br>[0019] 在脫毒苗結球培養(yǎng)過程中，通過對培養(yǎng)晝夜溫差的調控，調節(jié)試管苗的結球速度， 針對分蘗洋蔥生長的適宜溫度分別設置25°C /25°C、25°C /20°C、25°C /15°C共3組晝夜溫 度處理，篩選最佳培養(yǎng)溫度。在晝夜溫差為KTC時鱗莖直徑和鱗莖鮮重要優(yōu)于其他處理。 由此確定在分蘗洋蔥脫毒苗結球過程中，最佳培養(yǎng)溫度為白天25°C，夜間15°C (見表5)。
[0020] 在脫毒苗結球培養(yǎng)過程中，通過對培養(yǎng)過程中的光照強度、光周期的調控，調節(jié) 試管苗的結球速度，針對分蘗洋蔥生長條件分別設置3組光照強度、光周期處理。結果表 明，隨光照強度和光照時間的延長，試管球的平均直徑和鱗莖鮮重逐步增加，在光照強度為 25001u X，16h光照、8h黑暗條件時有利于分蘗洋蔥脫毒試管苗結球，其試管球鱗莖平均直 徑、鱗莖鮮重均高于其他培養(yǎng)條件(表6 )。
[0021] 通過結球條件的優(yōu)化建立了高效的分蘗洋蔥脫毒苗試管鱗莖誘導體系，為分蘗洋 蔥脫毒種苗的快速繁育提供了有利保障。

注：MS為基礎培養(yǎng)基。
[0025] 實施例4利用試管微鱗莖盤增殖技術建立分蘗洋蔥脫毒種苗快繁體系 (1)試管微鱗莖盤的獲得 分蘗洋蔥試管苗經(jīng)過結球培養(yǎng)6周后或分蘗洋蔥試管球直徑達到8_以上時，可切取 試管微鱗莖盤。以主生長點鱗莖盤兩條垂直的切線為切口，進行縱向切割，切成4份，其中 只有一個1/4份切塊帶有主生長點鱗莖盤，剝掉主生長點及主生長點所在的鱗莖盤。再將 1/4份鱗莖盤上部的鱗片基部再進行切割，至遠主生長點端高，近主生長點端低的斜面(如 圖3、圖4)。
[0026] 試管微鱗莖盤在添加6-BAO. 6mg/L、NAAO. lmg/L的培養(yǎng)基中經(jīng)過2周的培養(yǎng)，可 在顯微鏡下觀察到叢生芽的分化，3周后，叢生芽株高最大可達lcm，4周后叢生芽株高可達 3cm (如圖5)，且分化數(shù)達到最大值，每個鱗莖盤的最大增殖系數(shù)(增殖系數(shù)=分化芽總數(shù)/ 接種數(shù))可達34。隨著誘導時間的增加，鱗莖盤分化數(shù)增加，但在誘導第4周后鱗莖盤分化 數(shù)不再增加，鱗莖盤的分化率達最大值。
[0027] (2)田間開放的鱗莖盤與試管微鱗莖盤對分蘗洋蔥試管苗增殖的影響 分別以田間開放的鱗莖盤和試管微鱗莖作為外植體進行分蘗洋蔥快速繁育，實驗結果 表明，試管微鱗莖的增殖效率是田間開放的鱗莖盤增值效率的1. 66倍(見表7)。說明試管 微鱗莖盤具有更高的分化能力，適合作為分蘗洋蔥快速繁育的最佳外植體。
注：MS為基礎培養(yǎng)基。
[0029] (3)試管球發(fā)育程度對試管苗增殖的影響 以分蘗洋蔥脫毒試管苗提供的脫毒種球鱗莖盤作為外植體，以不同生長期的分蘗洋蔥 試管球鱗莖盤為外植體進行試管苗增殖培養(yǎng)，結果表明，隨著結球培養(yǎng)時間的增加，試管球 鱗莖盤的分化能力逐漸增強，結球培養(yǎng)進行到第4周，鱗莖平均直徑達到3. 56mm時，具有分 化能力，但平均分蘗數(shù)不高；培養(yǎng)到第6周后的試管球，分化能力大幅提高，平均分蘗數(shù)達 到27. 63,在培養(yǎng)第10周時平均分蘗數(shù)達到最大32. 19,之后分化能力下降。由此，我們確 定結球培養(yǎng)時間最短，分化能力較高的時間點-結球培養(yǎng)第6周作為分蘗洋蔥試管鱗莖盤 的最佳提供期(見表8)。
注：MS為基礎培養(yǎng)基。
[0031] 在此基礎上，以1/2MS為基礎培養(yǎng)基，通過調節(jié)培養(yǎng)基中的糖濃度、NAA濃度，調節(jié)叢生 苗生長、生根速度。結果表明，在糖濃度為45mg/L、NAA0. lmg/L的培養(yǎng)基（PH=5. 8)中，試管 苗生根最快、長勢最佳(見表9)。1周后，生根率達100%，試管苗顏色濃綠、粗壯，一周后獲得 分蘗洋蔥種苗(見圖6)。
注：MS為基礎培養(yǎng)基。
[0033] 實施例5利用茗蔥鱗莖盤增殖技術建立茗蔥種苗快繁體系 (1) 茗蔥鱗莖盤的獲得 1) 取茗蔥鱗莖，去除茗蔥須根，剝除外層鱗片，保留以中心生長點為中心，直徑為 0. 4-lcm的鱗莖盤及其上部包裹的鱗片，獲得茗蔥的中心部位（圖7); 2) 將茗蔥中心部位流水沖洗半小時，用75%酒精浸泡消毒Imin后，隨后用1% NaClO 溶液浸泡消毒15- 20min，無菌水沖洗3- 5次以清除殘余的NaCIO,用濾紙吸干水分備用； 3) 經(jīng)過外植體滅菌后，在中心部位距底端3 - 5mm處橫切并去除上部鱗片，沿主生長點 垂直切線方向，縱向分割成4份，去除主生長點及主生長點所在的鱗莖盤備用（圖8); (2) 茗蔥鱗莖盤增殖 1)以 MS 為基礎培養(yǎng)基，添加 6-BA (0· 5-2. 0 mg/L)、NAA (0· 1-1. 0 mg/L)，PH 調節(jié)至 5. 8,配制增殖培養(yǎng)基備用； 2)將鱗莖盤平均切割成4份，接種于增殖培養(yǎng)基中（圖9)，經(jīng)過8周的誘導后，叢生苗 最大增殖系數(shù)可達20 (見表10)。
注：MS為基礎培養(yǎng)基。
[0035] (3)茗蔥種苗獲得 1) 以MS為基礎培養(yǎng)基，添加 NAA (0. 1-1.0 mg/L)，PH調節(jié)至5. 8,配制生根培養(yǎng)基備 用； 2) 將叢生苗接種于生根培養(yǎng)基中，3周后叢生苗生根(表11)。
[0036] 3)將生根后的叢生苗分割成單株，接種于壯苗培養(yǎng)基中，4個月后可獲得茗蔥種苗 (如圖10)。種苗經(jīng)馴化后可定植于田間用于生產(chǎn)。
注：MS為基礎培養(yǎng)基。
[0038] 實施例6利用大蒜微鱗莖盤增殖技術建立大蒜種苗快繁體系 (1)以大蒜莖尖為外植體獲得大蒜增殖苗 將大蒜莖尖分別接種于不同濃度的6-BA、NAA組合，6-BA、IAA組合培養(yǎng)基中，兩種激素 組合均能夠獲得大蒜增殖苗，但相同濃度的IAA和NAA在進行增殖誘導時，差異很大。其中 在6-BA、NAA激素組合中誘導的增殖苗長勢較好，且分化系數(shù)較高，在培養(yǎng)4周時，平均增殖 系數(shù)可達7. 75 ;6-BA、IAA激素組合雖然也能夠實現(xiàn)莖尖增殖，但所獲得的增殖苗細、弱，分 化系數(shù)低?？梢姡琁AA的作用效果不如NAA。因此確定MS+6-BA2. Omg/L+NAA 0. 5mg/L培養(yǎng) 基為莖尖增殖最佳培養(yǎng)基(見表12)。
注：MS為基礎培養(yǎng)基。
[0040] (2)以大蒜鱗莖盤為外植體獲得再生苗 取獨立蒜瓣，剝去外皮及須根，用流水沖洗0.5 h，用75%酒精浸泡消毒I min后，隨后 用1 % NaClO溶液浸泡消毒15-20 min，無菌水沖洗3-5次以清除殘余的NaCIO,用濾紙吸干 水分備用（見圖11)。2) 去除外部包裹的白色部分，在距底端3 - 5mm處橫切并去除上部鱗片，沿主生長點垂直 切線方向，縱向分割成4份，去除主生長點及主生長點所在的鱗莖盤，保留2-3mm2的鱗莖盤 (見圖12)，分別接種于以MS為基礎培養(yǎng)基，添加6-BA (1. 0-3. Omg/L)、NAA (0· 5-3. 0 mg/ L)，PH調節(jié)至5. 8的增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導叢生芽。在25°C、光照時間為16h、光照強度 為25001UX條件下，進行培養(yǎng)。
[0041] 經(jīng)過4周的誘導，以6-BA、NAA組合誘導效果最好；6-BA、IAA組合也能誘導出叢生 芽，但增殖系數(shù)低，再生苗存在畸形苗。其中鱗莖盤在添加6-BA2. Omg/L、NAAO. 5mg/L的培 養(yǎng)基中，4周后每個鱗莖盤最大增殖系數(shù)(增殖系數(shù)=分化芽總數(shù)/接種數(shù)）可達40 (見表 13)。隨著誘導時間的增加，鱗莖盤分化數(shù)增加，但在誘導第4周后鱗莖盤分化數(shù)不再增加， 鱗莖盤的分化率達最大值(見圖13)。
注：MS為基礎培養(yǎng)基。
【主權項】
1. 蔥屬植物鱗莖盤快速繁殖方法，它包括： 1) 取蔥屬植物鱗莖，去除蔥屬植物須根，剝除外層鱗片，保留以中心生長點為中心，直 徑為0. 4-lcm的鱗莖盤及其上部包裹的鱗片，獲得蔥屬植物的中心部位；清洗、消毒； 2) 在中心部位距底端3 - 5mm處橫切并去除上部鱗片，沿主生長點垂直切線縱向分割 成4份，去除主生長點及主生長點所在的鱗莖盤，接種于PH5. 8,MS+6-BA0. 1-2.Omg/L、 NAA0. 05-1.Omg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導叢生芽； 3) 繼續(xù)培養(yǎng)成苗。2. 根據(jù)權利要求1所述的所述的蔥屬植物鱗莖盤快速繁殖方法，其特征在于，所述的 MS+6-BA0· 1-1.Omg/L、NAA0·05-0.lmg/L。3. 根據(jù)權利要求2所述的蔥屬植物鱗莖盤快速繁殖方法，其特征在于：所述的蔥屬植 物鱗莖盤為實驗室試管微鱗莖盤。4. 根據(jù)權利要求3所述的蔥屬植物鱗莖盤快速繁殖方法，其特征在于：所述的試管苗 試管微鱗莖盤的結球誘導培養(yǎng)時間為6周。5. 根據(jù)權利要求1、2、3或4所述的蔥屬植物鱗莖盤快速繁殖方法，其特征在于：所述 的切割成4份，是以主生長點兩條垂直的切線為切口，縱向進行切割，切成4份，其中只有一 個1/4份切塊帶有主生長點鱗莖盤，剝掉主生長點及主生長點所在的鱗莖盤。6. 根據(jù)權利要求5所述的蔥屬植物鱗莖盤快速繁殖方法，其特征在于：所述的1/4份 鱗莖盤上部的鱗片基部再進行切割，至遠主生長點端高，近主生長點端低的斜面。7. 根據(jù)權利要求1或6所述的蔥屬植物鱗莖盤快速繁殖方法，其特征在于：所述的清 洗、消毒為流水沖洗0.5h，用75%酒精浸泡消毒1min后，再用1 %NaCIO溶液浸泡消毒 15- 20min，無菌水沖洗3- 5次以清除殘余的NaCIO,用濾紙吸干水分。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蔥屬植物鱗莖盤快速繁殖方法，將蔥屬植物中心部位清洗、消毒，在中心部位距底端3—5mm處橫切后去除上部鱗片，沿主生長點垂直切線縱向分割成4份，去除主生長點及主生長點所在的鱗莖盤，誘導叢生芽，并培養(yǎng)成苗。通過上述培養(yǎng)過程的優(yōu)化建立了蔥屬植物鱗莖盤快速繁殖體系，獲得了大量的脫毒試管苗，該體系增殖時間短，增殖系數(shù)大，遺傳穩(wěn)定性高，通過該體系能夠實現(xiàn)蔥屬植物的快速繁育?？梢詾槭[屬植物脫毒種苗的工廠化生產(chǎn)提供低價格成本、低時間成本的有力保障，促進蔥屬植物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105265316
【申請?zhí)枴緾N201510730266
【發(fā)明人】王秀峰, 張悅, 馬藝蕎, 王學國, 王健鸝, 于永輝, 聶楚楚, 馮博
【申請人】吉林省蔬菜花卉科學研究院
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2015年11月2日