一種降低八棱海棠種子病毒帶毒率提高發(fā)芽率的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于果樹(shù)脫毒種苗繁育技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種降低八棱海棠種子病毒帶 毒率提高發(fā)芽率的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蘋果是我國(guó)的主栽果樹(shù)之一，其栽培面積和總產(chǎn)量均居世界首位，但單產(chǎn)低、品質(zhì) 差，與其地位極不相符，病毒病的危害是導(dǎo)致該現(xiàn)象的重要原因之一。蘋果病毒病不僅嚴(yán)重 影響了果樹(shù)的生長(zhǎng)，降低了果實(shí)產(chǎn)量和品質(zhì)以及果品貯藏性和耐運(yùn)力，而且影響根系對(duì)土 壤營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用，對(duì)蘋果生產(chǎn)危害很大，培育無(wú)毒苗木是目前防治蘋果病毒病的 唯一有效措施。
[0003] 砧木是果樹(shù)生長(zhǎng)的基礎(chǔ)，對(duì)控制樹(shù)勢(shì)，增強(qiáng)果樹(shù)抗逆性及抗病能力，擴(kuò)大果樹(shù)的適 生范圍具有重要意義?，F(xiàn)在我國(guó)生產(chǎn)上普遍應(yīng)用的蘋果苗木均以實(shí)生苗為基砧，其作為果 樹(shù)生產(chǎn)的基礎(chǔ)，能夠直接影響接穗的生長(zhǎng)和結(jié)果。目前蘋果生產(chǎn)中應(yīng)用較多的蘋果砧木有 山定子、西府海棠、湖北海棠、楸子、新疆野蘋果等。八棱海棠又名懷來(lái)海棠樹(shù)，屬薔薇科，仁 果亞科，蘋果屬，屬于楸子的一種。八棱海棠砧木具有樹(shù)體強(qiáng)健，根系發(fā)達(dá)、須根較多、抗寒、 抗旱、抗?jié)?、抗鹽堿、抗病蟲、耐瘠薄、適應(yīng)性廣，無(wú)論平地、山坡、丘陵、砂荒均能栽植。在我 國(guó)山東、河北、河南等地蘋果苗木繁育應(yīng)用非常廣泛。
[0004] 無(wú)毒苗木的生產(chǎn)主要通過(guò)脫毒的品種和中間砧與實(shí)生苗嫁接完成，這種生產(chǎn)方式 的前提是保證實(shí)生苗不帶病毒。長(zhǎng)期以來(lái)，人們普遍認(rèn)為果樹(shù)砧木實(shí)生苗不攜帶病毒或帶 毒率很低，但是，現(xiàn)有的研究結(jié)果表明，蘋果潛隱性病毒可以通過(guò)汁液、工具的交叉以及地 下根系的交接長(zhǎng)合進(jìn)行傳播;蘋果莖溝病毒可以通過(guò)種子傳播，染病母株的后代群體平均 帶毒率為5.98 %。，蘋果銹果類病毒除通過(guò)修剪工具進(jìn)行傳播外，也可通過(guò)種子傳播，其中 種子傳毒率為7.7 %。
[0005] 作為無(wú)毒苗木的基砧，應(yīng)用八棱海棠育苗，需要將種子進(jìn)行低溫層積后播種?，F(xiàn)有 的研究表明，八棱海棠種子主要攜帶蘋果莖溝病毒和蘋果銹果類病毒2種病毒，蘋果莖溝病 毒侵染率為3.3 %，蘋果銹果類病毒帶毒率為26.7 %，復(fù)合侵染率3.3 %，總體帶毒率達(dá)到 26.7%，由于苗木生產(chǎn)中不可能對(duì)每株實(shí)生苗進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)重影響了我國(guó)無(wú)病毒苗木的繁 育。同時(shí)，八棱海棠種子出苗率比較低，一般僅10%左右，嚴(yán)重增加了蘋果育苗的生產(chǎn)成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決以上現(xiàn)有技術(shù)中八棱海棠種子蘋果病毒病帶毒率高，出苗率低，生產(chǎn)成 本高的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種對(duì)八棱海棠種子病毒病脫除效果好，植株出苗率高，長(zhǎng)勢(shì)好 的方法。
[0007] 本發(fā)明提供一種降低八棱海棠種子病毒帶毒率提高發(fā)芽率的方法，其特征在于： 采用1%高錳酸鉀水溶液浸泡八棱海棠種子，進(jìn)行沙藏、播種、獲取無(wú)病毒苗木繁育的基砧。
[0008] 本發(fā)明包括以下步驟：
[0009] (1)種子采集:在健康、無(wú)病害的樹(shù)上，采收果實(shí)成熟后的八棱海棠種子;將果實(shí)環(huán) 狀切開(kāi)，取出種子用清水清洗2遍，去除果肉和種子表面的果膠，陰干后，放干燥通風(fēng)處保 存；
[0010] (2)高錳酸鉀處理:在1月上旬，將種子放入1 %高錳酸鉀水溶液浸泡30分鐘，用自 來(lái)水沖洗2次，晾干后，放置在背陰處沙藏；
[0011 ] ( 3 )播種：在3月中下旬，在平均氣溫5-7°C時(shí)開(kāi)始播種；播種量1 . 5-2 . OKg/ 666.7m2。播種后，待苗長(zhǎng)至2-3片真葉時(shí)，開(kāi)始澆水，進(jìn)行正常田間管理；
[0012] (4)實(shí)生苗優(yōu)選與病毒抽檢:待苗高8-lOcm時(shí)，對(duì)苗圃中生長(zhǎng)勢(shì)弱、發(fā)育不正常、有 明顯病害的實(shí)生海棠苗及時(shí)去除，同時(shí)疏除生長(zhǎng)過(guò)密的苗木，保持通風(fēng)，株距保持在10-15cm;8月中下旬，對(duì)海棠苗木進(jìn)行隨機(jī)選取幼葉進(jìn)行蘋果病毒檢測(cè);抽檢完畢后，所得砧木 即可作為蘋果無(wú)病毒苗木繁育的基砧。
[0013] 進(jìn)一步地，在步驟⑵的沙藏中，種子與沙的比例在1:3-1:5之間。
[0014]進(jìn)一步地，播種前，用篩子將沙篩出，打畦，畦寬1.6-1.7m，每畦4行點(diǎn)播，播3-4粒 種，距尚10_12〇11，播種深度3.〇-4.0cm〇
[0015] 進(jìn)一步地，在步驟（3)中，播種后，選取鋪地膜或扣拱棚保溫保濕，選溫和天氣去 膜。
[0016] 進(jìn)一步地，在步驟(3)中，田間管理的過(guò)程中可噴布36%甲基硫菌靈懸浮劑500倍 液。
[0017] 進(jìn)一步地，蘋果病毒為 ASGV、ACLSV、ASPV、ASSVd。
[0018] 進(jìn)一步地，蘋果病毒檢測(cè)采用RT-PCR技術(shù)，以cDNA為模板，在Taq酶的催化下，使用 正反引物進(jìn)行雙鏈DNA的擴(kuò)增。
[0019] 本發(fā)明的有益效果：
[0020] 使用本發(fā)明的技術(shù)方法，八棱海棠種子出苗率達(dá)到47.6%，病毒脫除率達(dá)到95%， 節(jié)省育苗用海棠種子50%，大大節(jié)約了生產(chǎn)成本。
【附圖說(shuō)明】
[0021 ]圖1是本發(fā)明提供的方法流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022]為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合附圖與具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明。本發(fā)明以八 棱海棠實(shí)生種子為試驗(yàn)材料，采用0.1%KMn04處理種子后沙藏，提高了出苗率，降低了實(shí)生 種子播種量一半以上，降低了實(shí)生砧木蘋果病毒病帶毒率。該方法是選擇健康的母本樹(shù)采 集果實(shí)，取種；1月上旬，用〇 . 1 %的KMn〇4浸種30分鐘后，用清水沖洗2遍，晾干后與3-5倍體 積的沙拌勻，于室外背陰處放置。3月下旬點(diǎn)播，距離10-12cm，播種深度3.0-4.0cm，播種量 1.5-2. OKg/666.7m2。待苗高8-10cm時(shí)，對(duì)苗圃中實(shí)生苗選優(yōu)，及時(shí)去除生長(zhǎng)勢(shì)弱、發(fā)育不正 常、有明顯病害的實(shí)生海棠苗，疏除生長(zhǎng)過(guò)密的苗木，保持通風(fēng)，株距保持在l〇-15cm左右。8 月中下旬，隨機(jī)采集實(shí)生苗幼葉進(jìn)行病毒抽檢。
[0023] 實(shí)施例1:
[0024]本實(shí)施例降低八棱海棠種子病毒帶毒率提高發(fā)芽率的方法，含有以下4個(gè)步驟：
[0025] (1)種子采集:對(duì)八棱海棠種子的采摘需確保果樹(shù)的健康、無(wú)病害，待果實(shí)充分成 熟后采收。采收后，將果實(shí)已環(huán)狀方式切開(kāi)，將種子剔出，在剔出種子的過(guò)程中確保不要傷 及種皮。將取出的種子用清水清洗2遍，搓去果肉和種子表面的果膠，陰干后，放干燥通風(fēng)處 保存。
[0026] (2)高錳酸鉀處理:在1月上旬，配制1 %高錳酸鉀水溶液，將種子放入1 %高錳酸鉀 水溶液浸泡30分鐘后，取出種子，用自來(lái)水沖洗2次，晾干。將晾干后的種子進(jìn)行拌沙，采用 種子:沙=1:3-1:5的配比進(jìn)行拌制：，并放置在背陰處沙藏。
[0027] (3)播種：3月中下旬，待平均氣溫達(dá)到5_7°C時(shí)開(kāi)始播種。播種前，用篩子將沙篩 出，打畦，畦寬1.6-1.7m，澆底水，待水滲下后，每畦4行點(diǎn)播，播3-4粒種，距離10-12cm，播種 深度3.0-4.0cm，后用耙子耙平整。播種量1.5-2. OKg/666.7m2。播種后，注意保溫保濕。待苗 長(zhǎng)至2-3片真葉出現(xiàn)時(shí)，開(kāi)始澆水，進(jìn)行正常田間管理。播種后鋪地膜或扣拱棚保溫保濕，選 溫和天氣去膜，注意去除雜草，注意防治立枯病，在田間管理中可噴布36%甲基硫菌靈懸浮 劑500倍液。
[0028] (4)實(shí)生苗優(yōu)選與病毒抽檢:待苗高至8-10cm時(shí)，對(duì)苗圃中生長(zhǎng)勢(shì)弱、發(fā)育不正常、 有明顯病害的實(shí)生海棠苗及時(shí)去除，同時(shí)疏除生長(zhǎng)過(guò)密的苗木，保持通風(fēng)，一般株距在10-15cm左右。8月中下旬，對(duì)海棠苗木進(jìn)行隨機(jī)選取100株采集幼葉進(jìn)行4種蘋果病毒檢測(cè)。抽 檢完畢后，所得砧木即可作為蘋果無(wú)病毒苗木繁育的基砧。
[0029] 采用E A S Y s p i η植物R N A快速提取試劑盒的液氮研磨法提取嫩葉的R N A ;采用 Thermo反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄。
[0030] 病毒檢測(cè)所用引物見(jiàn)表1，均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。
[0031] 表1