中最豐富的受體，或者說至少是功能最重要的受體是RXR(Mangelsdorf等1992)。維生素A衍生物9順維甲酸(9cRA)是第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的RXR的天然配體(Perez等2012)內(nèi)源性脂肪酸如二十二碳六烯酸(DHA)、油酸和植烷酸也是RXR的配體(Dawson和Xia, 2012)，許多RXR特異性合成配體例如LG100268(LG268)，AGN194204和貝沙羅汀也被稱為視黃醇，被用于研究和臨床應(yīng)用(Perez等2012)。
[0003]巨噬細(xì)胞在固有免疫中起到關(guān)鍵作用，不僅僅在宿主防御病原體，細(xì)胞碎片清除，組織損傷后重塑，組織脂質(zhì)代謝的整合器作用，但也可以產(chǎn)生一些列分泌產(chǎn)物，這些分泌產(chǎn)物可以影響其他免疫細(xì)胞的活性以及其迀移(Glass和01efsky2012 ；Nagy等2012)。在組織中巨噬細(xì)胞的長期活化狀態(tài)以及其病原體的保留可以創(chuàng)造一種炎癥微環(huán)境，這反過來又有助于動(dòng)脈粥樣硬化、胰島素抵抗和神經(jīng)退行性疾病。(Glass和01efsky2012 ；Roszer等2013).因此，在巨噬細(xì)胞的免疫和代謝過程的精密調(diào)節(jié)是非常重要的。在巨噬細(xì)胞中，諸如Toll樣受體的模式識別受體活化可以激發(fā)快速的炎癥或通過產(chǎn)生前炎性因子I型干擾素來激發(fā)抗病毒反應(yīng)。(Newton和Dixit2012 ；Takeuchi和Akira, 2010)多個(gè)核受體家族成員已被證實(shí)可以抑制TLR誘導(dǎo)的體內(nèi)和體外的炎癥反應(yīng)，其中包括維生素D受體VDRs，過氧化物酶增值激活受體PPARsJB^ X受體LXRs和糖皮質(zhì)激素受體(Castrillo和Tontonoz2004 ；Nagpal 等 2001 ；Nagy 等 2012 ；Ogawa 等 2005)，同時(shí)，由病原體激活的 TLRs也可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞核受體靶基因。例如TLR3/4配體可以強(qiáng)烈抑制包括ABCAl和ABCGl的LXR靶基因從而阻斷來著巨噬細(xì)胞膽固醇外流。(Castrillo等2003).越來越多的證據(jù)表明，核受體與過氧化物酶增值激活受體之間的相互作用可以調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞代謝(Castrillo等2003 ；Nagy等2012 ；Roszer等2013)。然而，核受體與宿主抗病毒反應(yīng)之間的相互作用還需要進(jìn)一步的研究。
[0004]細(xì)胞抗病毒反應(yīng)的活化涉及許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可以產(chǎn)生I型干擾素。簡單的說，病毒核酸激活TLR3、TLR7/8、TLR9或細(xì)胞內(nèi)受體如維甲酸誘導(dǎo)基因I樣受體家族、黑色素瘤分化相關(guān)抗原5，可以激活通路導(dǎo)致人TANK結(jié)合激酶I的激活，磷酸化，人干擾素調(diào)節(jié)因子3的迀移進(jìn)入細(xì)胞核以及干擾素的轉(zhuǎn)錄等一系列變化。(Newton和Dixit2012 ；Takeuchi和Akira，2009，2010).干擾素誘導(dǎo)多種抗病毒基因表達(dá)。許多基因比如說干擾素刺激基因15、干擾素誘導(dǎo)的鳥苷酸結(jié)合蛋白I寡腺苷酸合成酶2可以直接抑制病毒的生長周期過程(Sadler和Williams2008)。其他諸如人干擾素調(diào)節(jié)因子1、人干擾素調(diào)節(jié)因子7、以及病毒核酸感受器(RIG-1和MDA5)進(jìn)一步健全了干擾素反應(yīng)。(Takeuchi和Akira，2009)。我們以前研究發(fā)現(xiàn)，RXR在病毒干擾過程中通過干擾素調(diào)節(jié)因子3依賴性但干擾素非依賴性通路表達(dá)下調(diào)。(Chow等2006)進(jìn)一步的證據(jù)表明:病毒感染的小鼠在諸如阿司匹林的藥物刺激下對肝毒性更加敏感，會(huì)產(chǎn)生一種類似于人類雷氏綜合癥的癥狀，這可能是因?yàn)樗幬锎x導(dǎo)致RXR下游的酶表達(dá)抑制的原因。(Chow等2006)盡管有這些有趣的研究現(xiàn)象，為什么在固有免疫反應(yīng)病毒感染中RXR的表達(dá)下降，還有RXR的下調(diào)是否會(huì)影響病毒感染過程中的宿主防御，這些都尚不清楚。
[0005]環(huán)氧合酶I和環(huán)氧合酶2 (C0XI和C0X2)是前列腺素生物合成的關(guān)鍵酶。COXl在許多組織中持續(xù)表達(dá)，C0X2是可誘導(dǎo)的酶，二者均可以促使前列腺素E2產(chǎn)生(Vane等1998)。PGE2的產(chǎn)生增加會(huì)導(dǎo)致大多數(shù)檢測病毒的復(fù)制增加(巨細(xì)胞病毒、水泡型口炎病毒、牛白細(xì)胞增多病毒、單純皰疹病毒_1、人類皰疹病毒_6、偽狂犬病毒、小鼠肝炎病毒-68) (Ray等2004 ；Steer和Corbett, 2003 ；Symensma等2003)。最近的研究表明前列腺素E2通過激活前列腺素E2受體EP2和EP4受體來激活PI3K_Akt_GSK3通路從而抑制干擾素α和干擾素β。(Fabricius等2010 ;Xu等2008)。盡管前列腺素E2的產(chǎn)生增加主要是由于病毒感染過程中環(huán)氧合酶2的產(chǎn)生增加(Steer和Corbett2003)。藥理學(xué)以及遺傳相關(guān)證據(jù)也表明，由環(huán)氧合酶I調(diào)節(jié)產(chǎn)生的前列腺素E2在調(diào)節(jié)I型干擾素產(chǎn)生和宿主抗病毒反應(yīng)中起到關(guān)鍵作用ο (Carey等2005 ；Chen等2012 ;Ray等2004)。;比如環(huán)氧合酶I特異性抑制劑增加偽狂犬病毒PFV的復(fù)制(Ray等2004)給予環(huán)氧合酶I敲除但未給予環(huán)氧合酶2敲除的小鼠更能抵抗流感病毒的侵襲(Carey等2005)環(huán)氧合酶I啟動(dòng)子通過高度乙酰化在組蛋白去乙?；毕莸木奘杉?xì)胞中產(chǎn)生干擾素抑制(Chen等2012)盡管多個(gè)研究表明，環(huán)氧合酶I調(diào)節(jié)I型干擾素的抑制，但是通過宿主抗病毒反應(yīng)調(diào)節(jié)環(huán)氧合酶I的研究仍然極少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]單純皰疹(HSV)屬于皰疹病毒科a病毒亞科，病毒質(zhì)粒大小約180nm。根據(jù)抗原性的差別可將病毒分為I型和2型。HSV在多種細(xì)胞中能增殖，常用原代兔腎、人胚腎細(xì)胞以及地鼠腎等傳代細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒。感染細(xì)胞很快出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變，并出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體。視黃醇X受體(Retinoid X receptor)，后簡稱(RXR)，RXR屬于核受體(nuclearreceptors)，在細(xì)胞以及整個(gè)機(jī)體代謝中都是必不可少的。然而，RXR在抵御病毒感染的宿主防御中的作用仍然是未知的。
[0007]鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供RXR在構(gòu)建I型單純皰疹病毒(HSV-1)(herpes simplex virus typel)(登錄號)易感模型中的用途。
[0008]優(yōu)選的，所述用途為I型單純皰疹病毒HSV-1易感細(xì)胞模型構(gòu)建中的用途，具體為RXR+/+過度表達(dá)所引起的I型單純皰疹病毒HSV-1毒易感。
[0009]更優(yōu)選的，所述易感細(xì)胞模型為胚胎癌細(xì)胞模型。
[0010]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述細(xì)胞模型為癌細(xì)胞模型。
[0011]由于RXR過度表達(dá)對于I型單純皰疹病毒(HSV-1)易感，且RXR表達(dá)水平可能調(diào)控I型單純皰疹病毒(HSV-1)感染的宿主易感性，并阻礙細(xì)菌廓清，所以RXR過度表達(dá)可用于構(gòu)建I型單純皰疹病毒(HSV-1)易感胚胎癌細(xì)胞模型，在構(gòu)建I型單純皰疹病毒(HSV-1)易感細(xì)胞模型中具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
[0012]本發(fā)明進(jìn)一步提供RXR過度表達(dá)所引起的I型單純皰疹病毒(HSV-1)易感胚胎癌細(xì)胞金模型的構(gòu)建方法，所述方法具體為:對野生型RXR和缺乏F9胚胎癌細(xì)胞預(yù)處理，給予注射I型單純皰疹病毒HSV-1 (*PFU/μ L)，通過蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot)觀察各組RXR蛋白的表達(dá)情況。
[0013]所述注射I型單純皰疹病毒HSV-1的具體方法為:給予骨髓源性巨噬細(xì)胞Iug/ml poly 1:C病毒轉(zhuǎn)染，或給予骨髓源性巨噬細(xì)胞感染poly dA: dT4小時(shí)QRT-PCR檢測RXRmRNA表達(dá)。
[0014]由于MHV68，VSV易感細(xì)胞展現(xiàn)出與HSV-1易感細(xì)胞類似的表型，所以RXR的缺陷可用于構(gòu)建I型單純皰疹病毒易感細(xì)胞模型，在構(gòu)建I型單純皰疹病毒易感模型中具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
[0015]本發(fā)明證實(shí)了 RXR表達(dá)水平可調(diào)控I型單純皰疹病毒感染的宿主易感性并進(jìn)一步闡述了相關(guān)免疫機(jī)理。
[0016]本發(fā)明發(fā)明人發(fā)現(xiàn)RXR介導(dǎo)的固有免疫響應(yīng)在I型單純皰疹病毒感染過程中的的宿主防御中不可或缺；并率先證明了在I型單純皰疹病毒感染的宿主防御中，RXR-Cox-1依賴性途徑有著關(guān)鍵性的作用。
[0017]綜上所述，本發(fā)明發(fā)明人證實(shí)了 RXR-Cox-1依賴性途徑在對于I型單純皰疹病毒(HSV-1)的宿主防御中起著關(guān)鍵性的作用，并進(jìn)一步揭示了 RXR在構(gòu)建I型單純皰疹病毒易感模型中具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
【附圖說明】
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[0018]圖1顯示為RXR表達(dá)調(diào)控宿主細(xì)胞對HSV-1感染的易感性:㈧巨噬細(xì)胞給予HSV-1或MHV