節(jié)到 45°C，攬拌50min，然后將溫度調(diào)至50°C，按照復(fù)合蛋白酶（風(fēng)味蛋白酶：堿性蛋白酶= 1:1)與乳清濃縮蛋白質(zhì)量比為1 :1〇〇加入復(fù)合蛋白酶0.05克，酶解1.0小時，在5000g條 件下離屯、5min，收集上清液。
[0045] 2、將實施例1和上述步驟1所得的上清液W4:1的比例混合，在35°C條件下攬拌 5min，混合液通過超濾方法進行處理，利用孔徑為5000道爾頓的陶瓷膜超濾，取分子量小 于5000道爾頓的蛋白膚液。
[0046] 3、取分子小于5000道爾頓的蛋白液，通過濃縮、冷凍干燥，得到具有降血糖功能 的魚肉蛋白復(fù)合活性膚粉13. 8克。
[0047] 實施例8具有降血糖功能的魚肉蛋白復(fù)合活性膚粉
[0048] 1、選用乳清濃縮蛋白（WPC-8000) 50克，加入10倍重量的去離子水，溫度調(diào)節(jié)到 40°C，攬拌50min，然后將溫度調(diào)至45°C，按照復(fù)合蛋白酶（風(fēng)味蛋白酶：堿性蛋白酶= 1:1)與乳清濃縮蛋白質(zhì)量比為1 :200加入復(fù)合蛋白酶0.25克，酶解2.0小時，在6000g條 件下離屯、3min，收集上清液。
[0049] 2、將實施例2和上述步驟1所得的上清液W3:1的比例混合，在30°C條件下攬拌 5min，混合液通過超濾方法進行處理，利用孔徑為5000道爾頓的陶瓷膜超濾，取分子量小 于5000道爾頓的蛋白膚液。
[0050] 3、取分子小于5000道爾頓的蛋白液，通過濃縮、冷凍干燥，得到具有降血糖功能 的魚肉蛋白復(fù)合活性膚粉139克。
[0051] 實施例9具有降血糖功能的魚肉蛋白復(fù)合活性膚粉
[0052] 1、選用乳清濃縮蛋白（WPC-8000) 25克，加入10倍重量的去離子水，溫度調(diào)節(jié)到 40°C，攬拌50min，然后將溫度調(diào)至45°C，按照復(fù)合蛋白酶（風(fēng)味蛋白酶：堿性蛋白酶= 1:1)與乳清濃縮蛋白質(zhì)量比為1 :125加入復(fù)合蛋白酶0.2克，酶解1.5小時，在6000g條 件下離屯、3min，收集上清液。
[0053] 2、將實施例3和上述步驟1所得的上清液W4:1的比例混合，在30°C條件下攬拌 5min，混合液通過超濾方法進行處理，利用孔徑為5000道爾頓的陶瓷膜超濾，取分子量小 于5000道爾頓的蛋白膚液。
[0054] 3、取分子小于5000道爾頓的蛋白液，通過濃縮、冷凍干燥，得到具有降血糖功能 的魚肉蛋白復(fù)合活性膚粉69. 8克。
[0055] 對比例1魚肉蛋白膚
[0056] 1、選用轄魚肉100克，用打漿機將魚肉打成漿；然后在打好的魚肉漿中加入1. 5倍 魚肉重量的水，溫度調(diào)節(jié)到95°C，攬拌10分鐘。
[0057] 2、將步驟1魚肉漿的溫度調(diào)節(jié)到45。然后按照堿性蛋白酶與魚肉質(zhì)量比為1 : 200加入堿性蛋白酶0. 5克，酶解1. 0小時，然后將溫度調(diào)節(jié)至50°C，按照風(fēng)味蛋白酶與魚 肉質(zhì)量比為1 :300加入風(fēng)味蛋白酶0. 33克，酶解1. 0小時，在4000g條件下離屯、5min，收 集上清液。
[0058] 對比例2魚肉蛋白多膚粉
[0059] 將對比例I得到的魚肉蛋白膚分別利用孔徑為5000道爾頓的陶瓷膜超濾，取分子 量小于5000道爾頓的蛋白膚液，濃縮、冷凍干燥，即得。
[0060] 濃縮和干燥條件同實施例4。
[0061] 對比例3魚肉蛋白復(fù)合活性膚粉
[0062] 1、選用乳清濃縮蛋白（WPC-8000)5克，加入10倍重量的去離子水，溫度調(diào)節(jié)到 45°C，攬拌50min，然后將溫度調(diào)至50°C，按照復(fù)合蛋白酶（風(fēng)味蛋白酶：堿性蛋白酶= 1:1)與乳清濃縮蛋白質(zhì)量比為1 :1〇〇加入復(fù)合蛋白酶0.05克，酶解1.0小時，在5000g條 件下離屯、5min，收集上清液；
[0063] 2、將對比例1和上述步驟1所得的上清液W4:1的比例混合，在35°C條件下攬拌 5min，混合液通過超濾方法進行處理，利用孔徑為5000道爾頓的陶瓷膜超濾，取分子量小 于5000道爾頓的蛋白膚液；
[0064] 3、取分子小于5000道爾頓的蛋白液，通過濃縮、冷凍干燥，得到具有降血糖功能 的魚肉蛋白復(fù)合活性膚粉12. 4克。
[0065] 實驗例降血糖膚的功能測定試驗
[0066] 體外DPP-4抑制活性膚的活性測定方法：
[0067] 將樣品用lOOmmol/L的Tris-HCUp冊.0)緩沖液稀釋至合適的濃度，吸取25yL 樣品稀釋液與25yL底物（濃度為1. 6mmol/L)混合，加入到96孔酶標(biāo)板中。在37°C下解 育IOmin后，加入50yLDPP-4酶液（酶活力為8U/L)，混勻后在37°C下解育60min，立即加 入100JiLImol/L的醋酸-醋酸鋼（pH4. 0)緩沖液終止反應(yīng)，于405皿下測吸光值A(chǔ)，并根 據(jù)下列公式計算水解產(chǎn)物的DPP-4抑制率。每組實驗重復(fù)3次。
[0068] DPP-4 抑制率（％) =
[0069] (1- (A樣品-A樣品空白對照）/ (A陰性對照-A陰性空白對照）}X100
[0070] 其中：A樣品：為樣品反應(yīng)液在405nm處的吸光值A(chǔ);
[0071] A樣品空白對照：W化iS-HCL緩沖液代替DPP-4酶液作為樣品空白對照，在405皿 處的吸光值A(chǔ);
[007引 A陰性對照擬化is-肥L緩沖液代替樣品作為陰性對照，在405皿處的吸光值A(chǔ);
[007引 A陰性空白對照：WTris-HCL緩沖液代替DPP-4酶液和樣品作為陰性空白對照， 在405nm處的吸光值A(chǔ)。
[0074] 測定樣品：實施例4~6所述的魚肉蛋白多膚粉，實施例7~9所述的魚肉蛋白復(fù) 合活性膚粉，對比例2所述的魚肉蛋白多膚粉，對比例3所述的魚肉蛋白復(fù)合活性膚粉。 [007引表1魚肉蛋白多膚復(fù)合粉的DPP-4抑制率（％ )

[007引從表I可知，魚肉蛋白經(jīng)渡蘿蛋白酶酶解后制備的魚肉蛋白膚粉，其降血糖功能 明顯優(yōu)于魚肉蛋白經(jīng)堿性蛋白酶酶解后制備的魚肉蛋白膚粉，魚肉蛋白膚和乳清蛋白膚復(fù) 合的蛋白多膚粉其降血糖功能明顯優(yōu)于單一魚肉蛋白膚粉。
[0079] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在 本發(fā)明基礎(chǔ)上，可W對之作一些修改或改進，運對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因 此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的運些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有降血糖功能的魚肉蛋白肽，其特征在于，其是由魚肉蛋白先后經(jīng)菠蘿蛋白 酶和風(fēng)味蛋白酶酶解得到。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的魚肉蛋白肽，其特征在于，其制備方法包括如下步驟： (1) 將魚肉打漿，加水?dāng)嚢瑁? (2) 調(diào)節(jié)溫度到75~85°C，按照菠蘿蛋白酶與魚肉質(zhì)量比為1 :200~1:500的比例加 入菠蘿蛋白酶，酶解〇. 25~2. 0小時，然后將溫度冷卻至45~55°C，按照風(fēng)味蛋白酶與魚 肉質(zhì)量比為1 :300~1:500的比例加入風(fēng)味蛋白酶，酶解0. 25~1. 5小時，離心取上清。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的魚肉蛋白肽，其特征在于，所述步驟（1)為將魚肉打漿，加入 相對于魚肉重量1~2倍的水，在90~95°C下，攪拌10~15分鐘。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的魚肉蛋白肽，其特征在于，步驟（2)中，所述離心條件為 4000~6000g，離心5~10分鐘。5. 根據(jù)權(quán)利要求1~4任一項所述的魚肉蛋白肽，其特征在于，所述魚肉取自鱈魚和/ 或鰱魚。6. -種具有降血糖功能的魚肉蛋白多肽粉，其特征在于，其是由權(quán)利要求1~5任一項 所述的魚肉蛋白肽先后經(jīng)超濾、濃縮和干燥得到的。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的魚肉蛋白多肽粉，其特征在于，所述超濾為魚肉蛋白肽經(jīng)孔 徑為5000道爾頓的陶瓷膜超濾。8. -種具有降血糖功能的魚肉蛋白復(fù)合活性肽粉，其特征在于，其原料包含權(quán)利要求 1~5任一項所述的魚肉蛋白肽。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的魚肉蛋白復(fù)合活性肽粉，其特征在于，其制備方法包括如下 步驟： (一） 將乳清蛋白利用復(fù)合蛋白酶進行酶解，得到乳清蛋白肽； (二） 將魚肉蛋白肽與乳清蛋白肽以2:1~4:1的比例混合，在35~45°C條件下攪拌 3~5分鐘，混合液通過超濾方法進行處理，利用孔徑為5000道爾頓的陶瓷膜超濾； (三） 取分子量小于5000道爾頓的蛋白肽液，通過濃縮、冷凍干燥，即得。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的魚肉蛋白復(fù)合活性肽粉，其特征在于，所述步驟（一）具體 為：將乳清濃縮蛋白，加入8~12倍重量的去離子水，溫度調(diào)節(jié)到35~45°C，攪拌30~ 50分鐘，然后將溫度調(diào)至45~55°C，按照復(fù)合蛋白酶與乳清濃縮蛋白質(zhì)量比為1:100~ 1:200的比例加入復(fù)合蛋白酶，酶解0. 5~2. 0小時，在4000~6000g條件下離心5~10 分鐘，收集上清液，得到乳清蛋白肽； 所述復(fù)合蛋白酶由風(fēng)味蛋白酶與堿性蛋白酶按質(zhì)量比為1:1的比例混合。
【專利摘要】本發(fā)明涉及功能性食品加工領(lǐng)域，具體公開了一種具有降血糖功能的魚肉蛋白肽、魚肉蛋白多肽粉以及魚肉蛋白復(fù)合活性肽粉。所述魚肉蛋白肽是由魚肉蛋白先后經(jīng)菠蘿蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶酶解得到，具有較強的降血糖功能。將該魚肉蛋白肽與乳清蛋白肽混合后，經(jīng)超濾、濃縮、冷凍干燥后即得具有降血糖功能的魚肉蛋白復(fù)合活性肽粉。
【IPC分類】A23L17/10, A23L33/18
【公開號】CN105341949
【申請?zhí)枴緾N201510649794
【發(fā)明人】羅永康, 郭珊珊, 徐萍
【申請人】濱州萬嘉生物科技有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年10月9日