br>[0026] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有W下優(yōu)點(diǎn)：
[0027] 1、本制備方法將揮發(fā)油蒸發(fā)，并采用醇沉凈化、微波真空低溫干燥工藝，使得制備 的產(chǎn)品中不含揮發(fā)油、蛋白、淀粉等無效甚至有毒副作用的成分，功能性多糖的濃度較高， 實(shí)際應(yīng)用時(shí)用量減少，從而降低成本；
[0028] 2、本制備方法先在蒸汽干蒸饋階段將中草藥中的促生長(zhǎng)因子、抗病因子、降膽固 醇因子按GMP的要求進(jìn)行提取，做為人類用藥預(yù)留，充分利用其價(jià)值；
[0029] 3、對(duì)合作中成藥制藥企業(yè)的原來廢棄的中草藥粗多糖進(jìn)行利用，降低產(chǎn)品成本；
[0030] 4、采用本發(fā)明制備的飼料經(jīng)飼養(yǎng)試驗(yàn)，每100元投入可帶來800元左右的收益，而 現(xiàn)有技術(shù)方案的每100元投入一般只能帶來200元左右的收益。
【附圖說明】
[0031 ]圖1是本發(fā)明方法的流程圖。
[0032] 圖2為肉樣采集位置。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 下面結(jié)合圖1、圖2和實(shí)施例詳細(xì)介紹本發(fā)明：
[0034] 實(shí)施例1:中草藥復(fù)合粗多糖(六康素)對(duì)生長(zhǎng)肥育豬免疫調(diào)控作用及其機(jī)理。
[0035] 1材料與方法
[0036] 1.1材料
[0037] 1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物及分組
[0038] 選用28日齡、體重相近、健康的杜洛克X長(zhǎng)白X大約克=元雜交斷奶仔豬160頭， 根據(jù)體重相近、公母各半的原則將其分為對(duì)照組、試驗(yàn)I組(加抗生素組）、n組(加中草藥復(fù) 合粗多糖飼料0.05%組，該中草藥復(fù)合粗多糖飼料即本申請(qǐng)發(fā)明的中草藥復(fù)合粗多糖飼 料，其質(zhì)量含量為:復(fù)合多糖8.0%~10.0%、寡糖33.0%~35.0%、黃酬7.0%~9.0%、綠 原酸1.0 %~2.0 %、武類物質(zhì)0.5 %~1.0 %、巧類物質(zhì)0.2 %~0.5 %、小膚和游離氨基酸 38%~45%和礦物質(zhì)3%~5%)、虹組(加中草藥復(fù)合粗多糖飼料0.10%組，質(zhì)量含量同上） 和IV組(加中草藥復(fù)合粗多糖飼料0.15%組，質(zhì)量含量同上）。每組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8頭 仔豬。
[0039] 1.1.2試驗(yàn)飼糧及試驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0040] 參照NRC(1998)豬的營(yíng)養(yǎng)需要W及我國(guó)斷奶仔豬的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，配制成基礎(chǔ)全價(jià)日 糧，飼糧配方及主要營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)見表1。
[0041 ]表1試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及其營(yíng)養(yǎng)水平
[0042]
[0043] 注:*為每千克飼糧提供微量元素的保證值分別為:Fe 80mg;Zn 80mg，Cu 5mg;Mn 3mg;Se 0.25mg;I 0.14mg;用碳酸巧作為微量元素稀釋劑。
[0044] **為每千克飼糧提供各種維生素的保證值分別為：VA 2250IU，VD 220IU;VE 16IU;VK3 0.5mg;VBl 2mg;VB24.5mg;VB6 7mg;VB12 0.03mg;煙酸 30mg;泛酸 25mg;葉酸 0.30mg 生物素 0.20mg;
[0045] ***營(yíng)養(yǎng)成分中粗蛋白、巧、總憐為實(shí)測(cè)值，其他指標(biāo)為計(jì)算值。
[0046] 試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表2，對(duì)照組為基礎(chǔ)日糧組，試驗(yàn)I組在基礎(chǔ)日糧上添加金霉素和桿菌 膚鋒預(yù)混劑(添加量為全價(jià)配合飼料中含金霉素:5化pm、桿菌膚鋒:4ppm)0.05%，試驗(yàn)n組 在基礎(chǔ)日糧上添加0.05 %的本發(fā)明的中草藥復(fù)合多糖飼料，試驗(yàn)虹組在基礎(chǔ)日糧上添加 0.10%的本發(fā)明的中草藥復(fù)合多糖飼料，試驗(yàn)IV組在基礎(chǔ)日糧上添加0.15%的中草藥復(fù)合 多糖，飼料充分混合均勻。
[0047] 表2試驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0049] 1.1.3中草藥粗多糖
[0050] 為長(zhǎng)沙博聲生物科技有限公司正常生產(chǎn)的中草藥粗多糖產(chǎn)品，批號(hào):20101008。
[0化1] 1.2飼養(yǎng)管理
[0052] 飼養(yǎng)試驗(yàn)在正虹鳳凰山種豬場(chǎng)肥育舍內(nèi)進(jìn)行，采取自由采食、飲水，免疫消毒程序 按豬場(chǎng)常規(guī)方法進(jìn)行，試驗(yàn)由專人負(fù)責(zé)和管理。日喂3次(7:30、12:00、19:30)，采用干拌料， W食槽無剩余料為原則。每天清掃圈舍2次，W保持圈內(nèi)清潔。整個(gè)圈舍采取自然通風(fēng)，所有 圈舍進(jìn)行不定期消毒。預(yù)飼期7d，預(yù)飼期間對(duì)實(shí)驗(yàn)豬進(jìn)行驅(qū)蟲、防疫，中間兩次換料采取逐 步替代法，整個(gè)試驗(yàn)正飼期為126d。
[0053] 2測(cè)定指標(biāo)與方法
[0054] 2.1生長(zhǎng)性能指標(biāo)與腹瀉率的測(cè)定
[0055] 在試驗(yàn)開始時(shí)、20千克左右、35千克左右、試驗(yàn)結(jié)束時(shí)分別于清晨空腹各欄逐頭稱 重，記錄各期體重，W欄為單位記錄采食量及腹瀉頭數(shù)。并計(jì)算平均日增重(ADG)、平均日采 食量(ADFI )、料肉比、腹瀉率。根據(jù)日增重和日采食量計(jì)算飼料轉(zhuǎn)化率，并根據(jù)目前市場(chǎng)行 情計(jì)算經(jīng)濟(jì)效益。
[0056] 生長(zhǎng)性能指標(biāo)的數(shù)據(jù)處理：
[0057] 平均日增重(ADG)=總增重/試驗(yàn)總天數(shù)
[005引飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)=飼料總消耗量/總增重（W組為單位進(jìn)行計(jì)算）
[0059] 腹瀉率（％ )=[試驗(yàn)期內(nèi)某組每日豬腹瀉總頭數(shù)/(試驗(yàn)期內(nèi)某組豬總頭數(shù)X飼養(yǎng) 天數(shù))]X 100
[0060] 2.2血清生化指標(biāo)測(cè)定
[0061] 分別于正試期第35天(體重大約20千克）時(shí)隨機(jī)選擇每重復(fù)2頭豬空腹保定，前腔 靜脈采血約15ml，分兩管裝，一管約IOml,用于測(cè)定免疫指標(biāo)和內(nèi)分泌激素，另一管約5ml， 加入肝素抗凝，搖勻，用于測(cè)定血液淋己細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。取IOml管血樣于培養(yǎng)皿中37°C水浴靜 置30min，吸取所析出的血清于離屯、管中，經(jīng)3000;r/min離屯、15min得血清樣品。將各血清樣 品分裝于EPendorf (離屯、）管并浸入液氮中，快速冷凍處理后置于-20°C冰箱中保存?zhèn)溆谩?低溫保存的血清樣品在室溫下解凍，測(cè)定血液生化指標(biāo)。
[0062] 血清生化指標(biāo)采用全自動(dòng)生化分析儀。測(cè)定指標(biāo)及其測(cè)定方法分別為:免疫球蛋 白IgG，IgM，IgA，補(bǔ)體C3，C4，免疫透射比濁法測(cè)定;尿素氮，脈酶法;血糖，氧化酶法;堿性憐 酸酶ALK，酶速率法;血清中白細(xì)胞介素 IL-10、IL-2、化-6、生長(zhǎng)激素(GH)、S艦甲腺原氨酸 (FT3)和四艦甲腺原氨酸(FT4)、腫瘤壞死因子(INF)、類膜島生長(zhǎng)因子(IGF-I)的含量測(cè)定， 采用放射免疫法，在丫免疫計(jì)數(shù)器上進(jìn)行放射性計(jì)數(shù)(型號(hào):GC-1200)。
[0063] 2.3外周血淋己細(xì)胞轉(zhuǎn)化率
[0064] 2.3.1主要儀器：318MC型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、倒置顯微鏡、C02培養(yǎng)箱、細(xì)胞計(jì)數(shù)器 等。
[00化]2.3.2步驟:采用2.2中用肝素抗凝真空采血管中5ml血液，將新鮮抗凝血液于37°C 水浴鍋中靜置1-2小時(shí)，待紅細(xì)胞沉淀后，吸取中間白細(xì)胞層并梢?guī)┘t細(xì)胞，移入另一無 菌離屯、管中，離屯、1〇111；[]1(1000轉(zhuǎn)/1]1；[]1),去上清，加入11]11紅細(xì)胞裂解液，混勻靜置51]1；[]1，離屯、 5min(1000轉(zhuǎn)/min),離屯、后去上清，加入1ml RPMI-1640培養(yǎng)液，離屯、5min(1000轉(zhuǎn)/min),去 上清，力郵PMI-1640完全培養(yǎng)液Iml，用臺(tái)吩藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)(應(yīng)在95 % W上），用RPMI-1640完全培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞至2 X 106個(gè)/ml。置于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，第一孔加入200iil RPMI-1640完全培養(yǎng)基，其余每孔加入10化1細(xì)胞液，前五孔加10化IPHA刺激液，后五孔加入 IOOiil RPMI-1640完全培養(yǎng)基，加樣，混勻，置于C02 (5 % )，37 °C飽和濕度下培養(yǎng)48小時(shí)做淋 己細(xì)胞原代培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束前4小時(shí)，每孔輕輕棄去上清液10化1，然后加入5mg/mlMTT刺激 液20iU/孔，混勻后再培養(yǎng)4小時(shí)后，每孔再加入10化1二甲基亞諷，使紫色結(jié)晶完全溶解，混 勻，靜置lOmin，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)0D570nm值，WSI(刺激指數(shù))高低反映淋己細(xì)胞轉(zhuǎn)化 率。
[0066] SI =PHA刺激孔0D570nm平均值/細(xì)胞對(duì)照孔0D570nm平均值
[0067] 2.3.3試驗(yàn)試劑配制
[006引 2.3.3.1 RPMI 1640完全培養(yǎng)液的配制
[0069] 將一瓶RPMI 1640(GIBC0/B化產(chǎn)品）干粉緩慢加入1000 ml蒸饋水中，震蕩溶解。用 5.6 %Na肥03調(diào)節(jié)PH值至6.0-6.2后過濾滅菌，分裝，4°C保存，保存時(shí)加入青霉素、鏈霉素各 lOOU/ml，臨用前加入新生小牛血清使血清濃度為5%，用滅菌的5.6%NaHC03調(diào)PH至7.2。
[0070] 2.3.3.2化址'S液配制
[0071 ]將SOg化Cl，0.98gMgS04，4巧(：1，1.地化2HP04.12H20，0.6巧H2P04，IOg葡萄糖和 1.4gCaC12按順序溶于1000 ml蒸饋水中，并加入4ml氯仿，4°C保存，作為化nk's母液。取 100mL母液用900ml蒸饋水稀釋，加入1 %酪紅，高壓滅菌20i皿后用滅菌的5%Na肥03調(diào)PH值 至7.0-7.2備用。
[0072] 2.3.3.3 PHA(植物血凝集素）的配制
[0073] 每瓶加2ml無菌水溶解后，4°C保存。
[0074] 2.3.3.四甲基偶氮挫鹽（MTT)(MethylthiazolyldiPhengl-tetrazolium bromide)Fl址a公司產(chǎn)品。將其溶于0.0 lmol/L PBS(PH7.2)中，使?jié)舛葹?mg/ml，過濾除菌， 4°C避光保存。
[00巧]2.4腸道微生物數(shù)量的測(cè)定
[0076]于試驗(yàn)正試期第35天時(shí)各重復(fù)組隨機(jī)選擇實(shí)驗(yàn)豬一頭（同性別)共計(jì)20頭豬，進(jìn)行 全身消毒，無菌操作進(jìn)行解剖，迅速剪切結(jié)腸、盲腸和直腸各一段，用滅菌線扎住切口，用酒 精棉球消毒結(jié)扎頭后，放入已滅菌的塑料袋中，運(yùn)回試驗(yàn)室備用。采集結(jié)腸、盲腸食糜和直 腸糞便內(nèi)容物約2g，裝于1.SmL滅菌離屯、管，然后用稀釋液逐級(jí)稀釋至10-7后滴種、培養(yǎng)，測(cè) 定大腸桿菌、乳酸桿菌及雙歧桿菌的數(shù)量;微生物經(jīng)分別培養(yǎng)后計(jì)數(shù)，W50~150個(gè)菌落的 平板的稀釋度作為計(jì)數(shù)用。細(xì)菌數(shù)量采用平板菌落計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，最后用Ig腸道內(nèi)容物 中細(xì)菌個(gè)數(shù)的對(duì)數(shù)QgCFUVg表示。微生物培養(yǎng)的計(jì)數(shù)方法采用平板劃線計(jì)數(shù)法，每克樣本 所含細(xì)菌數(shù)=菌落數(shù)均值X稀釋倍數(shù)/樣品重量。
[0077] (注：1、平衡鹽溶液(PBS)緩沖液配制:NaCl 8克/升，KCl 0.2克/升，Na2HP04.1H20 1.56克/升，KH2P04 0.2克/升。
[0078] 2、稀釋液的配制:化2冊(cè)04 6旨，1(肥？044.5旨