內(nèi)咖啡因的比例，結(jié)果仍表 明原花青素可能必須增加血漿BDNF水平，也許比咖啡因本身有更大的程度的能力。
[0053] BDNF依賴的端粒酶活性已經(jīng)顯示出促進(jìn)神經(jīng)元的存活在顯影海馬神經(jīng)元。腦損 傷后增加BDNF表達(dá)和端粒酶活性表明，端粒酶可能在BDNF主導(dǎo)神經(jīng)保護(hù)作用。此外，BDNF 已顯示上調(diào)在脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的端粒酶的表達(dá)和活性。這些神經(jīng)元，用BDNF處理，對(duì)興奮 毒性損害更耐受，大概是由于增加細(xì)胞的抗凋亡。發(fā)明者因此還設(shè)想N580還可發(fā)揮通過(guò)端 粒酶的抗凋亡作用來(lái)增加的BDNF活性。
[0054] 所有材料進(jìn)行測(cè)試，N580被確定為增加BDNF的血漿水平的有效實(shí)體，在短周期時(shí) 間（處理后一到兩個(gè)小時(shí)）。然而，長(zhǎng)期影響也考慮，以及在整個(gè)長(zhǎng)時(shí)間的多劑量，以使急性 延伸到更長(zhǎng)期的效果。圖3描繪了測(cè)試結(jié)果，其中"NeuroFactor"是N580。由于是顯而易 見(jiàn)的，N580對(duì)BDNF水平在所有測(cè)試的控制物質(zhì)深刻和統(tǒng)計(jì)顯著的效果。
[0055] 圖4描述了比較N580和煮咖啡的BDNF激活的進(jìn)一步結(jié)果。如圖可以看到，煮咖 啡曾在測(cè)試系統(tǒng)上的BDNF沒(méi)有顯著效果。血漿BDNF水平在基線（T0)，治療后60 (T60)， 120 (T120)分鐘被測(cè)定。受試者被施用安慰劑（第1天），100mgWCFC(2天）和300毫升的 稀釋咖啡（第3天）。相比基線數(shù)據(jù)表示為平均百分比差異。*與安慰劑（p值= 0.007)和 咖啡（P值=〇. 02)，在T60的相比平均數(shù)WCFC治療的值為顯著不同。當(dāng)相比于安慰劑（p 值=0. 11)結(jié)果沒(méi)有在T120顯著，然而，他們相比，咖啡（p值=0. 04)是顯著的。
[0056] BDNF起源的研究
[0057] 在進(jìn)一步的一系列實(shí)驗(yàn)中，與一種或多種特定血液部分增加BDNF的關(guān)系進(jìn)行了 調(diào)查。為了評(píng)估是否BDNF與血液中的外來(lái)體部分相聯(lián)結(jié)，外來(lái)體使用市售外來(lái)體分離試劑 盒從SBI公司根據(jù)由生產(chǎn)商提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行分離血清。將如此收集的外來(lái)體在磷酸鹽緩 沖液中懸浮，進(jìn)行BDNFELISA(R&D系統(tǒng)），并作為100mgN580給藥前測(cè)量，以先證者和給藥 后（60分鐘）的原始數(shù)據(jù)的測(cè)試結(jié)果顯示在圖5A。這里，顯而易見(jiàn)的是BDNF在血清中的增 加是急性和顯著。當(dāng)增加其標(biāo)準(zhǔn)化為本地化，BDNF的外來(lái)體的增加更加明顯如圖5B。
[0058] 值得注意的是，雖然所考慮的化合物的施用導(dǎo)致血清BDNF的整體增加，外來(lái)體相 關(guān)聯(lián)的BDNF的增加甚至更加顯著。因此，應(yīng)該理解的是，考慮的組合物和方法能在血液中 增加外來(lái)體的血清BDF的至少2倍，更典型地至少3倍，并且最典型地為至少4倍以上的增 加。這樣的急劇增加是完全出乎意料，并認(rèn)為顯著幫助解決BDNF的遞送通過(guò)穿越血腦屏障 外體輸送的BDNF的腦（和其它神經(jīng)組織）。因此，應(yīng)該指出的是考慮的組合物和方法適于 靶向腦和其他神經(jīng)組織的BDNF水平的增加，盡管這樣的組織被通過(guò)血腦屏障保護(hù)。
[0059] 但是應(yīng)當(dāng)理解的是，考慮的組合物和方法顯著促進(jìn)內(nèi)源性血液BDNF水平，而這一 增加的主要部分（即至少50%，更典型地至少70%，最通常至少85% )與外來(lái)體部分相關(guān) 聯(lián)。其結(jié)果是，由于外來(lái)體是已知的通過(guò)血腦屏障，但是應(yīng)該理解的是，考慮的組合物和方 法將是有用的，以增加內(nèi)源性BDNF在腦循環(huán)，它具有以最好的發(fā)明人的知識(shí)沒(méi)有報(bào)道或在 本領(lǐng)域中建議的。
[0060] 化合物分析
[0061] 綠原酸類，原花青素，黃酮醇和市售N580整個(gè)咖啡果實(shí)提取物的黃酮醇，N625綠 咖啡豆提取物，和N31葡萄籽提取物進(jìn)行了表征通過(guò)LC-MS(n)和通過(guò)UV吸收進(jìn)行定量。 總多酚含量用分光光度法根據(jù)福林-喬卡梯奧法測(cè)定，并進(jìn)行了標(biāo)定針對(duì)沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn) (Sigma-Aldrich公司，圣路易斯，密蘇里州）。結(jié)果表示為克沒(méi)食子酸當(dāng)量。
[0062] 咖啡因和萌蘆巴內(nèi)容物通過(guò)HPLC的Agilent 1100 (Agilent技術(shù)，帕洛阿爾托， CA)，配備有二極管陣列檢測(cè)器和通過(guò)UV吸光度定量?？Х裙崛∥铮Х榷固崛∥锛捌咸?籽提取物的抗氧化能力的特點(diǎn)，以清除過(guò)氧自由基（0RAC)，羥基自由基（H0RAC)，過(guò)氧化亞 硝酸鹽（N0RAC)，超氧陰離子（S0RAC)和單線態(tài)氧的能力（S0AC)。每個(gè)測(cè)試提取物的化學(xué) 組成和多酚剖面顯示在下面的表1 :
[0063]
[0064] 表 1
[0065] 其中，WCFC為整個(gè)咖啡果濃縮物粉末；N677為生咖啡豆的咖啡因粉末；N625為生 咖啡豆提取物粉末；N31為葡萄籽提取物粉末；ND為未檢測(cè)；0RAC為氧自由基吸收能力；TE 為水溶性維生素E當(dāng)量；H0RAC為羥基氧自由基吸收能力；S0RAC為超氧陰離子自由基吸收 能力；N0RAC為過(guò)氧亞硝基自由基吸收能力；S0RC為單自由基吸收能力。
[0066] 因此，具體實(shí)施方案和BDNF表達(dá)活化的方法的應(yīng)用已被公開(kāi)。應(yīng)當(dāng)顯而易見(jiàn)，然 而，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員，除了那些已經(jīng)描述的有更多的修改是可能的，而不脫離本文的發(fā)明 概念的出發(fā)。本發(fā)明的主題，因此，不被限制，除非在所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種增加哺乳動(dòng)物血液中內(nèi)源性BDNF的方法，包括： 向哺乳動(dòng)物施用一種能夠增加血液中BDNF水平的組合物；其中，所述組合物包括一種 咖啡果制劑或一種水果或蔬菜的原花青素富集制劑；且其中，所述組合物被配制和施用特 定的劑量，以增加血液中BDNF水平的至少25%。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，BDNF水平的增加是外來(lái)體BDNF的增加。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，所述咖啡果制劑是一整個(gè)咖啡果提取物或 一整個(gè)咖啡果粉。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，所述組合物以每一劑量5mg-500mg之間的量 被施用。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述水果或蔬菜的原花青素富集制劑包括 濃度至少為5 y g/g的原花青素。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述組合物以增加血液中BDNF水平至少 100 %的劑量被施用。7. -種增加哺乳動(dòng)物腦循環(huán)中的BDNF的方法，包括： 向哺乳動(dòng)物施用一種包括一種咖啡果制劑或一種水果或蔬菜的原花青素富集制劑的 組合物；其中，所述組合物的給藥量足以增加外來(lái)體BDNF，其中增加的外來(lái)體BDNF對(duì)于增 加哺乳動(dòng)物腦循環(huán)中的BDNF是有效的。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其特征在于，施用步驟包括口服施用。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其特征在于，所述咖啡果制劑是一整個(gè)咖啡果提取物或 一整個(gè)咖啡果粉。10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其特征在于，所述水果或蔬菜的原花青素富集制劑包括 濃度至少為5 y g/g的原花青素。11. 一種增加哺乳動(dòng)物血液中外來(lái)體BDNF的方法，包括： 向哺乳動(dòng)物施用包括一種包括咖啡果或其部分制劑的組合物，其中，所述組合物的給 藥量足以增加哺乳動(dòng)物血液中的外來(lái)體BDNF。12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述方法，其特征在于，咖啡果制劑是一整個(gè)咖啡果提取物或一 整個(gè)咖啡果粉。13. 根據(jù)權(quán)利要求11所述方法，其特征在于，咖啡果制劑以50-150mg之間的量被施用。14. 一種增加有BDNF相關(guān)疾病的哺乳動(dòng)物體內(nèi)的BDNF的方法，包括： 施用一種組合物，相比于未經(jīng)施用所述組合物的哺乳動(dòng)物，所述組合物能夠增加哺乳 動(dòng)物血液中外來(lái)體BDNF的至少50%的量。15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述方法，其特征在于，所述BDNF相關(guān)疾病選自肥胖、糖尿病、抑 郁癥、心血管疾病、認(rèn)知障礙、阿爾茨海默氏癥、纖維肌痛、帕金森氏病和癡呆。16. 根據(jù)權(quán)利要求14所述方法，其特征在于，所述組合物包括咖啡果制劑、一整個(gè)咖啡 果提取物、或一整個(gè)咖啡果粉。17. 根據(jù)權(quán)利要求14所述方法，其特征在于，所述組合物包括一種水果或蔬菜的原花 青素富集制劑，其包括濃度至少為5 y g/g的原花青素。18. -種整個(gè)咖啡果制劑在通過(guò)口服施用以增加哺乳動(dòng)物血液中外來(lái)體BDNF的組合 物中的應(yīng)用。19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述應(yīng)用，其特征在于，所述整個(gè)咖啡果制劑是一整個(gè)咖啡果提 取物或整個(gè)咖啡果粉，其中，所述咖啡果制劑是存在于以50-150mg之間的量用于口服給藥 的所述組合物。20. 根據(jù)權(quán)利要求18所述應(yīng)用，其特征在于，外來(lái)體BDNF的增加是至少高于基準(zhǔn)線 200 %的急性增加。
【專利摘要】介紹了組合物和方法，能夠充分地增加血液中BDNF水平，甚至更顯著地是外來(lái)體BDNF水平。合適的組合物包括整個(gè)咖啡果提取物和粉末或者原花青素富集制劑，通過(guò)口服施用相對(duì)低的劑量。天然刺激因子水平的增大在腦循環(huán)發(fā)生。
【IPC分類】A23F5/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105120678
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480016221
【發(fā)明人】馬丁·佩特茲夫斯基
【申請(qǐng)人】Vdf未來(lái)制劑股份有限公司
【公開(kāi)日】2015年12月2日
【申請(qǐng)日】2014年3月14日
【公告號(hào)】WO2014144972A1, WO2014144972A4