本發(fā)明涉及中醫(yī)藥及生物科技領(lǐng)域，尤其是一種具有補元氣、益五臟、祛虛損、抗凝血、抗血栓、降血脂、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒及促細胞生長作用的活體海刺參活性肽的制備方法。
背景技術(shù)：
海刺參又稱仿刺參是海參的一種，屬棘皮動物門海參綱刺參科仿刺參屬。刺參體內(nèi)含高蛋白、低脂肪、富含多種氨基酸、維生素、刺參粘多糖、海參皂甙等50多種營養(yǎng)成分，是不可多得的不含膽固醇的藥食兩用滋補品。我國自古就把海參視為佐膳補益珍品，古籍載：海參性溫味甘咸，入心腎經(jīng)，具有生百脈血、補腎益精，壯陽療痿、除勞祛癥、滋陰利水、補正軟堅和通腸潤燥等多種功能?，F(xiàn)代藥理研究表明：海參體壁真皮結(jié)締體組織、體腔、內(nèi)腺管及內(nèi)臟均含有生物活性物質(zhì)，并且具有抗凝血、抗血栓、降血脂、降低血粘度、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒及促細胞生長等藥理活性。
海參腸卵是通常加工海參的廢棄物，不但污染環(huán)境也是浪費資源。因為海參腸子不但可以吃而且含有的營養(yǎng)成分非常高 ，尤其是海參皂甙， 也被一些人稱為海參毒素 ，它可以抗腫瘤、抗輻射、抗真菌、抗細胞毒性、 抗膽堿作用，能夠抑制癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移， 影響神經(jīng)傳輸?shù)龋?對再生障礙性貧血 、糖尿病、 胃潰瘍等均有良效。
據(jù)現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)分析證明海刺參腸卵不僅含有與海參體壁同樣豐富的營養(yǎng)成分，而且許多珍貴的關(guān)鍵營養(yǎng)含量更高，如多糖、釩、核酸、精氨酸等成分含量更高，其中多糖含量是海刺參體壁的3--4倍，釩的含量約是海刺參體壁的3倍；海刺參腸卵內(nèi)還含有特有成分--性腺色素(β胡蘿卜素、海膽紫酮、蝦青素(也稱蝦紅素)、玉米黃質(zhì)、角黃素以及一些未知色素)。在滋補、防治與扶助治療三方面具有極高價值。
生物活性肽是蛋白質(zhì)中20個天然氨基酸以不同組成和排列方式構(gòu)成的從二肽到復(fù)雜的線性、環(huán)形結(jié)構(gòu)的不同肽類的總稱，是源于蛋白質(zhì)的多功能化合物?；钚噪木哂卸喾N人體代謝和生理調(diào)節(jié)功能，易消化吸收，有促進免疫、激素調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒、降血壓、降血脂等作用，食用安全性極高，是當(dāng)前國際食品界最熱門的研究課題和極具發(fā)展前景的功能因子。 活性肽是一千多種肽的總稱（如大豆肽，海參肽等是活性肽中的一種）。它在人的生長發(fā)育，新陳代謝，疾病以及衰老，死亡的過程中起著關(guān)鍵作用?；钚噪氖侨梭w中最重要的活性物質(zhì)。正是因為它在體內(nèi)分泌量的增多或減少，才使人類有了幼年，童年，成年，老年直到死亡的周期。而服用活性肽便打破了生命的這一周期，從而達到延長生命，有效減緩衰老的神奇效果。肽在生物體內(nèi)作為載體和運輸工具，將人們平常所食的營養(yǎng)輸送到人體各個部位，充分發(fā)揮其功能；肽在生物體內(nèi)作為神經(jīng)遞質(zhì)，傳遞信息；肽具有極強的活性和多樣性，可全面調(diào)節(jié)人體生理功能，增強人體生理活性；肽不僅能提供人體生長發(fā)育所需的營養(yǎng)物質(zhì)，而且具有特殊的生物學(xué)功能，可防治血栓、高血脂、高血壓，延緩衰老，抗疲勞，提高機體免疫力，促進人體對蛋白質(zhì)、維生素、氨基酸、鈣、鐵、鋅、硒、鎂、銅等多種對人體有益微量元素的吸收；有些小肽具有原食品蛋白質(zhì)或其他組成氨基酸所沒有的重要的生理機能。生物活性肽中有些分子量較小的小肽，與氨基酸運輸功能相比，生物活性肽中的小肽具有吸收快速、低耗和不飽和的特點。
海參功能固然很多，但由于分子量比較大（8萬——20萬道爾頓），所以一般食用方法消化吸收連10%都不到?，F(xiàn)有深加工海刺參產(chǎn)品多為單一品種，如傳統(tǒng)的干制海參、水發(fā)即食海參、海參超微粉膠囊、海參腺體膠囊等。因此如何將具有 生百脈血、補腎益精，壯陽療痿、除勞祛癥、滋陰利水、補正軟堅和通腸潤燥等多種功能和具有抗凝血、抗血栓、降血脂、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒及促細胞生長等藥理活性的全活體海刺參做成功能和吸收更好的活性肽，更好地達到中醫(yī)藥治未病的目的，真正實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化，已成為中醫(yī)藥及生物科技領(lǐng)域亟待解決的課題。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中海參活性物質(zhì)提取過程中的原料浪費和人體吸收利用率低的不足，本發(fā)明提供了一種活體海刺參活性肽的制備方法，該活體海刺參活性肽中富含生物活性肽，具有抗凝血、抗血栓、降血脂、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒及促細胞生長等藥理活性，并且易于消化吸收，營養(yǎng)豐富機體利用率高。該活體海刺參活性肽的制備方法工藝嚴謹合理、可操作性強，易于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種活體海刺參活性肽的制備方法，其特殊之處在于：
1、選取鮮活海刺參去內(nèi)臟清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參勻漿；把取出的海刺參腸和卵去除泥沙清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參腸卵勻漿，
2、將上述制備的活體全海刺參勻漿加入活體海刺參重量的1-5%的蛋白水解酶，在溫度45-60攝氏度之間溫度條件下酶解4-8小時后，加入活體海刺參重量0.5%-1%的酵母粉攪拌均勻，溫度控制在攝氏30-50之間進行脫腥處理，1-2小時后將溫度調(diào)至攝氏85度以上水浴5-15分鐘進行滅酶，制得活體全海刺參酶解液；
3、將上述制備的活體海刺參酶解液用高速離心機進行液渣分離，離心速度調(diào)至9500-14000轉(zhuǎn)之間，制得活體海刺參離心酶解液；
4、將上述制備的活體海刺參離心酶解液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜在攝氏100-120度之間蒸汽高壓滅菌15-40分鐘；
5、將上述制備的活體海刺參酶解液經(jīng)過超濾膜過濾器濾得分子量5000道爾頓以下的活體海刺參活性肽液；
6、將上述制備的活體海刺參活性肽液按凍干工藝規(guī)范灌裝至西林瓶上凍干機真空冷凍干燥，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽瓶裝凍干粉成品；將上述制備的活體海刺參活性肽液加純凈水按口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝至口服液瓶，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽口服液成品；將上述制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范罐裝成膠囊，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽膠囊成品。
本發(fā)明所述的蛋白水解酶為中性蛋白酶、胰蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種或兩種以上的組合。
本發(fā)明選用活體全海刺參為原料，通過控制酶解生成活性肽溶液，經(jīng)滅酶、脫腥、離心、滅菌、超濾后灌裝成口服液劑型、噴霧干燥或冷凍干燥罐裝成膠囊劑型和瓶裝凍干粉劑型，其營養(yǎng)價值和吸收利用率以及食用安全性大大提高，并具有抗凝血、抗血栓、降血脂、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒及促細胞生長等藥理活性，該活體海刺參活性肽的制備方法工藝嚴謹合理、可操作性強，易于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步說明
實施例一、1、活體全海刺參活性肽液的制備：選取鮮活海刺參150kg去內(nèi)臟清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參勻漿；把取出的海刺參腸和卵去除泥沙清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參腸卵勻漿，
2、將步驟1制備的活體全海刺參勻漿調(diào)PH7，加入胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶進行多酶酶解，酶組成比為1：1：1，酶用量為每克活體海刺參添加6000個酶活單位(u)，溫度控制在攝氏55度酶解6小時后加入活體海刺參重量0.8%的酵母粉攪拌均勻，溫度控制在攝氏35度進行脫腥處理，1.5小時后沸水熱浴滅酶15分鐘，即得活體海刺參活性肽液；
3、將步驟2處理好的活體海刺參活性肽液用高速離心機進行液渣分離，離心速度調(diào)至12000rpm左右，制得活體海刺參活性肽液；
4、將步驟3制備的活體海刺參活性肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜在攝氏105度蒸汽高壓滅菌35分鐘；
5、將步驟4制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)過超濾膜過濾器濾得分子量5000道爾頓以下的活體海刺參活性肽液；
6、將步驟5制備的活體海刺參活性肽液按凍干工藝規(guī)范灌裝至西林瓶上凍干機真空冷凍干燥，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽瓶裝凍干粉成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液加純凈水按口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝至口服液瓶，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽口服液成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范罐裝成膠囊，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽膠囊成品。
實施例二 、1、活體全海刺參活性肽液的制備：選取鮮活海刺參180kg去內(nèi)臟清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參勻漿；把取出的海刺參腸和卵去除泥沙清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參腸卵勻漿，
2、將步驟1制備的活體全海刺參勻漿調(diào)PH6.5，加入中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶進行多酶酶解，酶組成比為1：1：1，酶用量為每克活體海刺參添加10000個酶活單位(u)，溫度控制在攝氏55度酶解6小時后加入活體海刺參重量0.9%的酵母粉攪拌均勻，溫度控制在攝氏38度進行脫腥處理，2小時后沸水熱浴滅酶15分鐘，即得活體海刺參活性肽液；
3、將步驟2處理好的活體海刺參活性肽液用高速離心機進行液渣分離，離心速度調(diào)至13000rpm左右，制得活體海刺參活性肽液；
4、將步驟3制備的活體海刺參活性肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜在攝氏110度蒸汽高壓滅菌35分鐘；
5、將步驟4制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)過超濾膜過濾器濾得分子量5000道爾頓以下的活體海刺參活性肽液；
6、將步驟5制備的活體海刺參活性肽液按凍干工藝規(guī)范灌裝至西林瓶上凍干機真空冷凍干燥，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽瓶裝凍干粉成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液加純凈水按口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝至口服液瓶，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽口服液成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范罐裝成膠囊，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽膠囊成品。
實施例三、1、活體全海刺參活性肽液的制備：選取鮮活海刺參160kg去內(nèi)臟清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參勻漿；把取出的海刺參腸和卵去除泥沙清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參腸卵勻漿，
2、將步驟1制備的活體全海刺參勻漿調(diào)PH6.5，加入復(fù)合蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶進行多酶酶解，酶組成比為1：1：1，酶用量為每克活體海刺參添加9000個酶活單位(u)，溫度控制在攝氏55度酶解6小時后加入活體海刺參重量1%的酵母粉攪拌均勻，溫度控制在攝氏35度進行脫腥處理，2小時后沸水熱浴滅酶15分鐘，即得活體海刺參活性肽液；
3、將步驟2處理好的活體海刺參活性肽液用高速離心機進行液渣分離，離心速度調(diào)至12000rpm左右，制得活體海刺參活性肽液；
4、將步驟3制備的活體海刺參活性肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜在攝氏120度蒸汽高壓滅菌30分鐘；
5、將步驟4制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)過超濾膜過濾器濾得分子量5000道爾頓以下的活體海刺參活性肽液；
6、將步驟5制備的活體海刺參活性肽液按凍干工藝規(guī)范灌裝至西林瓶上凍干機真空冷凍干燥，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽瓶裝凍干粉成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液加純凈水按口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝至口服液瓶，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽口服液成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范罐裝成膠囊，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽膠囊成品。
實施例四、1、活體全海刺參活性肽液的制備：選取鮮活海刺參120kg去內(nèi)臟清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參勻漿；把取出的海刺參腸和卵去除泥沙清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參腸卵勻漿，
2、將步驟1制備的活體全海刺參勻漿調(diào)PH6.5，加入中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶進行多酶酶解，酶組成比為1：1：1，酶用量為每克活體海刺參添加8000個酶活單位(u)，溫度控制在攝氏56度酶解6小時后加入活體海刺參重量1%的酵母粉攪拌均勻，溫度控制在攝氏36度進行脫腥處理，1小時后沸水熱浴滅酶15分鐘，即得活體海刺參活性肽液；
3、將步驟2處理好的活體海刺參活性肽液用高速離心機進行液渣分離，離心速度調(diào)至13000rpm左右，制得活體海刺參活性肽液；
4、將步驟3制備的活體海刺參活性肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜在攝氏115度蒸汽高壓滅菌30分鐘；
5、將步驟4制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)過超濾膜過濾器濾得分子量5000道爾頓以下的活體海刺參活性肽液；
6、將步驟5制備的活體海刺參活性肽液按凍干工藝規(guī)范灌裝至西林瓶上凍干機真空冷凍干燥，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽瓶裝凍干粉成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液加純凈水按口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝至口服液瓶，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽口服液成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范罐裝成膠囊，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽膠囊成品。
實施例五、1、活體全海刺參活性肽液的制備：選取鮮活海刺參100kg去內(nèi)臟清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參勻漿；把取出的海刺參腸和卵去除泥沙清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參腸卵勻漿，
2、將步驟1制備的活體全海刺參勻漿調(diào)PH6.5，加入復(fù)合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶進行多酶酶解，酶組成比為1：1：1，酶用量為每克活體海刺參添加8000個酶活單位(u)，溫度控制在攝氏55度酶解6小時后加入活體海刺參重量1%的酵母粉攪拌均勻，溫度控制在攝氏35度進行脫腥處理，1小時后沸水熱浴滅酶15分鐘，即得活體海刺參活性肽液；
3、將步驟2處理好的活體海刺參活性肽液用高速離心機進行液渣分離，離心速度調(diào)至12000rpm左右，制得活體海刺參活性肽液；
4、將步驟3制備的活體海刺參活性肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜在攝氏105度蒸汽高壓滅菌40分鐘；
5、將步驟4制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)過超濾膜過濾器濾得分子量5000道爾頓以下的活體海刺參活性肽液；
6、將步驟5制備的活體海刺參活性肽液按凍干工藝規(guī)范灌裝至西林瓶上凍干機真空冷凍干燥，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽瓶裝凍干粉成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液加純凈水按口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝至口服液瓶，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽口服液成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范罐裝成膠囊，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽膠囊成品。
實施例六、1、活體全海刺參活性肽液的制備：選取鮮活海刺參200kg去內(nèi)臟清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參勻漿；把取出的海刺參腸和卵去除泥沙清洗干凈用組織破碎機破碎制得活體海刺參腸卵勻漿，
2、將步驟1制備的活體全海刺參勻漿調(diào)PH6.5，加入風(fēng)味蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶進行多酶酶解，酶組成比為1：1：1，酶用量為每克活體海刺參添加10000個酶活單位(u)，溫度控制在攝氏55度酶解7小時后加入活體海刺參重量1%的酵母粉攪拌均勻，溫度控制在攝氏37度進行脫腥處理，1.5小時后沸水熱浴滅酶10分鐘，即得活體海刺參活性肽液；
3、將步驟2處理好的活體海刺參活性肽液用高速離心機進行液渣分離，離心速度調(diào)至13500rpm左右，制得活體海刺參活性肽液；
4、將步驟3制備的活體海刺參活性肽液放不銹鋼桶進蒸汽滅菌柜在攝氏120度蒸汽高壓滅菌30分鐘；
5、將步驟4制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)過超濾膜過濾器濾得分子量5000道爾頓以下的活體海刺參活性肽液；
6、將步驟5制備的活體海刺參活性肽液按凍干工藝規(guī)范灌裝至西林瓶上凍干機真空冷凍干燥，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽瓶裝凍干粉成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液加純凈水按口服液生產(chǎn)工藝規(guī)范灌裝至口服液瓶，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽口服液成品；將步驟5制備的活體海刺參活性肽液經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥制備成粉末狀顆粒，按膠囊生產(chǎn)工藝規(guī)范罐裝成膠囊，即得本發(fā)明活體海刺參活性肽膠囊成品。