治療腸道病毒感染的組分和聯(lián)合用藥方法
【技術領域】
[0001 ]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，具體地說，本發(fā)明涉及一種治療腸道病毒感染的組分 和聯(lián)合用藥方法。
【背景技術】
[0002] 腸道病毒是帶有單股正鏈RNA的微小核糖核酸病毒科病毒，目前共發(fā)現(xiàn)上百種血 清型。多數(shù)腸道病毒感染并不引起嚴重的癥狀或僅僅引起較輕微的疾病，但在兒童和免疫 缺陷人群中通常造成嚴重后果 [1]。腸道病毒屬中的腸道病毒71型(EV71)和柯薩奇病毒A16 (CVA16)是引起亞太地區(qū)嬰幼兒手足口病的主要病原體 [2]。手足口病的癥狀通常較輕微如 發(fā)熱、咽痛、腹瀉、局部出疹等，但也有些病人會發(fā)展成中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病，如無菌性 腦膜炎、致死性腦炎甚至死亡 [34]。而EV71是引起重癥手足口病的主要病原體[6]。迄今為止 尚無有效針對腸道病毒感染的藥物治療手段，現(xiàn)有的治療手段僅限于支持性護理、靜脈注 射免疫球蛋白或利巴韋林 [5'7]，因此尋找抗病毒藥物迫在眉睫。腸道病毒使用病毒自身的 RNA依賴性RNA聚合酶合成基因組，所以在RNA復制過程中，子代RNA很容易發(fā)生突變。
[0003] 因此，為了有效地預防或治療腸道病毒感染，本領域迫切需要開發(fā)新型的預防和/ 或治療腸道病毒感染的技術。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種治療腸道病毒感染的組分和聯(lián)合用藥方法。
[0005] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種抑制腸道病毒組合物，所述組合物包括第一活性 成分和第二活性成分，
[0006] 其中，所述第一活性成分為腸道病毒(如，EV71)的3C蛋白抑制劑；
[0007] 所述第二活性成分選自下組：
[0008] 腸道病毒(如，EV71)的3A蛋白抑制劑;和 [0009]腸道病毒(如，EV71)的3D蛋白抑制劑。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述第一活性成分包括蘆平曲韋、其類似物、或其藥學上可接受 鹽；
[0011] 所述第二活性成分選自下組:伊曲康唑、其類似物、或其藥學上可接受鹽;和法匹 拉韋、其類似物、或其藥學上可接受鹽。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述蘆平曲韋的類似物包括對腸道病毒的作用靶點與蘆平曲韋 相同的物質(zhì)（如:AG7404)。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述伊曲康唑的類似物包括對腸道病毒的作用靶點與伊曲康唑 相同的物質(zhì)。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述腸道病毒選自下組:腸道病毒71型(EV71)、柯薩奇病毒A16 (CVA16)、CVB3型、PVl型或EV68型，以及鼻病毒。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述第一活性成分和第二活性成分的摩爾比約為1~20:10~ 100,優(yōu)選地為1~10:1〇~100,更更優(yōu)選地為1~5:10~100。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述第一活性成分具有腸道病毒(如，EV71)的3C蛋白抑制活性。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述第二活性成分具有腸道病毒(如，EV71)的3A蛋白抑制活性； 和/或3D蛋白抑制活性。在本發(fā)明中，伊曲康唑具有3A蛋白抑制活性，法匹拉韋具有3D蛋白 抑制活性。
[0018] 在另一優(yōu)選例中，所述組合物中還包括藥學上可接受的載體或賦形劑。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物的劑型包括片劑、顆粒劑、膠囊、丸劑、注射劑、 或口服液。
[0020] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為單元劑型，每個單元劑型中所述第一活性成分 和所述第二活性成分的含量約為日劑量的0.1至1(或0.25-1，或0.5-1)，其中所述日劑量為 20-100mg〇
[0021 ] 在另一優(yōu)選例中，所述的日劑量為25-70mg，如25mg、40mg、50mg。
[0022] 本發(fā)明的第二方面，提供了如本發(fā)明第一方面所述的抑制腸道病毒組合物的用 途，用于制備預防和/或治療腸道病毒感染的藥物。
[0023] 本發(fā)明的第三方面，提供了一種預防和/或治療腸道病毒感染的方法，所述方法包 括步驟：
[0024] 給需要的對象施用本發(fā)明第一方面所述的抑制腸道病毒組合物，從而抑制所述對 象體內(nèi)的腸道病毒。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，所述的對象包括人和非人哺乳動物(如嚙齒動物）。
[0026] 在另一優(yōu)選例中，所述的施用的用量為10-100mg/kg體重，較佳地15-70mg/kg體 重，更佳地10_50mg/kg體重，以所述第一活性成分的重量計。
[0027]應理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術特征和在下文(如實施例）中具 體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優(yōu)選的技術方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0028]圖1.伊曲康唑、蘆平曲韋、法匹拉韋、蘇拉明和GW5074抑制EV71的感染，顯示了各 化合物對EV71的抑制效果及對細胞的毒性作用。
[0029] 圖2顯示了不同濃度的各化合物對病毒滴度的影響。
[0030] 圖3.不同藥物組合在治療EV71感染中的相互作用效果。
[0031] 圖4.伊曲康唑和蘆平曲韋聯(lián)合用藥可以協(xié)同抑制EV71效價。
【具體實施方式】
[0032] 本發(fā)明人通過廣泛而深入的研究，首次意外地發(fā)現(xiàn)了一種抑制腸道病毒組合物， 所述組合物中以蘆平曲韋為第一活性成分，以伊曲康唑和/或法匹拉韋為第二活性成分，實 驗結果表明，此藥物組合具有顯著的協(xié)同作用，而且在被測濃度組合下均未發(fā)現(xiàn)增強的細 胞毒性。
[0033] 本發(fā)明公開了能夠有效抑制腸道病毒感染的聯(lián)合用藥方法。針對腸道病毒的抑制 活性，本發(fā)明人經(jīng)過大量的測試意外的發(fā)現(xiàn)蘆平曲韋和伊曲康唑、蘆平曲韋和法匹拉韋表 現(xiàn)出顯著地協(xié)同作用。而且上述藥物組合，在被測濃度組合下均未發(fā)現(xiàn)增強的細胞毒性。蘆 平曲韋和伊曲康唑組合能夠阻止耐藥病毒的產(chǎn)生。
[0034] 在描述本發(fā)明之前，應當理解本發(fā)明不限于所述的具體方法和實驗條件，因為這 類方法和條件可以變動。還應當理解本文所用的術語其目的僅在于描述具體實施方案，并 且不意圖是限制性的，本發(fā)明的范圍將僅由所附的權利要求書限制。
[0035] 除非另外定義，否則本文中所用的全部技術與科學術語均具有如本發(fā)明所屬領域 的普通技術人員通常理解的相同含義。如本文所用，在提到具體列舉的數(shù)值中使用時，術語 "約"意指該值可以從列舉的值變動不多于1%。例如，如本文所用，表述"約1〇〇"包括99和 101和之間的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等）。
[0036] 雖然在本發(fā)明的實施或測試中可以使用與本發(fā)明中所述相似或等價的任何方法 和材料，本文在此處例舉優(yōu)選的方法和材料。
[0037]蘆平曲韋及其類似物
[0038]蘆平曲韋（rupintrivir)最初用于治療鼻病毒感染，研究表明它主要通過抑制 EV71的3C蛋白從而抑制病毒復制[8_9]。
[0039]在本發(fā)明的一個優(yōu)選地實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的蘆平曲韋的類似物AG7404具有 如下結構：
[0040]
[0041]在本發(fā)明的一個優(yōu)選地實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的蘆平曲韋的類似物包括對腸道 病毒的作用靶點與蘆平曲韋相同的物質(zhì)(如:AG7404)。
[0042]伊曲康唑及其類似物
[0043]伊曲康唑（itraconazole)是一種口服的三唑類廣譜抗真菌劑，能夠抑制曲霉菌和 白色念珠菌[1(W1]，也能有效治療兒童的霉菌感染[12_13]，它也是一種最近被報道的腸道病毒 廣譜抑制劑，通過作用于病毒的3A蛋白和宿主的氧化固醇結合蛋白抑制病毒生命周 期[14-15]。
[0044] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選地實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的伊曲康唑的類似物包括對腸道 病毒的作用靶點與伊曲康唑相同的物質(zhì)。
[0045] 法匹拉韋及其類似物
[0046] 法匹拉韋(favipiravir)是一種具有廣譜抗病毒活性的RdRP抑制劑[2()]。經(jīng)過深入 的研究本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)法匹拉韋能夠在體外抑制EV71復制，機制研究發(fā)現(xiàn)其作用位點 位于EV71的3D蛋白。
[0047]在本發(fā)明的一個優(yōu)選地實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的法匹拉韋的類似物包括對腸道 病毒的作用靶點與法匹拉韋相同的物質(zhì)。
[0048]蘇拉明及其類似物
[0049] 蘇拉明（suramin)在臨床上用于治療錐體蟲病，它能夠與EV71的衣殼蛋白作用從 而抑制病毒吸附進入細胞[16_ 17]。
[0050] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選地實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的蘇拉明的類似物選自下組：
[0051]
[0052]
[0053] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選地實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的蘇拉明的類似物包括對腸道病 毒的作用靶點與蘇拉明相同的物質(zhì)（如:NF449、NF110、NM16)。
[0054] GW5074及其類似物
[0055] GW5074是Raf信號通路激酶抑制劑，對腸道病毒復制具有抑制作用，但并不作用于 該細胞通路，它通過作用于脊髓灰質(zhì)炎病毒的3A蛋白發(fā)揮抗病毒活性[18_19]。
[0056]本申請所涉及的化合物的結構式如下：1為伊曲康唑，2為蘆平曲韋，3法匹拉韋，4 為GW5074,5為蘇拉明。
[0057:
[0058] 在聯(lián)合用藥療法中，伊曲康唑和蘆平曲韋，蘇拉明和法匹拉韋表現(xiàn)出顯著的強協(xié) 同作用，且在被測濃度下沒有檢測到明顯增強的細胞毒性;蘆平曲韋和法匹拉韋表現(xiàn)出弱 協(xié)同作用；蘆平曲韋和蘇拉明表現(xiàn)出疊加作用；而伊曲康唑和蘇拉明，伊曲康唑和法匹拉 韋，GW5074和伊曲康唑表現(xiàn)出強拮抗作用。
[0059] 組合物
[0060] 如本文所用，術語"組合物"包括藥物組合物。
[0061] 發(fā)明第一方面所述的組合物包含抑制腸道病毒的活性成分，和藥學上可接受的載 體。抑制腸道病毒的活性成分包括第一活性成分和第二活性成分，其中，所述第一活性成分 包括蘆平曲韋、其類似物、或其藥學上可接受鹽;而第二活性成分選自下組:伊曲康唑、其類 似物、或其藥學上可接受鹽;和法匹拉韋、其類似物、或其藥學上可接受鹽。
[0062] 本發(fā)明的藥物組合物還可以包含各種與所含化合物或組合物相適應的藥物輔料， 并通過常規(guī)方法制備成有利于給藥的劑型，如:但不僅限于水溶液注射劑、粉針劑、丸劑、散 劑、片劑、貼劑、栓劑、乳劑、霜劑、凝膠劑、顆粒劑、膠囊劑、氣霧劑、噴霧劑、粉霧劑、緩釋劑 和控釋劑等。所述藥用輔料既可以是各種制劑中常規(guī)