檢測大麻醇的電化學(xué)納米免疫傳感器的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及生物免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測大麻醇的電化學(xué)納米免疫傳感器。
【背景技術(shù)】
[0002]大麻醇(Cannabinoid)是大麻(marijuana)中影響精神狀態(tài)的主要成分，它對大腦的作用主要是通過激活一個叫CBl的分子受體來實現(xiàn)的。目前大麻醇主要用于其它藥物療效不佳的某些疾病，如神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的多發(fā)性硬化癥(MS)、運動性神經(jīng)疾病、慢性頑固性疼痛和藥源性嘔吐。另外，該藥對青光眼、哮喘和心血管疾病也可能有一定作用，雖然尚未進入臨床應(yīng)用，但已引起研究者的廣泛興趣。對大麻醇的檢測方法目前只能達到定性目的，如采用相應(yīng)的試紙條/板/盒，靈敏度為50ng/mL。為了便于對大麻醇進行研究和應(yīng)用，亟需研究發(fā)展檢測靈敏度更高的檢測方法。
【實用新型內(nèi)容】
[0003]本實用新型的目的是針對目前無法對大麻醇進行定量檢測、檢測靈敏度很低的缺陷，而提供一種檢測大麻醇的電化學(xué)納米免疫傳感器。本實用新型的電化學(xué)納米免疫傳感器不受樣品的濁度、顏色的影響，無需對樣品進行純化、富集等預(yù)處理，操作簡單，檢測靈敏度高、特異性強，能夠用于對大麻醇進行快速定量檢測。
[0004]本實用新型提供下述技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題。
[0005]本實用新型提供的技術(shù)方案之一是:一種檢測大麻醇的電化學(xué)納米免疫傳感器，所述傳感器的電極表面是包住電極的殼聚糖凝膠層，所述凝膠層之上為納米金/辣根過氧化物酶層，所述納米金/辣根過氧化物酶層之上為抗大麻醇抗體層。
[0006]所述抗大麻醇的抗體為本領(lǐng)域常規(guī)，其來源和類型均沒有特殊要求，既可以是單克隆抗體，也可以是多克隆抗體，優(yōu)選單克隆抗體，更優(yōu)選Balb/c小鼠單克隆抗體，且純化后抗體的濃度不低于0.5mg/mLo
[0007]所述電極可以是本領(lǐng)域常規(guī)所述的各類電極，優(yōu)選玻碳電極。
[0008]所述檢測大麻醇的電化學(xué)納米免疫傳感器由包括如下步驟的制備方法制備得到:
[0009](I)對電極進行預(yù)處理，然后在電極上包被殼聚糖溶液；
[0010](2)以殼聚糖為橋聯(lián)劑將納米金和辣根過氧化物酶包被在電極上；
[0011](3)繼續(xù)在電極上包被抗大麻醇抗體；
[0012](4)封閉液封閉后即得。
[0013]步驟(I)為對電極進行預(yù)處理，然后在電極上包被殼聚糖溶液。
[0014]其中，所述電極可以是本領(lǐng)域常規(guī)所述的各類電極，優(yōu)選玻碳電極。
[0015]所述殼聚糖溶液優(yōu)選以如下方法制得:將殼聚糖溶于醋酸溶液得到殼聚糖溶液，備用。更優(yōu)選地，將2g殼聚糖溶于10mL體積百分比為2%的醋酸溶液中，攪拌3h得到2%的殼聚糖溶液，備用。
[0016]步驟(2)為以殼聚糖為橋聯(lián)劑將納米金和辣根過氧化物酶包被在電極上。
[0017]如本領(lǐng)域常規(guī)，所述包被為將電極置于溶液中進行包被。優(yōu)選地，所述包被為將電極置于由納米金溶液和辣根過氧化物酶溶液組成的混合溶液中進行包被。
[0018]所述納米金溶液優(yōu)選以如下方法制得:取0.01g/100mL氯金酸溶液10mLdPAlg/10mL的檸檬酸鈉溶液4mL混勻，置于微波爐中低火保持8_10min，待自然冷卻后用超純水補充至104mL，即得納米金溶膠，置于4°C避光保存?zhèn)溆谩?br>[0019]所述辣根過氧化物酶溶液優(yōu)選以如下方法制得:將辣根過氧化物酶(HRP)溶于磷酸緩沖液(PBS)中，即得辣根過氧化物酶溶液。更優(yōu)選地，將0.02g辣根過氧化物酶(HRP)溶于1mL 0.0lM pH值為7.4的磷酸緩沖液(PBS)中，即得2.0g/L辣根過氧化物酶溶液。
[0020]所述封閉液為免疫檢測領(lǐng)域常規(guī)的封閉液，優(yōu)選牛血清白蛋白(BSA)。
[0021]在所述包被的操作過程中，如本領(lǐng)域常規(guī)，一般都需要經(jīng)過恒溫孵育和清洗的步驟。
[0022]在所述封閉的操作過程中，如本領(lǐng)域常規(guī)，一般也需要經(jīng)過恒溫孵育和清洗的步驟。
[0023]本實用新型的電化學(xué)納米免疫傳感器利用循環(huán)伏安法、交流阻抗法，原子力顯微鏡等表征電極組裝的各個階段。利用電流時間曲線法等方法可以實現(xiàn)對復(fù)雜樣品中大麻醇的定量檢測，實驗結(jié)果表明該傳感器靈敏度、特異性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性以及使用壽命等技術(shù)參數(shù)均良好。
[0024]在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本實用新型各較佳實例。
[0025]本實用新型所用試劑和原料均市售可得。
[0026]本實用新型的積極進步效果在于:
[0027]本實用新型的電化學(xué)納米免疫傳感器不受樣品的濁度、顏色的影響，無需對樣品進行純化、富集等預(yù)處理，操作簡單，檢測靈敏度高、特異性強，能夠用于對大麻醇進行快速定量檢測，且靈敏度、特異性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性以及使用壽命等技術(shù)參數(shù)均良好，具有非常好的應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0028]圖1為實施例1所制備的電化學(xué)納米免疫傳感器的結(jié)構(gòu)圖。
【具體實施方式】
[0029]以下實施例用于說明本實用新型，但并不用來限制本實用新型的范圍。下述各實施例中，所使用的各類設(shè)備、試劑和材料若無特別說明，均為常規(guī)市售可得。
[0030]實施例1電化學(xué)納米免疫傳感器的制備
[0031]1、玻碳電極的預(yù)處理:
[0032]將玻碳電極依次分別用I.ΟμπκΟ.3μπι、0.05μπι粒徑的Ct-Al2O3漿在麂皮上拋光三次，且每次拋光后在超聲水浴中清洗30s，最后依次用HNO3和H2O按體積比1:1配制的混合液、無水乙醇和超純水清洗。在lmol/LH2S04溶液中用掃描范圍為1.0?一1.0￥，掃描速度為100mV/S的循環(huán)伏安法活化電極，重復(fù)掃描直至出現(xiàn)穩(wěn)定的循環(huán)伏安曲線。上述穩(wěn)定的循環(huán)伏安曲線滿足下述要求:在實驗室條件下預(yù)處理后的電極的循環(huán)伏安曲線的峰電位差應(yīng)在SOmV以下，并盡可能地接近64mV，電極方能使用，最后置于氮氣環(huán)境中干燥待用。
[0033]2、納米金(Nano-Au)溶膠的制備:
[0034]根據(jù)Frens法取0.0lg/lOOmL氯金酸溶液lOOmL，加入lg/100mL的梓檬酸鈉溶液4mL混勻，置于微波爐中低火保持8-10min，待其自然冷卻后用超純水補充至104mL即得納米金溶膠，置于4°C避光保存?zhèn)溆?。利用分光光度計對所制備的納米金溶膠在可見光范圍