黔東南小香雞隱性白羽新品系的培育方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種黔東南小香雞隱性白羽新品系的培育方法及應(yīng)用，屬養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]黔東南小香雞是貴州地方優(yōu)良家禽品種資源之一，主產(chǎn)于貴州省從江、榕江和黎平縣及鄰近地區(qū)，以“小、土、香”著稱。在多年的品種選育和種質(zhì)創(chuàng)新過程中發(fā)現(xiàn)了白羽個(gè)體，約占總雞群3?5%，該群體品種特征明顯，全身覆蓋純白色羽毛，多為平頭單冠，喙、脛為黑褐色，肉色為白或黑色，少數(shù)個(gè)體具有脛羽，俗稱褲裙雞；該雞具有耐粗飼，抗病力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，且肉質(zhì)細(xì)嫩，口感鮮美，營養(yǎng)豐富。更為難得的是白羽雞抱性較低，年平均產(chǎn)蛋量較同品種的有色羽雞群高出40?50%，其缺點(diǎn)是體型小、生長慢、產(chǎn)蛋量低、蛋重小。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于:提供一種提高準(zhǔn)確性、縮短世代間隔、加快育種進(jìn)程的黔東南小香雞隱性白羽新品系的培育方法及應(yīng)用，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)方案:一種黔東南小香雞隱性白羽新品系的培育方法，包括以下步驟:
(O用從黔東南小香雞分離出的白羽雞自交繁殖產(chǎn)生F1R ;
(2)WF1代中篩選出雞PMELl7基因ii的隱性純合等位基因型的個(gè)體:
①樣品米集
采集黔東南小香雞白羽雞的血液，并加EDTA - Na2抗凝，一 20°C保存?zhèn)溆茫?br> ②基因組DNA提取與引物設(shè)計(jì)
利用TIANamp Blood DNA Kit試劑盒提取目的DNA，根據(jù)NCBI公布的雞PMEL17基因(登錄號為:GenBank Access1n N0.AY636129)的第10外顯子序列，采用Primer5.0軟件自行設(shè)計(jì)引物，目的片段擴(kuò)增長度528bp ;
F 5， GCACAGCGCAGATGCAGAC 3，
R 5， CAGCAGCAAACGCAGGGTAG 3，
③25uLPCR反應(yīng)體系為
DNA 模板 I uL，上下游引物各 2 uL，2xTaq PCR MasterMix 試劑 12.5 uL，加 ddH20 至7.5 uL;PCR 反應(yīng)參數(shù)(30 循環(huán)):94°C預(yù)變性 5 min ;94°C變性 30 s，57°C退火 45 s，72°C延伸90 s ;最后72°C延伸10 min，4°C保存；其中，2xTaq PCR MasterMix購自天根生化科技有限公司；
④PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測及結(jié)果判定
取10 uL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(電泳電壓:120V，電泳時(shí)間:30min)，凝膠成像系統(tǒng)檢測是否為目的條帶，再切膠回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，進(jìn)行直接測序檢測黔東南小香雞白羽雞PMEL17基因多態(tài)性；結(jié)果顯示樣本的PMEL17基因序列第10外顯子49位點(diǎn)起有9-bp缺失變異(-CTGGGCACC-)，均為ii基因型，且對應(yīng)三個(gè)氨基酸的缺失，即色氨酸，丙氨酸和脯氨酸。
[0005]⑤待檢個(gè)體的選擇與淘汰
根據(jù)檢測結(jié)果，培育純合隱性白羽雞群體的選留ii基因型，將所有純合隱性白羽個(gè)體留種進(jìn)行擴(kuò)繁，將形成一個(gè)純合群體，用于育種；
(3)用三黃雞純系或其他有色羽雞純系與匕進(jìn)行測交，剔除F分離出的顯性白羽個(gè)體和有色羽個(gè)體，結(jié)合步驟(2)的檢測結(jié)果選育出隱性純合的個(gè)體公母雞，然后自繁生產(chǎn)W ；
(4)按照步驟(3)的方法，對步驟(3)中的W進(jìn)行反復(fù)測交、選育，不斷剔除分離出顯性白羽個(gè)體和有色羽個(gè)體；將留選的隱性白羽個(gè)體進(jìn)行自繁擴(kuò)群，組建家系，培育出隱性白羽新品系。
[0006]本發(fā)明還提供了一種采用上述方法培育出的隱性白羽新品系用于提高貴州地方雞種的產(chǎn)蛋率的方法，該方法是用隱性白羽雞作父本，中型高產(chǎn)蛋雞作母本，生產(chǎn)出F1R雞；用F1代雞作母本，貴州地方雞作父本，生產(chǎn)出F2代雞。培育出F2代雞保持了貴州地方雞種原有的體型外貌和優(yōu)良的肉質(zhì)風(fēng)味，因含有外來高產(chǎn)蛋雞25%的血緣，會在一定程度上提高生長速度，增加產(chǎn)蛋量和蛋重，適合規(guī)模化生態(tài)養(yǎng)殖。
[0007]本發(fā)明還提供了一種采用上述方法培育出的隱性白羽新品系用于改善外來雞種的肉質(zhì)風(fēng)味的方法，該方法用隱性白羽雞作父本，速生型肉雞作母本，生產(chǎn)出F1代雞。培育出F1代雞含有隱性白羽雞血緣50%，可顯著改善肉質(zhì)風(fēng)味，增強(qiáng)抗病力。
[0008]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明利用同質(zhì)選配和近交繁育，結(jié)合分子標(biāo)記輔助選育，提高了黔東南小香雞白羽雞基因純合度以及遺傳穩(wěn)定性。同時(shí)，由于系間遺傳結(jié)構(gòu)差異較大，采用本發(fā)明的方法進(jìn)行雜交時(shí)會產(chǎn)生明顯的雜種優(yōu)勢，因此將該隱性白羽雞應(yīng)用于二系或三系配套雜交，既加速種群的遺傳進(jìn)展和現(xiàn)有品種的改良，又能培育出符合市場需求的品種。而且培育出遺傳性能穩(wěn)定的地方隱性白羽新品系參與到配套應(yīng)用中，具有以下優(yōu)點(diǎn):一是抗病力強(qiáng)，無引進(jìn)疫病風(fēng)險(xiǎn)；二是在提高產(chǎn)蛋率的同時(shí)保持了小體型，降低耗料比，適合規(guī)?；B(yǎng)殖；三是保持了地方雞種的優(yōu)良肉質(zhì)風(fēng)味。
【附圖說明】
[0009]圖1為本發(fā)明中PMEL17基因ii的隱性純合等位基因型的測序圖。
[0010]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1的技術(shù)路線圖。
[0011]圖3為本發(fā)明實(shí)施例2的技術(shù)路線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0012]為了使本發(fā)明目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0013]本發(fā)明一種黔東南小香雞隱性白羽新品系的培育方法，包括以下步驟:
(I)用從黔東南小香雞分離出的白羽雞自交繁殖F1R。
[0014](2)從F1代中篩選出雞PMELl7基因ii的隱性純合等位基因型的個(gè)體。
[0015]①樣品采集采集黔東南小香雞白羽雞36只。翅下靜脈采血I?1.5mL，加EDTA — Na2抗凝，一 20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0016]②基因組DNA提取與引物設(shè)計(jì)
利用TIANamp Blood DNA Kit試劑盒提取目的DNA。根據(jù)NCBI公布的雞PMEL17基因(登錄號為:GenBank Access1n N0.AY636129)的第10外顯子序列，采用Primer5.0軟件自行設(shè)計(jì)引物，目的片段擴(kuò)增長度528bp。
[0017]F 5，GCACAGCGCAGATGCAGAC 3，
R 5， CAGCAGCAAACGCAGGGTAG 3，
③25 uLPCR反應(yīng)體系為
DNA 模板 I uL，上下游引物各 2 uL，2xTaq PCR MasterMix 試劑 12.5 uL，加 ddH20 至7.5 uLo PCR 反應(yīng)參數(shù)(30 循環(huán)):94°C預(yù)變性 5 min ;94°C變性 30 s，57°C退火 45 s，72°C延伸90 s ;最后72°C延伸10 min，4°C保存。其中，2xTaq PCR MasterMix購自天根生化科技有限公司。
[0018]④PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測及結(jié)果判定