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      一種高壓脈沖電場偶聯(lián)生物酶解制備鮑魚內(nèi)臟磷脂的方法與流程

      文檔序號:11114035閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種高壓脈沖電場偶聯(lián)生物酶解制備鮑魚內(nèi)臟磷脂的方法,其特征在于:包括以下步驟:

      1)原料預(yù)處理:將清洗干凈的鮑魚內(nèi)臟按固液重量比1:5~1:10加入蒸餾水,并用高速組織搗碎機(jī),轉(zhuǎn)速10000r/min將其打漿;

      2)PEF與酶解偶聯(lián):絞成漿后的鮑魚內(nèi)臟置于配料缸,進(jìn)行15~20 min的高壓脈沖電場處理;用0.2 M PBS緩沖溶液調(diào)pH至5.5~8.0,加入復(fù)合蛋白酶,40~55 ℃酶解1~3 h,90 ℃滅酶10~20 min;4000 rpm離心10~20 min除去不溶物,收集鮑魚內(nèi)臟提取物的上清液A;

      3)脂質(zhì)提取:用正己烷浸提2)中上清液A,萃取得到鮑魚總脂和水溶液B;總脂用3~6倍體積丙酮洗滌,得到丙酮不溶物用甲醇溶解,-20 ℃?zhèn)溆茫?/p>

      4)磷脂分離:將3)提取到的丙酮不溶物的甲醇溶液裝入制備硅膠層析柱,分別用8~12倍體積的甲醇、氯仿和丙酮沖洗,收集洗脫液,進(jìn)行旋蒸;

      5)蛋白分離:調(diào)節(jié)步驟3)收集到的水溶液B的pH至5.0~5.5,4000 rpm離心10-20 min沉淀蛋白,冷凍干燥,備用;收集上清液C;

      6)鮑魚多糖提?。簩⒉襟E5)獲得的上清液C濃縮后加入95wt%乙醇,4 ℃下沉淀10~12 h,4000 rpm離心10~20 min獲得多糖沉淀;將多糖重新溶解于蒸餾水,95wt%乙醇反復(fù)醇沉3-5次,收集沉淀物,冷凍干燥得到鮑魚多糖。

      2.一種如權(quán)利要求1所述高壓脈沖電場偶聯(lián)生物酶解制備鮑魚內(nèi)臟磷脂的方法,其特征在于:在步驟2)中的高壓脈沖電場處理?xiàng)l件為:電場強(qiáng)度20~40 KV/cm,脈沖時(shí)間350~450 μS,脈沖頻率200-400 Hz。

      3.一種如權(quán)利要求1所述高壓脈沖電場偶聯(lián)生物酶解制備鮑魚內(nèi)臟磷脂的方法,其特征在于:在步驟2)中離心除去的不溶物經(jīng)60~70℃的熱風(fēng)干燥下,用作動(dòng)物飼料。

      4.一種如權(quán)利要求1所述高壓脈沖電場偶聯(lián)生物酶解制備鮑魚內(nèi)臟磷脂的方法,其特征在于:在步驟2)中的復(fù)合蛋白酶為:AS.1398中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的一種或多種組合,總添加量為原料重量的0.1~1%。

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