[0041] 3、混合液中加入2ml的氯仿/甲醇（2 :1)溶液震蕩2min，然后再加入2ml的氯仿 溶液震蕩lmin;
[0042] 4、混合液放入離心機以5000r/min離心5min，待樣品混合液離心分層后，吸取下 層氯仿層溶液轉(zhuǎn)移至玻璃管內(nèi)，氮吹后即得到海參腸油脂，提取率達4. 1 %，EPA相對含量 為 26. 02%。
[0043] 實施例4
[0044] 1、取新鮮海參腸，去除腸子中泥沙，用去離子水沖洗干凈，勻漿得到海參腸勻漿 液；
[0045] 2、海參腸勻漿液1ml，加入pH6磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液的McIIvaines緩沖 液 3ml;
[0046] 3、混合液中加入2ml的氯仿/甲醇（2 :1)溶液震蕩lmin，然后再加入1ml的氯仿 溶液震蕩2min;
[0047] 4、混合液放入離心機以3000r/min離心lOmin，待樣品混合液離心分層后，吸取下 層氯仿層溶液轉(zhuǎn)移至玻璃管內(nèi)，氮吹后即得到海參腸油脂，提取率達3.3%，EPA相對含量 為 28. 86%。
[0048] 實施例5
[0049] 1、取新鮮海參腸，去除腸子中泥沙，用去離子水沖洗干凈，勻漿得到海參腸勻漿 液；
[0050] 2、海參腸勻漿液1ml，加入pH7磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液的McIIvaines緩沖 液lml;
[0051] 3、混合液中加入2ml的氯仿/甲醇（2 :1)溶液震蕩2min，然后再加入3ml的氯仿 溶液震蕩lmin;
[0052] 4、混合液放入離心機以4000r/min離心lOmin，待樣品混合液離心分層后，吸取下 層氯仿層溶液轉(zhuǎn)移至玻璃管內(nèi)，氮吹后即得到海參腸油脂，提取率達2.6%，EPA相對含量 為 30. 24%。
[0053] 實施例6
[0054] 1、取新鮮海參腸，去除腸子中泥沙，用去離子水沖洗干凈，勻漿得到海參腸勻漿 液；
[0055] 2、海參腸勻漿液1ml，加入pH8磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液的McIIvaines緩沖 液lml;
[0056] 3、混合液中加入lml的氯仿/甲醇（2:1)溶液震蕩2min，然后再加入3ml的氯仿 溶液震蕩2min;
[0057] 4、混合液放入離心機以3000r/min離心5min，待樣品混合液離心分層后，吸取下 層氯仿層溶液轉(zhuǎn)移至玻璃管內(nèi)，氮吹后即得到海參腸油脂，提取率達2.9%，EPA相對含量 為29.71%。
[0058] 表1為pH對海參腸脂質(zhì)中EPA的影響，當(dāng)McIIvaines緩沖液的pH為3時，海參 腸脂質(zhì)的EPA相對含量最高，達到31. 13%，隨著pH的升高，脂質(zhì)中EPA相對含量呈現(xiàn)先降 低后升高的趨勢。在McIIvaines緩沖液的pH為5時，海參腸脂質(zhì)中EPA相對含量最低為 26. 02% ;當(dāng)McIIvaines緩沖液的pH上升為6、7和8時，海參腸脂質(zhì)中EPA相對含量逐漸 回升。
[0059] 表 1
[0060]
[0061] 不同pH條件下提取海參腸脂質(zhì)的狀態(tài)不同，當(dāng)緩沖溶液pH為3時，脂質(zhì)層的顏色 最深，乳化層最薄。在PH4~8范圍內(nèi)，隨著pH的逐漸提高，脂質(zhì)層顏色逐漸變淺，而乳化 層逐漸增多。
[0062] 由圖1可以看出pH對海參腸脂質(zhì)提取的影響，當(dāng)McIIvaines緩沖液的pH為3 時，海參腸脂質(zhì)的提取率最尚，達到5. 40 ±0. 15%，隨著pH的升尚至中性，脂質(zhì)提取率逐漸 下降。在McIIvaines緩沖液的pH為4和5時，海參腸提取率未見顯著差異（p>0. 05);當(dāng) McIIvaines緩沖液的pH上升為6和7時，海參腸提取率顯著下降，達到最低。當(dāng)McIIvaines 緩沖液的pH為8時，較pH7提取率略有回升。
[0063] 以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此， 任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其 發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種富含EPA海參腸脂質(zhì)的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： 51、 海參腸預(yù)處理，勻漿，得到海參腸勻漿液； 52、 向步驟Sl所述海參腸勻漿液中McIIvaines緩沖液，混合均勻，得到海參腸混合液； 所述McIIvaines緩沖液pH為3~8 ; 53、 向步驟S2所述海參腸混合液中氯仿/甲醇溶液震蕩提取1~2min，得到海參腸提 取液；所述氯仿/甲醇溶液中氯仿與甲醇的體積比為2:1 ; 54、 將步驟S3所述海參腸提取液離心，收集下層氯仿層溶液；所述氯仿層溶液經(jīng)氮吹 后即為海參腸脂質(zhì)； 所述海參腸勻漿液、McIIvaines緩沖液與氯仿/甲醇溶液的體積比為1:1~3:1~3。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述富含EPA海參腸脂質(zhì)的制備方法，其特征在于，步驟S2所述 McIIvaines緩沖液為磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述富含EPA海參腸脂質(zhì)的制備方法，其特征在于，步驟S2所述 McIIvaines緩沖液pH值為3。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述富含EPA海參腸脂質(zhì)的制備方法，其特征在于，步驟S2所述 McIIvaines緩沖液加入的體積為步驟Sl所述海參腸勻漿液的3倍。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述富含EPA海參腸脂質(zhì)的制備方法，其特征在于，步驟S3所述在 加入氯仿/甲醇溶液震蕩提取后，再加入氯仿震蕩提取1~2min ;所述海參腸勻漿液與氯 仿/甲醇溶液、氯仿的體積比為1:1~3:1~3。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述富含EPA海參腸脂質(zhì)的制備方法，其特征在于，步驟S3為先加 入氯仿/甲醇溶液的震蕩lmin，再加入氯仿震蕩Imin ;所述海參腸勻漿液與氯仿/甲醇溶 液、氯仿的體積比為1:3:1。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述富含EPA海參腸脂質(zhì)的制備方法，其特征在于，步驟S4所述離 心分離的條件為2000~5000r/min離心5~lOmin。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種富含EPA海參腸脂質(zhì)的制備方法，包括步驟：海參腸預(yù)處理，勻漿，得到海參腸勻漿液，勻漿液中加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液的McIIvaines緩沖液，然后加入氯仿/甲醇溶液震蕩提取，混合液放入離心機分離脂質(zhì)層，氮吹后即得到海參腸油脂。本發(fā)明具有工藝簡單，操作簡單，效率高的特點，提取方法條件溫和，能最大限度保存海參腸脂質(zhì)中原有的生理活性物質(zhì)，使產(chǎn)品兼有營養(yǎng)性和功能性。
【IPC分類】A23L1/29, A23L1/325
【公開號】CN105105118
【申請?zhí)枴緾N201510551605
【發(fā)明人】吳海濤, 宋玉昆, 宋亮, 譚明乾, 徐晟 , 韓佳潤, 李傲婷, 閻佳楠, 石曉琳
【申請人】大連工業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年9月1日