先將凈化工作臺的紫外燈關(guān)閉，雙手用酒精棉球進行消毒，接種時先將接種環(huán)用酒精燈的火焰反復(fù)灼燒，待冷卻后用接種環(huán)挑取菌種的菌絲塊，能用接種環(huán)接種2塊菌絲塊，并快速接種至預(yù)先配制好的斜面培養(yǎng)基上，接種完畢后，將斜面培養(yǎng)基的試管口用火焰進行殺菌，然后方可塞入棉塞或膠塞；接種結(jié)束后，將接種后的菌種放入恒溫恒濕箱中，設(shè)定溫度為25°C，靜置培養(yǎng)48h即可完成菌種的活化；
其中，羊肚菌母種轉(zhuǎn)接和活化時的斜面培養(yǎng)基按質(zhì)量份數(shù)計包括以下組分:馬鈴薯:22份，葡萄糖:2份，瓊脂:1份，磷酸二氫鉀:0.3份，硫酸鎂0.3份，蒸餾水10份；
斜面培養(yǎng)基的制備具體為:首先把馬鈴薯洗凈并去皮，用刀把馬鈴薯切塊，大小均一，然后按照配方中的標準加入蒸餾水，煮沸30min后，用紗布對馬鈴薯溶液進行過濾，然后加入葡萄糖、瓊脂、磷酸二氫鉀和硫酸鎂，然后加水定容至100mL，再加熱lOmin，待所有藥品充分溶解后，裝入試管中，放到滅菌鍋里，在1125°C的條件下對其進行滅菌，滅菌28min后取出，放入凈化工作臺中打開紫外殺菌燈，殺菌24min最后自然冷卻至室溫得到斜面培養(yǎng)基;
(2)接種到搖瓶深層發(fā)酵培養(yǎng)基中，先配制深層發(fā)酵培養(yǎng)基，深層發(fā)酵培養(yǎng)基按質(zhì)量份數(shù)計包括以下成份:亞砸酸鈉8份，磷酸二氫鉀:0.2份，蒸餾水:7份，硫酸鎂:2份，黃豆粉:3份，麥麩:3份，玉米粉:1份；
深層發(fā)酵培養(yǎng)基的制備具體為:首先把麥麩、玉米粉、黃豆粉放入燒杯中，加水煮沸27min，然后用紗布濾去雜質(zhì)，加入磷酸二氫鉀和硫酸鎂，加水定容至lOOmL，再加熱lOmin，待所有藥品充分溶解后，裝入500ml的搖瓶中，放到滅菌鍋里，在121°C的條件下對其進行滅菌，26min后取出，放入凈化工作臺中打開紫外殺菌燈，殺菌31min，等待其自然冷卻，冷卻后向搖瓶中中加入亞砸酸鈉制得深層發(fā)酵培養(yǎng)基；
在凈化工作臺上，打開紫外燈，對相關(guān)的接種器具進行紫外照射殺菌35min，對接種環(huán)反復(fù)灼燒，然后從活化的斜面菌種中取一塊接入液態(tài)深層發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后用注射器向深層發(fā)酵培養(yǎng)基加入亞砸酸鈉，最后將搖瓶的瓶口放在酒精燈的火焰上方消毒，然后塞上棉塞，并用消毒后的報紙將瓶口封嚴，把接入羊肚菌菌種后的搖瓶放入振蕩培養(yǎng)箱中，控制培養(yǎng)溫度為25°C，振蕩培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)速為90r/min，振蕩3天后取出，得到富砸羊肚菌菌絲體；富砸羊肚菌深層發(fā)酵得到的富砸羊肚菌菌絲生物量為9g/L，富砸羊肚菌多糖得率為5%，砸含量為9.2 μ g/mL。
[0014]除上述實施例外，本發(fā)明還可以有其他實施方式。凡采用等同替換或等效變換形成的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明要求的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝，其特征在于，該深層發(fā)酵工藝的流程為:羊肚菌母種的轉(zhuǎn)接及活化-接種到搖瓶深層發(fā)酵培養(yǎng)基中-加入亞砸酸鈉-深層發(fā)酵培養(yǎng)-富砸羊肚菌菌絲體，其中: (1)羊肚菌母種的轉(zhuǎn)接，將母種轉(zhuǎn)接在配制好的斜面培養(yǎng)基上具體為:首先將接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、打火機以及斜面培養(yǎng)基放在凈化工作臺里，打開紫外燈，對它們進行紫外照射殺菌20-28min，關(guān)閉紫外燈，然后從冰箱中取出保藏的母種，接種時先將接種環(huán)用酒精燈的火焰反復(fù)灼燒，待冷卻后用接種環(huán)挑取母種，并快速接種至預(yù)先配制好的斜面培養(yǎng)基上，接種完成后，將斜面培養(yǎng)基的試管口用火焰進行殺菌，然后塞入棉塞或膠塞，將接種后的菌種放入恒溫恒濕箱中，控制溫度為24°C，靜置培養(yǎng)1-3天，然后將其放入0-3°C的冰箱中保臧； 羊肚菌母種的活化，活化前要將接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、打火機以及配制好的斜面培養(yǎng)基放在凈化工作臺里，打開紫外燈，對相關(guān)的接種器具進行紫外照射殺菌28-35min，然后從冰箱中取出保藏的要活化的菌種，開始接種前先將凈化工作臺的紫外燈關(guān)閉，雙手用酒精棉球進行消毒，接種時先將接種環(huán)用酒精燈的火焰反復(fù)灼燒，待冷卻后用接種環(huán)挑取菌種的菌絲塊，并快速接種至預(yù)先配制好的斜面培養(yǎng)基上，接種完畢后，將斜面培養(yǎng)基的試管口用火焰進行殺菌，然后方可塞入棉塞或膠塞；接種結(jié)束后，將接種后的菌種放入恒溫恒濕箱中，設(shè)定溫度為25°C，靜置培養(yǎng)24-48h即可完成菌種的活化； 其中，所述的羊肚菌母種轉(zhuǎn)接和活化時的斜面培養(yǎng)基按質(zhì)量份數(shù)計包括以下組分:馬鈴薯:20-25份，葡萄糖:1-2份，瓊脂:1-2份，磷酸二氫鉀:0.2-0.5份，硫酸鎂0.1-0.3份，蒸餾水10-20份； (2)接種到搖瓶深層發(fā)酵培養(yǎng)基中，先配制深層發(fā)酵培養(yǎng)基，所述的深層發(fā)酵培養(yǎng)基按質(zhì)量份數(shù)計包括以下成份:亞砸酸鈉5-10份，磷酸二氫鉀:0.1-0.3份，蒸餾水:5-8份，硫酸鎂:1_2份，黃顯粉:2_3份，麥麩:3_5份，玉米粉:1-3份； 所述深層發(fā)酵培養(yǎng)基的制備具體為:首先把麥麩、玉米粉、黃豆粉放入燒杯中，加水煮沸25-29min，然后用紗布濾去雜質(zhì)，加入磷酸二氫鉀和硫酸鎂，加水定容至100mL，再加熱.7-10min，待所有藥品充分溶解后，裝入500ml的搖瓶中，放到滅菌鍋里，在121°C的條件下對其進行滅菌，20-26min后取出，放入凈化工作臺中打開紫外殺菌燈，殺菌28_35min，等待其自然冷卻，冷卻后向搖瓶中中加入亞砸酸鈉制得深層發(fā)酵培養(yǎng)基； 在凈化工作臺上，打開紫外燈，對相關(guān)的接種器具進行紫外照射殺菌30-35min，對接種環(huán)反復(fù)灼燒，然后從活化的斜面菌種中取一塊接入液態(tài)深層發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后用注射器向深層發(fā)酵培養(yǎng)基加入亞砸酸鈉，最后將搖瓶的瓶口放在酒精燈的火焰上方消毒，然后塞上棉塞，并用消毒后的報紙將瓶口封嚴，把接入羊肚菌菌種后的搖瓶放入振蕩培養(yǎng)箱中，控制培養(yǎng)溫度為25-27°C，振蕩培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)速為90-100r/min，振蕩2_4天后取出，得到富砸羊肚菌菌絲體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝，其特征在于:在步驟(I)母種在轉(zhuǎn)接時每支斜面培養(yǎng)基能用接種環(huán)接種2塊母種，菌種在活化時每支斜面培養(yǎng)基能用接種環(huán)接種2塊菌絲塊。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝，其特征在于:所述斜面培養(yǎng)基的制備具體為:首先把馬鈴薯洗凈并去皮，用刀把馬鈴薯切塊，大小均一，然后按照配方中的標準加入蒸餾水，煮沸30min后，用紗布對馬鈴薯溶液進行過濾，然后加入葡萄糖、瓊脂、磷酸二氫鉀和硫酸鎂，然后加水定容至lOOmL，再加熱5-10min，待所有藥品充分溶解后，裝入試管中，放到滅菌鍋里，在120-125°C的條件下對其進行滅菌，滅菌25-30min后取出，放入凈化工作臺中打開紫外殺菌燈，殺菌24-28min最后自然冷卻至室溫得到斜面培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富砸羊肚菌深層發(fā)酵工藝，其特征在于:富砸羊肚菌深層發(fā)酵得到的富砸羊肚菌菌絲生物量為9-10g/L，富砸羊肚菌多糖得率為3-5%，砸含量為.9.0-9.3 μ g/mL0
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種富硒羊肚菌深層發(fā)酵工藝，該富硒羊肚菌深層發(fā)酵工藝包括羊肚菌母種的轉(zhuǎn)接及活化-接種到搖瓶深層發(fā)酵培養(yǎng)基中-加入亞硒酸鈉-深層發(fā)酵培養(yǎng)-富硒羊肚菌菌絲體，本發(fā)明該發(fā)酵工藝簡單易行，發(fā)酵效率高，成本低廉，制備出的富硒羊肚菌含硒高，產(chǎn)量高，安全系數(shù)好。
【IPC分類】C05G3-00, A01G1-04
【公開號】CN104823701
【申請?zhí)枴緾N201510189879
【發(fā)明人】黃名珠, 王肇生
【申請人】吳中區(qū)胥口精益生物醫(yī)藥研究所
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月21日