Img)粉狀烏龍茶樣品(過20目篩),加入IOmL酶液W及 30mL水(對照茶樣品加入IOmL滅活酶液及30mL水),振蕩搖勻;25°C水浴下反應(yīng)60min,反應(yīng) 結(jié)束后沸水浴5min,過濾茶湯,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0066] 步驟四、茶樣品中EGCG含量的檢巧U:用LC-MS檢測加酶茶樣品中EGCG的含量為 545.7mg/L,對照茶樣品中EGCG的含量為516.6mg/L。
[0067] 實(shí)施例11:
[0068] 步驟一、制備3%薦糖培養(yǎng)基:稱取薦糖30g,硝酸鋼3g,憐酸氨二鐘Ig,氯化鐘 0.5g,硫酸亞鐵0.0Ig,硫酸儀0.5g,加水定容至1000 mL。每個(gè)250mL錐形瓶中加入30mL培養(yǎng) 基,121°C高壓蒸汽滅菌20min。
[0069] 步驟二、發(fā)酵制備粗酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種2mL抱子懸液(1 X IO8個(gè)/ml ),在30 °C、180rpm條件下振蕩培養(yǎng)6天,過濾去除菌體即得到粗酶液。
[0070] 步驟S、酶反應(yīng):稱取lg(±lmg)粉狀烏龍茶樣品(過20目篩),加入20mL酶液W及 20mL水(對照茶樣品加入20mL滅活的酶液及20mL水),振蕩搖勻;40°C水浴下反應(yīng)60min,反 應(yīng)結(jié)束后沸水浴5min,然后過濾茶湯,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0071] 步驟四、茶樣品中EGCG含量的檢巧U:用LC-MS檢測加酶茶樣品中EGCG的含量為 582.3mg/L,對照茶樣品中EGCG的含量為516.4mg/L。
[0072] 實(shí)施例12:
[0073] 步驟一、制備4%薦糖培養(yǎng)基:稱取薦糖40g,硝酸鋼3g,憐酸氨二鐘Ig,氯化鐘 0.5g,硫酸亞鐵0.0Ig,硫酸儀0.5g,加水定容至1000 mL。每個(gè)250mL錐形瓶中加入30mL培養(yǎng) 基,121°C高壓蒸汽滅菌20min。
[0074] 步驟二、發(fā)酵制備粗酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種2mL抱子懸液(IX IO8個(gè)/ml),在30°C 條件下(振蕩速度18化pm)連續(xù)培養(yǎng)6天,過濾去除菌體即可得到粗酶液。
[0075] 步驟S、酶反應(yīng):稱取lg(±lmg)粉狀烏龍茶樣品(過20目篩),加入30mL酶液W及 1 OmL水(對照茶樣品30mL滅活的酶液及1 OmL水),振蕩搖勻;70°C水浴下反應(yīng)60min,反應(yīng)結(jié) 束后沸水浴5min,然后過濾茶湯,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0076] 步驟四、茶樣品中EGCG含量的檢巧U:用LC-MS檢測加酶茶樣品中EGCG的含量為 596.7mg/L,對照茶樣品中EGCG的含量為516.4mg/L。
[0077] 為了進(jìn)一步說明本發(fā)明的創(chuàng)造性,下面再列舉采用其他培養(yǎng)基發(fā)酵的酶液處理茶 葉的對比實(shí)施例進(jìn)行比較,W說明本發(fā)明采用果膠、麥教和薦糖為碳源培養(yǎng)微生物所帶來 的技術(shù)效果。
[007引對比實(shí)施例1:
[0079] 步驟一、制備2%葡萄糖培養(yǎng)基:稱取去皮的馬鈴馨150g,切成小塊煮沸半小時(shí),然 后用紗布過濾,再加葡萄糖lOg,融化后補(bǔ)足水至lOOOmL。每個(gè)250mL錐形瓶中加入30血培養(yǎng) 基,121°C高壓蒸汽滅菌20min。
[0080] 步驟二、發(fā)酵制備粗酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種2mL曲霉抱子懸液(1 X IO8個(gè)/ml),在 30°C條件下(振蕩速度18化pm)連續(xù)培養(yǎng)6天,過濾去除菌體得到粗酶液。
[0081] 步驟S、酶反應(yīng):稱取lg(±lmg)粉狀烏龍茶樣品(過20目篩),加入5mL該酶液W及 35mL水(對照茶樣品加入5mL滅活酶液及35mL水),振蕩搖勻;10°C水浴下反應(yīng)60min,沸水浴 5min,過濾茶湯,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0082] 步驟四、茶樣品中EGCG含量的檢巧U:用LC-MS檢測加酶茶樣品中EGCG的含量為 442. Omg/L,對照茶樣品中EGCG的含量為516.4mg/L。
[0083] 對比實(shí)施例2:
[0084] 步驟一、制備2 %葡萄糖培養(yǎng)基:稱取去皮的馬鈴馨200g,切成小塊煮沸半小時(shí),然 后用紗布過濾,再加葡萄糖20g,融化后補(bǔ)足水至lOOOmL。每個(gè)250mL錐形瓶中加入30血培養(yǎng) 基,121°C高壓蒸汽滅菌20min。
[0085] 步驟二、發(fā)酵制備粗酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種2mL抱子懸液(1 X IO8個(gè)/ml),在30°C 條件下(振蕩速度18化pm)連續(xù)培養(yǎng)6天,過濾去除菌體即可得到粗酶液。
[0086] 步驟S、酶反應(yīng):稱取lg(±lmg)粉狀烏龍茶樣品(過20目篩),加入15mL酶液W及 25mL水(對照茶樣品加入15mL滅活的酶液及25mL水),振蕩搖勻;30°C水浴下反應(yīng)60min,沸 水浴5min,過濾茶湯,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0087] 步驟四、茶樣品中EGCG含量的檢巧U:用LC-MS檢測加酶茶樣品中EGCG的含量為 138. Omg/L,對照樣品中EGCG的含量為516.4mg/L。
[0088] 對比實(shí)施例3:
[0089] 步驟一、制備3%葡萄糖培養(yǎng)基:稱取去皮的馬鈴馨250g,切成小塊煮沸半小時(shí),然 后用紗布過濾,再加葡萄糖30g,融化后補(bǔ)足水至lOOOmL。每個(gè)250mL錐形瓶中加入30血培養(yǎng) 基,121°C高壓蒸汽滅菌20min。
[0090] 步驟二、發(fā)酵制備粗酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種2mL抱子懸液(IX IO8個(gè)/ml),在30°C 條件下(振蕩速度18化pm)連續(xù)培養(yǎng)6天,過濾去除菌體即可得到粗酶液。
[0091] 步驟S、酶反應(yīng):稱取Ig( ± Img)粉狀烏龍茶樣品(過20目篩),加入30mL酶液W及 1 OmL水(對照茶樣品加入30mL滅活的酶液及1 OmL水),振蕩搖勻;70 °C水浴下反應(yīng)60min,沸 水浴5min,然后過濾茶湯,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0092] 步驟四、茶樣品中EGCG含量的檢巧U:用LC-MS檢測加酶茶樣品中EGCG的含量為 112.7mg/L,對照茶樣品中EGCG的含量為516.4mg/L。
[0093] 對比實(shí)施例4:
[0094] 步驟一、制備25%抽皮粉培養(yǎng)基:250mL錐形瓶中加入抽皮粉(過20目篩)3g,硫酸 錠Ig,水8mL,12rC高壓蒸汽滅菌20min。
[0095] 步驟二、發(fā)酵制備粗酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種2mL黑曲霉抱子懸液(1 X IO8個(gè)/ml), 在30°C條件下培養(yǎng)6天,向培養(yǎng)基中加入30mL憐酸鹽緩沖液(pH 7.0),20°C條件下振蕩浸提 化,過濾去除菌體及抽皮粉得到粗酶液。
[0096] 步驟S、酶反應(yīng):稱取lg(±lmg)粉狀烏龍茶樣品(過20目篩),加入5mL酶液W及 35mL水(對照茶樣品加入5mL滅活酶液及35mL水),振蕩搖勻;10°C水浴下反應(yīng)60min,反應(yīng)結(jié) 束后沸水浴5min,過濾茶湯,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0097] 步驟四、茶樣品中EGCG含量的檢巧U:用LC-MS檢測加酶茶樣品中EGCG的含量為 512.6mg/L,對照茶樣品中EGCG的含量為516.4mg/L。
[0098] 對比實(shí)施例5:
[0099] 步驟一、制備31.1 %抽皮粉培養(yǎng)基:250mL錐形瓶加入抽皮粉(過20目篩)5g,硫酸 錠Ig,水8mL,12rC高壓蒸汽滅菌20min。
[0100] 步驟二、發(fā)酵制備粗酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種2mL曲霉抱子懸液(IX IO8個(gè)/ml),在 30°C條件下培養(yǎng)6天,向培養(yǎng)基中加入30mL憐酸鹽緩沖液(pH 7.0),在20°C條件下振蕩浸提 化,過濾去除殘?jiān)吹玫酱置敢骸?br>[0101] 步驟S、酶反應(yīng):稱取Ig( ± Img)粉狀烏龍茶樣品(過20目篩),加入15mL酶液W及 25mL水(對照茶樣品加入15mL滅活的酶液及25mL水),振蕩搖勻;30°C水浴下反應(yīng)60min,沸 水浴5min,然后過濾茶湯,并洗涂茶渣,定容至50mL。
[0102] 步驟四、茶樣品中EGCG含量的檢巧U:用LC-MS檢測加酶茶樣品中EGCG的含量為 500.1 mg/L,對照茶樣品中EGCG的含量為516.4mg/L。
[0103] 對比實(shí)施例6:
[0104] 步驟一、制備50%抽皮粉培養(yǎng)基:250mL錐形瓶中加入抽皮粉(過20目篩)7g,硫酸 錠Ig,水8mL,12rC高壓蒸汽滅菌20min。
[0105] 步驟二、發(fā)酵制備粗酶液:培養(yǎng)基冷卻后接種2mL曲霉抱子懸液(IX IO8個(gè)/ml),在 30°C條件下連續(xù)培養(yǎng)6天,向培養(yǎng)基中加入