一種增加茶葉及其加工產(chǎn)品中egcg含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及茶葉加工的技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種增加茶葉及其加工產(chǎn)品中EGCG含 量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 茶葉在植物分類系統(tǒng)中屬于山茶科，是一種重要的飲料作物，與咖啡、可可并稱為 世界=大飲料。茶葉中含有多種人體必需的營(yíng)養(yǎng)成分如茶多酪、咖啡堿、氨基酸、茶色素、茶 多糖等，運(yùn)些成分具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、藥用作用及保健功能。其中，茶多酪是茶葉中的一 組多酪類化合物，約占茶葉干重的20 %~38%，組成成分包括黃燒醇類化合物、縮酸及縮酪 類物質(zhì)等。W兒茶素為主的黃燒醇類化合物占茶多酪總量的70~95%。其中EGCG(表沒(méi)食子 兒茶素沒(méi)食子酸醋）是兒茶素類化合物中的一種主要醋型兒茶素（約占兒茶素類總量的 50 %~60 % )，是茶葉中茶多酪的主要組成成分，是兒茶素中活性最高、含量最多的功能成 分。如，研究表明，EGCG是清除自由基、抗氧化能力最強(qiáng)的一種兒茶素。茶葉中兒茶素抗氧化 活性強(qiáng)度的順序依次為:66〔6〉6606〔6〉6。此外，66〔6能夠預(yù)防和治療屯、腦血管疾病;能夠 增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能;抑制肝脂和膽固醇的增長(zhǎng);抑制腫瘤的生長(zhǎng);對(duì)頻疾、傷寒、金黃色葡萄 球菌等細(xì)菌也有極強(qiáng)的抑制作用。現(xiàn)已被列為潛在的抗癌藥物在中美等國(guó)被研究。
[0003] 在茶葉及其提取物加工過(guò)程中，加熱、氧化、酶分解和微生物發(fā)酵等常引起茶葉中 EGCG的含量大量減少。Bra壯iel加開(kāi)究發(fā)現(xiàn)，茶葉經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間高溫作用，其所含的EGCG會(huì)發(fā) 生差向異構(gòu)化作用，生成GCG; Yoku研究發(fā)現(xiàn)，用pH在6~8的水溶液提取綠茶，其EGCG含量顯 著降低，C、GCG等反式異構(gòu)體增加。另外，茶葉中的EGCG在單寧酶作用下可發(fā)生水解而生成 EGC和GA,在漆酶作用下EGCG發(fā)生氧化反應(yīng)而降低。有鑒于此，本發(fā)明人研究和設(shè)計(jì)了一種 增加茶葉及其加工產(chǎn)品中EGCG含量的方法，本案由此產(chǎn)生。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種增加茶葉及其加工產(chǎn)品中EGCG含量的方法，通過(guò)向茶 葉或其提取物中添加酶進(jìn)行反應(yīng)而增加其EGCG的含量。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案是：
[0006] -種增加茶葉及其加工產(chǎn)品中EGCG含量的方法，包括W下步驟：
[0007] 步驟一、培養(yǎng)基的制備:所述培養(yǎng)基按W下質(zhì)量百分百的組分組成:0.5~70%的 碳源，0.05%的氯化鐘，0.0 l %的屯水合硫酸儀，0.1 %的巧樣酸=鋼二水合物，0.1 %的無(wú) 水巧樣酸，0.1 %的酵母提取物，0.1 %的干酪素水解物，用IM的HCl把抑調(diào)到4.0;每個(gè)250mL 錐形瓶中加入25mL培養(yǎng)基，121°C高壓蒸汽滅菌20min;
[000引步驟二、發(fā)酵制備酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種曲霉抱子懸液，所述抱子懸液抱子含量 為1 X IO8個(gè)/ml，在30°C條件下培養(yǎng)4~6天，提取酶液;對(duì)于液態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵液直接過(guò)濾去除 菌體即可得到粗酶液;對(duì)于固體培養(yǎng)基，發(fā)酵后向培養(yǎng)基中加入pH 7.0的憐酸鹽緩沖液，在 20°C條件下，振蕩速度18化pm浸提化，過(guò)濾去除菌體得到粗酶液；
[0009] 步驟=、用酶處理茶葉或者茶葉提取物：向茶葉或者茶葉提取物中加入所述酶液， 在固水比為1:5~1:30,溫度10°C~70°C下進(jìn)行酶反應(yīng)；
[0010] 步驟四、測(cè)定EGCG含量變化:采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定茶樣品中EGCG的含 量;其中，色譜柱NucIeodur PFP規(guī)格為250 X 4.6mm;柱溫35 °C ;流動(dòng)相A: 0.1 %甲酸水溶液； 流動(dòng)相B:0.1 %甲酸乙臘溶液，洗脫梯度:O-Imin，95%A和5%的B，l-6min，85%A和15%的 B，6-20min，70 %A和30 % 的B，20-25min，95 %A和5 % 的B;進(jìn)樣量5.0化，色譜流速0.5ml/ min;質(zhì)譜所用的離子源為Agilent Jet Stream ESI,負(fù)離子模式采集;干燥氣溫度300°C， 干燥氣流速101/min，霧化氣壓力45psi，銷氣溫度350°C，銷氣流速121/min，毛細(xì)管電壓 3000V，噴嘴電壓500V。
[0011] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述碳源為果膠，所述果膠的質(zhì)量百分含量為0.5%~ 2%。
[0012] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述碳源為麥教，所述麥教的質(zhì)量百分含量為2%~ 70%。
[0013] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述碳源為薦糖，所述薦糖的質(zhì)量百分含量為1%~4%。
[0014] 本發(fā)明采用上述技術(shù)方案后，采用的培養(yǎng)基雖為常規(guī)培養(yǎng)基，但原料易得，成本 低，結(jié)合本發(fā)明的酶處理工藝，可顯著提高茶葉及其提取物中EGCG的含量，相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù) 的加工方法，做到了真正"物美價(jià)廉"的有益效果。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 本發(fā)明實(shí)施例中W黑曲霉進(jìn)行發(fā)酵制備酶液提高茶葉中EGCG的含量為例說(shuō)明本 發(fā)明的工藝，但本發(fā)明不僅限用于增加茶葉中EGCG的含量，也適用于茶葉或添加了茶葉或 其提取物的加工產(chǎn)品。
[0016] 采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定茶樣品中EGCG的含量；其中，色譜柱Nucleodur PFP(250 X 4.6mm，5皿，Macher巧-nage 1);柱溫35°C ;流動(dòng)相A: 0.1 %甲酸水溶液；流動(dòng)相B: 0.1%甲酸乙臘溶液，洗脫梯度：0-lmin，95%A和5%的B，l-6min，85%A和15%的B，6-20min，70 % A和30 % 的B，20-25min，95 %A和5 % 的B;進(jìn)樣量5.0化，色譜流速0.5ml/min。質(zhì) 譜所用的離子源為Agilent Jet S化earn ESI，負(fù)離子模式采集;干燥氣溫度300°C，干燥氣 流速101/min，霧化氣壓力45psi，銷氣溫度350°C，銷氣流速121/min，毛細(xì)管電壓3000V，噴 嘴電壓500V。
[0017]實(shí)施例1:
[001引步驟一、制備0.5 %果膠培養(yǎng)基：培養(yǎng)基組成為:0.5 %的果膠，0.05 %的氯化鐘， 0.01 %的屯水合硫酸儀，0.1 %的巧樣酸=鋼二水合物，0.1 %的無(wú)水巧樣酸，0.1 %的酵母 提取物，0.1 %的干酪素水解物，用IM的肥1把抑調(diào)到4.0。每個(gè)250mL錐形瓶中加入25血培養(yǎng) 基，121°C高壓蒸汽滅菌20min。
[0019] 步驟二、發(fā)酵制備粗酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種2mL黑曲霉抱子懸液（1 X IO8個(gè)/ml)， 在30°C條件下(振蕩速度18化pm)培養(yǎng)4天，過(guò)濾去除菌體得到粗酶液。
[0020] 步驟S、酶反應(yīng):稱取lg(±lmg)粉狀烏龍茶樣品（過(guò)20目篩），加入5mL上述酶液W 及35mL水(對(duì)照茶樣品加入5mL滅活的酶液及35mL水)振蕩搖勻；10 °C水浴下反應(yīng)60min，沸 水浴5min，過(guò)濾茶湯，并洗涂茶渣，定容至50mL。
[0021] 步驟四、茶樣品中EGCG含量的檢巧U:用LC-MS檢測(cè)加酶茶樣品中EGCG的含量為 520.3mg/L，對(duì)照茶樣品中EGCG的含量為516.4mg/L。
[0022] 實(shí)施例2:
[0023] 步驟一、制備1 %果膠培養(yǎng)基：培養(yǎng)基組成為：1.0 %的果膠，0.05 %的氯化鐘， 0.01 %的屯水合硫酸儀，0.1 %的巧樣酸=鋼二水合物，0.1 %的無(wú)水巧樣酸，0.1 %的酵母 提取物，0.1 %的干酪素水解物，用IM的肥1把抑調(diào)到4.0。每個(gè)250mL錐形瓶中加入25血培養(yǎng) 基，121°C高壓蒸汽滅菌20min。
[0024] 步驟二、發(fā)酵制備粗酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種2mL黑曲霉抱子懸液（1 X IO8個(gè)/ml)， 在30°C條件下(振蕩速度18化pm)連續(xù)培養(yǎng)4天，過(guò)濾去除菌體可得到粗酶液。
[0025] 步驟S、酶反應(yīng):稱取lg(± Img)粉狀烏龍茶樣品（過(guò)20目篩），加入IOmL上述酶液 W及30mL水（對(duì)照茶樣品加入IOmL滅活的酶液及30mL水），振蕩搖勻；25°C水浴下反應(yīng) 60min，反應(yīng)結(jié)束后沸水浴5min，過(guò)濾茶湯，并洗涂茶渣，定容至50mL。
[0026] 步驟四、茶樣品中EGCG含量的檢巧U:用LC-MS檢測(cè)加酶茶樣品中EGCG的含量為 568.7mg/L，對(duì)照樣茶品中EGCG的含量為516.4mg/L。
[0027] 實(shí)施例3:
[002引步驟一、制備1.5 %果膠培養(yǎng)基：培養(yǎng)基組成為：1.5 %的果膠，0.05 %的氯化鐘， 0.01 %的屯水合硫酸儀，0.1 %的巧樣酸=鋼二水合物，0.1