取10 uL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)(電泳電壓:120V，電泳時(shí)間:30min)，凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)是否為目的條帶，再切膠回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，進(jìn)行直接測(cè)序檢測(cè)黔東南小香雞白羽雞PMEL17基因多態(tài)性。結(jié)果顯示36個(gè)樣本的PMEL17基因序列第10外顯子49位點(diǎn)起有9-bp缺失變異(-CTGGGCACC-)，均為ii基因型，且對(duì)應(yīng)三個(gè)氨基酸的缺失，即色氨酸，丙氨酸和脯氨酸。測(cè)序圖如圖1所示。
[0019]⑤待檢個(gè)體的選擇與淘汰
根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，培育純合隱性白羽雞群體的選留ii基因型，將所有純合隱性白羽個(gè)體留種進(jìn)行擴(kuò)繁，將形成一個(gè)純合群體，用于育種。
[0020](3)用三黃雞純系或其他有色羽雞純系與匕進(jìn)行測(cè)交，剔除F1中分離出的顯性白羽個(gè)體和有色羽個(gè)體，結(jié)合步驟(2)的檢測(cè)結(jié)果選育出隱性純合的個(gè)體公母雞，然后自繁生產(chǎn)W。
[0021](4)按照步驟(3)的方法，對(duì)步驟(3)中的W進(jìn)行多次測(cè)交、選育，不斷剔除分離出顯性白羽個(gè)體和有色羽個(gè)體；將留選的隱性白羽個(gè)體進(jìn)行自繁擴(kuò)群，組建家系，培育出隱性白羽新品系。
[0022]實(shí)施例1
本發(fā)明一種采用上述方法培育出的隱性白羽新品系用于提高貴州地方雞種的產(chǎn)蛋率的方法，該方法的實(shí)施步驟參見(jiàn)圖2，即:
(I) F1代雞的培育:選用隱性白羽雞作父本，其特點(diǎn)是遺傳性能穩(wěn)定，品種特征明顯體型外貌整齊，生長(zhǎng)性能良好，7月齡公雞體重達(dá)1.2 Kg0
[0023]中型高產(chǎn)蛋雞作母本(一般產(chǎn)褐殼蛋)，其特點(diǎn)是遺傳基礎(chǔ)較純，產(chǎn)蛋性能良好，72周齡產(chǎn)蛋量可達(dá)270枚以上，平均蛋重55 g以上。
[0024]采用人工授精技術(shù)，將上述的親本進(jìn)行二系配套，生產(chǎn)出F1代雞。
[0025](2) F2代雞的培育:選擇體型外貌整齊的F i代雞作母本。
[0026]選擇貴州地方雞(如威寧雞、瑤山雞)作父本，其優(yōu)點(diǎn)是耐粗飼、肉質(zhì)好、體型較大，生長(zhǎng)發(fā)育快，毛色絢麗，全身以黃或紅羽為主，翅邊緣和尾羽有少量黑色羽，紅冠，脛、趾黑或青色。
[0027]采用人工授精技術(shù)，將上述的親本進(jìn)行三系配套，生產(chǎn)出F2代雞。
[0028]培育出F2代雞保持了貴州地方雞種原有的體型外貌和優(yōu)良的肉質(zhì)風(fēng)味，因含有外來(lái)高產(chǎn)蛋雞25%的血緣，會(huì)在一定程度上提高生長(zhǎng)速度，增加產(chǎn)蛋量和蛋重，適合規(guī)模化生態(tài)養(yǎng)殖。
[0029]實(shí)施例2
本發(fā)明一種采用上述方法培育出的隱性白羽新品系用于改善外來(lái)雞種的肉質(zhì)風(fēng)味的方法，該方法的實(shí)施步驟參見(jiàn)圖3，即:
(I)選用隱性白羽雞作父本，其特點(diǎn)是遺傳性能穩(wěn)定，品種特征明顯體型外貌整齊，生長(zhǎng)性能良好，7月齡公雞體重達(dá)1.2 Kg0
[0030]速生型肉雞作母本，其特點(diǎn)是遺傳基礎(chǔ)較純，生長(zhǎng)速度快，但肉質(zhì)較差、口感粗糙。
[0031](2)采用人工授精技術(shù)，將上述的親本進(jìn)行二系配套，生產(chǎn)出F1代雞。
[0032]培育出F1代雞含有隱性白羽雞血緣50%，可顯著改善肉質(zhì)風(fēng)味，增強(qiáng)抗病力；在育種中可通過(guò)多次雜交選育，獲得血緣含量不同的新品系。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種黔東南小香雞隱性白羽新品系的培育方法，其特征在于包括以下步驟: (O用從黔東南小香雞分離出的白羽雞自交繁殖產(chǎn)生F1R ; (2)WF1代中篩選出雞PMELl7基因ii的隱性純合等位基因型的個(gè)體: ①樣品米集 采集黔東南小香雞白羽雞的血液，并加EDTA - Na2抗凝，一 20°C保存?zhèn)溆茫? ②基因組DNA提取與引物設(shè)計(jì) 利用TIANamp Blood DNA Kit試劑盒提取目的DNA，根據(jù)NCBI公布的雞PMEL17基因(登錄號(hào)為:GenBank Access1n N0.AY636129)的第10外顯子序列，采用Primer5.0軟件自行設(shè)計(jì)引物，目的片段擴(kuò)增長(zhǎng)度528bp ;F 5， GCACAGCGCAGATGCAGAC 3，R 5， CAGCAGCAAACGCAGGGTAG 3， ③25uLPCR反應(yīng)體系為 DNA 模板 I uL，上下游引物各 2 uL，2xTaq PCR MasterMix 試劑 12.5 uL，加 ddH20 至7.5 uL;PCR 反應(yīng)參數(shù)(30 循環(huán)):94°C預(yù)變性 5 min ;94°C變性 30 s，57°C退火 45 s，72°C延伸90 s ;最后72°C延伸10 min，4°C保存；其中，2xTaq PCR MasterMix購(gòu)自天根生化科技有限公司； ④PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)及結(jié)果判定 取10 uL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)(電泳電壓:120V，電泳時(shí)間:30min)，凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)是否為目的條帶，再切膠回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，進(jìn)行直接測(cè)序檢測(cè)黔東南小香雞白羽雞PMEL17基因多態(tài)性；結(jié)果顯示樣本的PMEL17基因序列第10外顯子49位點(diǎn)起有9-bp缺失變異(-CTGGGCACC-)，均為ii基因型，且對(duì)應(yīng)三個(gè)氨基酸的缺失，即色氨酸，丙氨酸和脯氨酸； ⑤待檢個(gè)體的選擇與淘汰 根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，培育純合隱性白羽雞群體的選留ii基因型，將所有純合隱性白羽個(gè)體留種進(jìn)行擴(kuò)繁，將形成一個(gè)純合群體，用于育種； (3)用三黃雞純系或其他有色羽雞純系與匕進(jìn)行測(cè)交，剔除F分離出的顯性白羽個(gè)體和有色羽個(gè)體，結(jié)合步驟(2)的檢測(cè)結(jié)果選育出隱性純合的個(gè)體公母雞，然后自繁生產(chǎn)W ； (4)按照步驟(3)的方法，對(duì)步驟(3)中的W進(jìn)行反復(fù)測(cè)交、選育，不斷剔除分離出顯性白羽個(gè)體和有色羽個(gè)體；將留選的隱性白羽個(gè)體進(jìn)行自繁擴(kuò)群，組建家系，培育出隱性白羽新品系。
2.一種采用權(quán)利要求1所述的方法培育出的隱性白羽新品系用于提高貴州地方雞種的產(chǎn)蛋率的方法，其特征在于:用隱性白羽雞作父本，中型高產(chǎn)蛋雞作母本，生產(chǎn)出F1代雞；用F1代雞作母本，貴州地方雞作父本，生產(chǎn)出F2代雞。
3.一種采用權(quán)利要求1所述的方法培育出的隱性白羽新品系用于改善外來(lái)雞種的肉質(zhì)風(fēng)味的方法，其特征在于:用隱性白羽雞作父本，速生型肉雞作母本，生產(chǎn)出F1代雞。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種黔東南小香雞隱性白羽新品系的培育方法及應(yīng)用，該方法按以下步驟進(jìn)行：（1）用從黔東南小香雞分離出的白羽雞自交繁殖F1代；（2）根據(jù)分子標(biāo)記輔助選擇，從F1代中篩選出ii的隱性純合等位基因型的個(gè)體；（3）用三黃雞純系或其他有色羽雞純系與F1進(jìn)行測(cè)交，剔除F1中分離出的顯性白羽個(gè)體和有色羽個(gè)體，結(jié)合步驟（2）的檢測(cè)結(jié)果選育出隱性純合的個(gè)體公母雞，然后自繁生產(chǎn)B；（4）按照步驟（3）的方法，對(duì)步驟（3）中的W進(jìn)行反復(fù)測(cè)交、選育，不斷剔除分離出顯性白羽個(gè)體和有色羽個(gè)體；將留選的隱性白羽個(gè)體進(jìn)行自繁擴(kuò)群，組建家系，培育出隱性白羽新品系。
【IPC分類】A01K67-02
【公開(kāi)號(hào)】CN104823919
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510251782
【發(fā)明人】朱麗莉, 伍革民, 韓雪, 陶宇航, 李冬光, 李亮
【申請(qǐng)人】貴州省畜牧獸醫(yī)研究所
【公開(kāi)日】2015年8月12日
【申請(qǐng)日】2015年5月18日