本發(fā)明涉及一種中藥粗提物、中藥提取物及其制備、應(yīng)用和含其的組合物。
背景技術(shù)：
：人體油脂分泌過多會(huì)導(dǎo)致眾多影響皮膚健康的疾病的發(fā)生。例如，皮膚油脂分泌旺盛將引起毛囊口角化過度，從而影響毛囊的營(yíng)養(yǎng)，致毛囊逐漸萎縮、毀壞引起禿發(fā)。脂溢性脫發(fā)，是男性脫發(fā)的原因中最主要的，男性會(huì)發(fā)現(xiàn)自己頂部或前額部的頭發(fā)漸漸變得稀疏，通常男性型脫發(fā)患者在頭發(fā)出現(xiàn)過早脫落的同時(shí)常伴有頭皮皮脂溢出、頭皮屑較多、頭皮癢等情況。脂溢性脫發(fā)通常在男性二十多歲時(shí)出現(xiàn)，并隨著年齡的增大而變得更為常見，大約有一半年齡在40-50歲之間的男性出現(xiàn)不同程度的脫發(fā)。皮脂腺分泌的皮脂不會(huì)直接排到皮膚表面，而是通過毛囊的導(dǎo)管從毛發(fā)的根部排泄出來，當(dāng)肌膚內(nèi)部油脂分泌過多，無法疏通時(shí)，毛孔就會(huì)隨之漲大，當(dāng)肌膚油脂分泌過量，又沒有徹底清除干凈，油脂和毛孔中的角質(zhì)融合在一起，就會(huì)造成毛孔堵塞，形成痤瘡等皮膚問題。5α-還原酶是將睪酮(T)催化轉(zhuǎn)化為生理活性更強(qiáng)的雙氫睪酮(DHT)的關(guān)鍵酶，而DHT在前列腺和皮膚內(nèi)積累到高水平后會(huì)引起許多病理變化，如前列腺增生、痤瘡、男性脫發(fā)、女性多毛等。也就是說，使用5α-還原酶抑制劑能降低皮膚中的DHT濃度，可以治療或預(yù)防脫毛癥、痤瘡、脂溢性皮炎等?，F(xiàn)有的5α-還原酶抑制劑以西藥居多，存在較大副作用，治標(biāo)不治本，且不宜長(zhǎng)期大量使用。目前開發(fā)的一些抗雄激素的藥物和含有雄激素拮抗劑的化妝品也均存在不同程度的不良反應(yīng)，需要開發(fā)更多的、新型的、不良反應(yīng)輕微的抑制DHT生成的藥物。因此對(duì)于痤瘡、脫發(fā)等需要長(zhǎng)期使用5α- 還原酶抑制劑的人群，就需要一種天然、安全、有效的替代品。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的5α-還原酶抑制劑大多以西藥為主，存在副作用大、治標(biāo)不治本且不宜長(zhǎng)期大量使用的缺陷，而提供了一種中藥粗提物、中藥提取物及其制備、應(yīng)用和含其的組合物。本發(fā)明提供的中藥提取物抑制效果好、添加量低且天然安全。本發(fā)明提供了一種中藥粗提物的制備方法，其包括如下步驟：(1)將姜黃屬藥材與山奈以質(zhì)量比(1:8)-(1:4)混合均勻，得藥材混合物；(2)用70-90°的乙醇水溶液提取所述的藥材混合物，得提取液；所述的提取的溫度為55-65℃；(3)將所述的提取液冷卻至35-45℃，再與質(zhì)量百分濃度為0.5％-2％的殼聚糖絮凝劑混合均勻進(jìn)行絮凝，然后靜置，過濾得濾液；所述的殼聚糖絮凝劑的使用量為所述提取液的3％-6％，所述百分比為質(zhì)量百分比；所述的混合均勻的時(shí)間為15-30min；(4)將所述濾液濃縮，得中藥粗提物；所述的濃縮的溫度為60℃以內(nèi)；所述的中藥粗提物的比重為1.05-1.1。步驟(1)中，所述的姜黃屬藥材具有本領(lǐng)域常規(guī)含義，較佳地為姜黃、莪術(shù)和郁金中的一種或多種，更佳地為姜黃。其中，所述的莪術(shù)較佳地為廣西莪術(shù)。所述的郁金較佳地為溫郁金。步驟(1)中，所述的姜黃屬藥材和山奈在混合均勻前，較佳地還進(jìn)行預(yù)處理。所述的預(yù)處理為本領(lǐng)域常規(guī)操作，較佳地為粉碎，然后過篩。其中，所述的過篩的篩子尺寸為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為60目。步驟(1)中，所述的姜黃屬藥材與所述的山奈的質(zhì)量比較佳地為1:6。步驟(2)中，所述的乙醇水溶液的濃度是指20℃下的標(biāo)準(zhǔn)酒精濃度，較佳地為80°。所述的乙醇水溶液的溶劑倍量為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為所述 的藥材混合物的8-12倍，更佳地為10倍，其中，所述的藥材混合物與所述的乙醇水溶液的用量均以質(zhì)量計(jì)。步驟(2)中，所述的提取的溫度較佳地為60℃。所述的提取的時(shí)間為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為1.5-2h，更佳地為1h45min。步驟(3)中，所述的冷卻的溫度較佳地為40℃。所述的質(zhì)量百分濃度為0.5％-2％的殼聚糖絮凝劑具有本領(lǐng)域常規(guī)含義，可以通過實(shí)驗(yàn)配制獲得或市售獲得，其中含有0.5％-2％的殼聚糖，1％-2％的醋酸，其余為水，所述百分比為質(zhì)量百分比。其中，殼聚糖的質(zhì)量百分濃度較佳地為1％。所述的質(zhì)量百分濃度為0.5％-2％的殼聚糖絮凝劑的使用量較佳地為所述提取液的4％，所述的百分比為質(zhì)量百分比。步驟(3)中，所述的混合均勻的方式為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為攪拌。所述的攪拌的時(shí)間較佳地為20min。所述的攪拌的速率為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為60-120rpm。步驟(3)中，所述的靜置的時(shí)間為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為30min。步驟(4)中，所述的濃縮的方式為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為減壓濃縮。所述的中藥粗提物的比重較佳地為1.08。所述的比重采用藥物制劑領(lǐng)域常用的比重計(jì)測(cè)得，所述的比重計(jì)的購(gòu)買廠家和型號(hào)較佳地為武強(qiáng)縣欣榮儀表廠生產(chǎn)的型號(hào)為101的液體密度計(jì)(又稱為比重計(jì))。其中，比重?cái)?shù)據(jù)可以直接由比重計(jì)長(zhǎng)柄上的刻度讀取獲得。中藥濃縮液在測(cè)量比重時(shí)一般將測(cè)量溫度設(shè)置在50-60℃之間，以確保濃縮液不會(huì)因低溫下太濃稠失去流動(dòng)性。本發(fā)明還提供由上述制備方法制得的中藥粗提物。本發(fā)明還提供一種中藥提取物的制備方法，其包括如下步驟：(a)將上述中藥粗提物與水混合溶解，調(diào)節(jié)pH至7.0-8.0；所述的溶解的溫度為40-50℃；(b)過濾得濾液和濾渣，采用質(zhì)量百分濃度為0.08％-0.12％的NaOH溶液洗滌所述濾渣，得洗滌液，合并所述濾液和所述洗滌液，得合并液；其中，所述NaOH溶液的用量為步驟(a)中所述中藥粗提物的質(zhì)量的0.8～1.2倍；(c)將所述合并液濃縮，得濃縮液；所述的濃縮的溫度為60℃以內(nèi)；所述的濃縮液的質(zhì)量為所述合并液的質(zhì)量的0.2-0.25倍；(d)將所述的濃縮液冷卻至10-20℃，靜置，結(jié)晶，即可。步驟(a)中，所述的水為本領(lǐng)域常規(guī)使用的物質(zhì)，較佳地為純水。所述的水的使用量為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為所述的中藥粗提物的質(zhì)量的8-10倍，更佳地為9倍。所述的溶解的溫度較佳地為45℃。所述的溶解的時(shí)間為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為15-30min，更佳地為20min。步驟(a)中，所述的pH較佳地為7.5。所述的調(diào)節(jié)pH的方式為本領(lǐng)域常規(guī)方式，較佳地為加入pH調(diào)節(jié)劑進(jìn)行調(diào)節(jié)。其中，所述的pH調(diào)節(jié)劑的種類為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為NaOH溶液。其中，所述的NaOH溶液的質(zhì)量百分濃度為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為5％。步驟(b)中，所述的NaOH溶液的質(zhì)量百分濃度較佳地為0.1％。步驟(b)中，所述的NaOH溶液的用量較佳地為步驟(a)中所述的中藥粗提物的質(zhì)量的1倍。步驟(c)中，所述的濃縮的方式為本領(lǐng)域常規(guī)的濃縮方式，較佳地為減壓濃縮。所述的濃縮液的質(zhì)量較佳地為步驟(b)中合并液質(zhì)量的0.22倍。步驟(d)中，所述的靜置的時(shí)間為本領(lǐng)域常規(guī)，較佳地為1h。所述的靜置的溫度較佳地為15℃。本發(fā)明中，較佳地，步驟(d)中所述的結(jié)晶得到的結(jié)晶濾液，可以在后續(xù)批次中代替一部分水用于步驟(a)中中藥粗提物的溶解過程。一般來說，步驟(d)中的結(jié)晶濾液的質(zhì)量是不足以用來進(jìn)行步驟(a)中中藥粗提物的溶解過程的，因此，可以將步驟(d)得到的結(jié)晶濾液的一部分或全部用于后續(xù)批次的溶解過程，不足的部分再采用水補(bǔ)充。本發(fā)明還提供上述制備方法制得的中藥提取物。本發(fā)明還提供上述中藥提取物在制備抑制5α-還原酶的外用藥或化妝品中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供一種包含上述中藥提取物的組合物。其中，所述的組合物較佳地為外用藥或化妝品。所述的組合物中，所述中藥提取物的質(zhì)量百分含量較佳地為0.1％。在符合本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí)例。本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：(1)本發(fā)明提供的中藥提取物與單味藥材以及普通工藝相比，具有更好的5α-還原酶抑制效果，說明以姜黃和山奈為原料的中藥提取物在抑制5α-還原酶上具有協(xié)同作用，可以并從根本上安全有效地治療因5α-還原酶引起的雄性激素過多導(dǎo)致的病癥。(2)本發(fā)明提供的中藥粗提物具有較好的抑制5α-還原酶的功效。(3)本發(fā)明提供的中藥提取物可以添加至外用藥以及一般化妝品中，且僅需添加較少量的中藥提取物即可達(dá)到較好的抑制5α-還原酶的效果。(4)本發(fā)明的制備方法克服了傳統(tǒng)中藥提取工藝中使用的提取試劑不環(huán)保、原料利用不充分、能耗大以及提取物純度低的缺陷。具體實(shí)施方式下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。下述實(shí)施例中，所述的乙醇水溶液的濃度是指20℃下的標(biāo)準(zhǔn)酒精濃度。下述實(shí)施例中，中藥粗提物的比重采用武強(qiáng)縣欣榮儀表廠生產(chǎn)的型號(hào)為101的液體密度計(jì)(又稱為比重計(jì))測(cè)得。其中，比重?cái)?shù)據(jù)可以直接由比重計(jì)長(zhǎng)柄上的刻度讀取獲得，測(cè)量溫度設(shè)置在50-60℃之間，以確保濃縮液不會(huì)因低溫下太濃稠失去流動(dòng)性。實(shí)施例1本實(shí)施例中抑制5α-還原酶的中藥粗提物的制備步驟如下：(1)將藥材姜黃、山奈，以質(zhì)量比1:8分別粉碎、過60目篩，然后混合均勻，得藥材混合物；(2)用70°的乙醇水溶液提取上述藥材混合物，得提取液；其中，提取溫度55℃，溶劑倍量8倍，提取時(shí)間為1.5h；其中，所述的藥材混合物與所述的乙醇水溶液的用量均以質(zhì)量計(jì)；(3)將上述提取液冷卻至35℃，攪拌加入質(zhì)量百分濃度為1％的殼聚糖絮凝劑進(jìn)行絮凝，靜置30min然后過濾得濾液；所述殼聚糖絮凝劑的使用量為提取液的3％，所述百分比為質(zhì)量百分比；所述攪拌的時(shí)間為15min；所述攪拌的速率為60rpm；(4)將上述濾液減壓濃縮，得中藥粗提物；所述的濃縮的溫度控制在60℃以內(nèi)；所述的中藥粗提物的比重為1.05。本實(shí)施例中抑制5α-還原酶的中藥提取物的制備步驟如下：(a)將上述中藥粗提物用其8倍質(zhì)量的水?dāng)嚢枞芙猓龅娜芙獾臏囟葹?0℃，所述的溶解的時(shí)間為15min，溶解時(shí)使用質(zhì)量百分濃度為5％的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.0；(b)趁熱過濾，過濾后使用占所述提取物1倍質(zhì)量的、質(zhì)量百分濃度為0.1％的NaOH洗滌濾渣，合并濾液及洗滌液得合并液；(c)將所述濾液減壓濃縮，得濃縮液；所述的濃縮的溫度控制在60℃以內(nèi)；所述的濃縮液的質(zhì)量為步驟(b)中合并液質(zhì)量的0.2倍；(d)將所述的濃縮液取出，冷卻后，放置在10℃，靜置1h，回收結(jié)晶和結(jié)晶濾液；其中，結(jié)晶濾液可用作后續(xù)批次的步驟(a)的溶解過程。實(shí)施例2本實(shí)施例中抑制5α-還原酶的中藥粗提物的制備步驟如下：(1)將藥材姜黃、山奈，以質(zhì)量比1:4分別粉碎、過60目篩，然后混合均勻，得藥材混合物；(2)用90°的乙醇水溶液提取上述藥材混合物，得提取液；其中，提取溫度65℃，溶劑倍量12倍，提取時(shí)間為2h；其中，所述的藥材混合物與 所述的乙醇水溶液的用量均以質(zhì)量計(jì)；(3)將上述提取液冷卻至45℃，攪拌加入質(zhì)量百分濃度為1％的殼聚糖絮凝劑進(jìn)行絮凝，靜置30min然后過濾得濾液；所述殼聚糖絮凝劑的使用量為提取液的6％，所述百分比為質(zhì)量百分比；所述攪拌的時(shí)間為30min；所述攪拌的速率為120rpm；(4)將上述濾液減壓濃縮，得中藥粗提物；所述的濃縮的溫度控制在60℃以內(nèi)；所述的中藥粗提物的比重為1.1。本實(shí)施例中抑制5α-還原酶的中藥提取物的制備步驟如下：(a)將上述中藥粗提物用其10倍質(zhì)量的水?dāng)嚢枞芙?，溶解的溫度?0℃，溶解的時(shí)間為30min，溶解時(shí)使用質(zhì)量百分濃度為5％的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.0；(b)趁熱過濾，過濾后使用占所述中藥粗提物1倍質(zhì)量的、質(zhì)量百分濃度為0.1％的NaOH洗滌濾渣，合并濾液及洗滌液得合并液；(c)將所述濾液減壓濃縮，得濃縮液；濃縮的溫度控制在60℃以內(nèi)；所述的濃縮液的質(zhì)量為步驟(b)中合并液質(zhì)量的0.25倍；(d)將所述的濃縮液取出，冷卻后，放置在20℃，靜置1h，回收結(jié)晶和結(jié)晶濾液；其中，結(jié)晶濾液可用作后續(xù)批次的步驟(a)的溶解過程。實(shí)施例3本實(shí)施例中抑制5α-還原酶的中藥粗提物的制備步驟如下：(1)將藥材姜黃、山奈，以質(zhì)量比1:6分別粉碎、過60目篩，然后混合均勻，得藥材混合物；(2)用80°的乙醇水溶液提取上述藥材混合物，得提取液；其中，提取溫度60℃，溶劑倍量10倍，提取時(shí)間為1h45min；其中，所述的藥材混合物與所述的乙醇水溶液的用量均以質(zhì)量計(jì)；(3)將上述提取液冷卻至40℃，攪拌加入質(zhì)量百分濃度為1％的殼聚糖絮凝劑進(jìn)行絮凝，靜置30min然后過濾得濾液；所述殼聚糖絮凝劑的使用量為提取液的4％，所述百分比為質(zhì)量百分比；所述的攪拌的時(shí)間為20min； 所述攪拌的速率為90rpm；(4)將上述濾液減壓濃縮，得中藥粗提物；所述的濃縮的溫度控制在60℃以內(nèi)；所述的中藥粗提物的比重為1.08。本實(shí)施例中抑制5α-還原酶的中藥提取物的制備步驟如下：(a)將上述中藥粗提物用其9倍質(zhì)量的水?dāng)嚢枞芙?，溶解的溫度?5℃，溶解的時(shí)間為20min，溶解時(shí)使用質(zhì)量百分濃度為5％的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.5；(b)趁熱過濾，過濾后使用占所述中藥粗提物1倍質(zhì)量的、質(zhì)量百分濃度為0.1％的NaOH洗滌濾渣，合并濾液及洗滌液得合并液；(c)將所述濾液減壓濃縮，得濃縮液；濃縮的溫度控制在60℃以內(nèi)；所述的濃縮液的質(zhì)量為步驟(b)中合并液質(zhì)量的0.22倍；(d)將所述的濃縮液取出，冷卻后，放置在15℃，靜置1h，回收結(jié)晶和結(jié)晶濾液；其中，結(jié)晶濾液可用作后續(xù)批次的步驟(a)的溶解過程。實(shí)施例4本實(shí)施例采用廣西莪術(shù)和山奈為原料來制備抑制5α-還原酶的中藥粗提物和中藥提取物，其余工藝條件和步驟均同實(shí)施例3。實(shí)施例5本實(shí)施例采用溫郁金和山奈為原料來制備抑制5α-還原酶的中藥粗提物和中藥提取物，制備中藥粗提物的步驟(3)中，殼聚糖絮凝劑的質(zhì)量百分濃度為0.5％；制備中藥提取物的步驟(b)中，NaOH溶液的質(zhì)量百分濃度為0.08％，用量為步驟(a)中所述中藥粗提物的質(zhì)量的1.2倍；其余工藝條件和步驟均同實(shí)施例3。實(shí)施例6本實(shí)施例的制備抑制5α-還原酶的中藥粗提物和中藥提取物的工藝中，制備中藥粗提物的步驟(3)中，殼聚糖絮凝劑的質(zhì)量百分濃度為2％；制備中藥提取物的步驟(b)中，NaOH溶液的質(zhì)量百分濃度為0.12％，用量為步驟(a)中所述中藥粗提物的質(zhì)量的0.8倍；其余工藝條件和步驟均同實(shí)施 例3。對(duì)比實(shí)施例1本對(duì)比實(shí)施例采用單組份姜黃來制備抑制5α-還原酶的中藥粗提物和中藥提取物，其中姜黃的質(zhì)量與實(shí)施例3中姜黃與山奈的質(zhì)量之和相同，其余工藝條件和步驟均同實(shí)施例3中抑制5α-還原酶的中藥提取物的工藝步驟和條件。對(duì)比實(shí)施例2本對(duì)比實(shí)施例采用單組份山奈來制備抑制5α-還原酶的中藥粗提物和中藥提取物，其中山奈的質(zhì)量與實(shí)施例3中姜黃與山奈的質(zhì)量之和相同，其余工藝條件和步驟均同實(shí)施例3抑制5α-還原酶的中藥提取物的工藝步驟和條件。對(duì)比實(shí)施例3本對(duì)比實(shí)施例以常規(guī)工藝來制備抑制5α-還原酶的中藥提取物，制備步驟如下：(1)將藥材姜黃、山奈，以質(zhì)量比1:6分別粉碎、過80目篩，然后混合均勻，得藥材混合物；(2)用75°的乙醇水溶液提取上述藥材混合物，得提取液；其中，提取溫度60℃，溶劑倍量10倍，提取時(shí)間為1.5h，提取次數(shù)3次；(3)將上述提取液過濾后減壓濃縮至比重1.05-1.1，噴霧干燥即可；其中濃縮溫度控制在60℃以內(nèi)。對(duì)比實(shí)施例4本對(duì)比實(shí)施例采用50°的乙醇水溶液作為提取溶劑，來制備抑制5α-還原酶的中藥粗提物和中藥提取物，其余工藝條件和步驟均同實(shí)施例3。對(duì)比實(shí)施例5本對(duì)比實(shí)施例中姜黃與山奈以1：1的質(zhì)量比進(jìn)行提取，來制備抑制5α-還原酶的中藥粗提物和中藥提取物，其余工藝條件和步驟均同實(shí)施例3。對(duì)比實(shí)施例6本對(duì)比實(shí)施例中姜黃與山奈以1：10的質(zhì)量比進(jìn)行提取，來制備抑制5α-還原酶的中藥粗提物和中藥提取物，其余工藝條件和步驟均同實(shí)施例3。效果實(shí)施例1本效果實(shí)施例考察了前述實(shí)施例1-4和對(duì)比實(shí)施例1-6制得的中藥粗提物或中藥提取物在抑制5α-還原酶上的效果。1、測(cè)試原理：5α-還原酶催化睪酮(T)轉(zhuǎn)化為雙氫睪酮(DHT)時(shí)依賴還原型輔酶Ⅱ(NADPH)作為供氫體，NADPH本身有強(qiáng)烈熒光，當(dāng)NADPH與還原酶和底物反應(yīng)后，NADPH生成NADP+，熒光隨之淬滅，因此可以通過熒光檢測(cè)儀測(cè)定NADPH的熒光強(qiáng)度來考察5α-還原酶的活性。2、測(cè)試所需的試劑和儀器：試劑：5α-還原酶抑制劑非那雄胺(非那雄胺是市售的抑制5α-還原酶的西藥產(chǎn)品)、睪酮和NADPH均購(gòu)自sigma。儀器：酶標(biāo)儀、高速離心機(jī)和數(shù)顯不銹鋼電熱培養(yǎng)箱。3、5α-還原酶酶促反應(yīng)建立及條件優(yōu)化：酶反應(yīng)體系中各組分的原始濃度分別選為：NADPH濃度(20mmol/L)；睪酮濃度(20μmol/L)；非那雄胺(1.3mmol/L)，建立酶促反應(yīng)，并優(yōu)化反應(yīng)條件。通過條件優(yōu)化，選擇以下條件用于5α-還原酶抑制劑的篩選：酶反應(yīng)體系中各組分的原始濃度分別為：緩沖溶液(蔗糖0.73mol/L，氯化鈣1.91mmol/L)，NADPH濃度(20mmol/L)，睪酮濃度(20μmol/L)；非那雄胺(1.3mmol/L)用作陽(yáng)性對(duì)照。4、5α-還原酶抑制劑初步篩選：4.15α-還原酶的制備：雌性BalB/C小鼠2只，體重20g，禁食不禁水過夜，處死后立刻取其肝臟，于4℃下剪碎，按1：3的比例加入預(yù)冷的勻漿液(蔗糖0.73mol/L，氯化鈣1.91mmol/L)在玻璃勻漿器中勻漿，在4℃下以9000rpm高速離心 30min，取上清液再以12000rpm低溫高速離心30min，上清液為5α-還原酶提取物。將提取物放入小離心管在-70℃下保存，備用。4.2酶反應(yīng)體系中各組分的原始濃度：緩沖溶液及勻漿液(蔗糖0.73mol/L，氯化鈣1.91mmol/L)；NADPH濃度(20mmol/L)；睪酮濃度(20μmol/L)；非那雄胺(1.3mmol/L)。4.35α-還原酶抑制劑篩選：取黑色96孔板，加入睪酮5μL(20μmol/L)，5α-還原酶提取物5μL，非那雄胺5μL(1.3mmol/L)或待測(cè)中藥樣品20μL(終濃度50μmol/L)，緩沖液(蔗糖0.73mol/L，氯化鈣1.91mmol/L)至195μL，在37℃下反應(yīng)30min，加入NADPH5μL(20mmol/L)，在37℃下反應(yīng)1h，吸收光340nm，發(fā)射光495nm測(cè)定熒光強(qiáng)度。設(shè)不加5α-還原酶提取物的反應(yīng)管為空白對(duì)照，設(shè)只加5α-還原酶提取物但不加非那雄胺及化合物的反應(yīng)管為100％酶活性對(duì)照，按下列公式計(jì)算藥物的百分抑制率：抑制率＝(空白管平均熒光強(qiáng)度-化合物管平均熒光強(qiáng)度)/(空白管平均熒光強(qiáng)度-100％酶活性對(duì)照熒光強(qiáng)度)×1004.4篩選結(jié)果：初步篩選時(shí)待測(cè)中藥樣品均采用終濃度為50μmol/L，陽(yáng)性對(duì)照非那雄胺終濃度為1.3mmol/L，初篩結(jié)果見表1。表1各樣品對(duì)5α-還原酶的抑制效果表1的結(jié)果表明：實(shí)施例1-4的中藥提取物和中藥粗提物均表現(xiàn)出良好的5α-還原酶的抑制活性，實(shí)施例1-4的中藥提取物比中藥粗提物的抑制效果更加明顯，可以看出本發(fā)明的精制工藝對(duì)提高抑制效果有明顯作用。實(shí)施例4在實(shí)施例3的基礎(chǔ)上將原料姜黃更換為廣西莪術(shù)，抑制效果比使用姜黃和山奈的組合略低，說明本發(fā)明的工藝適用于姜黃同屬的藥材與山奈的配合，但以姜黃和山奈的配合的效果為最佳。而對(duì)比實(shí)施例1和2雖然也有抑制效果，但是相同添加量下的抑制率比實(shí)施例差10％以上。說明本發(fā)明得到的中藥提取物在相同添加量下，相比其單組份擁有更強(qiáng)的5α-還原酶抑制效果。對(duì)比實(shí)施例3的結(jié)果證明了純度不高的提取物，即便提取成分多，由于其雜質(zhì)也多，最終將導(dǎo)致整體的抑制效果顯著下降，從而也體現(xiàn)了本發(fā)明的工藝在提高5α-還原酶抑制效果上的特殊之處。對(duì)比實(shí)施例4的結(jié)果表明：使用50°的乙醇進(jìn)行提取，所得到的提取物對(duì)5α-還原酶沒有明顯抑制作用，說明提取溶劑的選擇對(duì)于提取有效成分有很大的影響。對(duì)比實(shí)施例5的結(jié)果表明：當(dāng)姜黃、山奈藥材質(zhì)量比為1:1時(shí)，其提取物的效果僅略高于山奈單味藥材的效果，證明了在本發(fā)明特別限定的藥材質(zhì)量比范圍之外的比例，所制備的成品效果無法達(dá)到本發(fā)明的要求。對(duì)比實(shí)施例6的結(jié)果表明：當(dāng)姜黃、山奈藥材質(zhì)量比為1:10時(shí)，其提取物的效果僅接近于姜黃單味藥材的效果，同樣證明了在本發(fā)明特別限定的藥材質(zhì)量比范圍之外的比例，所制備的成品效果無法達(dá)到本發(fā)明的要求。而且，根據(jù)表1的結(jié)果對(duì)比可知，對(duì)比實(shí)施例1-2、4-6的中藥提取物的抑制率僅與實(shí)施例1-3的中藥粗提物的效果相當(dāng)，甚至更差。發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)研究還發(fā)現(xiàn)，對(duì)比實(shí)施例1-2、4-6的中藥粗提物的抑制率均遠(yuǎn)差于進(jìn)一步精制得到的中藥提取物的抑制效果。那么，該些對(duì)比實(shí)施例的中藥粗提物的效果自然無法與實(shí)施例1-3的中藥粗提物的效果相提并論。由此，也能體現(xiàn)本發(fā)明的中藥粗提物在抑制5α-還原酶上的優(yōu)異效果。效果實(shí)施例2發(fā)明人在效果實(shí)施例1的篩選本發(fā)明的中藥提取物在不同濃度的5α-還原酶抑制活性的過程中，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的中藥提取物在12.5-50μmol/L劑量范圍內(nèi)對(duì)5α-還原酶具有一定的劑量依賴性的抑制活性。本效果實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)實(shí)施例1-3的中藥提取物進(jìn)行三次不同濃度的重復(fù)實(shí)驗(yàn)，多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果見表2。表2的結(jié)果表明：實(shí)施例1、2、3的在使用量50μmol/L時(shí)達(dá)到較為優(yōu)秀的5α-還原酶抑制效果。表2各樣品對(duì)5α-還原酶的抑制效果效果實(shí)施例3本效果實(shí)施例考察的是實(shí)施例3制備的抑制5α-還原酶的中藥提取物在制備抑制5α-還原酶的外用藥或化妝品中的應(yīng)用?？赜蛯?shí)驗(yàn)方法如下：在一款不含任何控油成分(經(jīng)過測(cè)試無控油效果)的基質(zhì)面霜中，添加實(shí)施例3制得的中藥提取物0.1％，所述百分比為質(zhì)量百分比，混勻，得樣品A；并將空白基質(zhì)作為B一同在受試者臉部做控油短期測(cè)試：測(cè)試儀器：德國(guó)皮膚彈性測(cè)試儀CKMPA-580受試者8人，用普通潔面膏(不含任何功效，僅潔面)清洗臉部。靜坐室內(nèi)10分鐘后進(jìn)行分別對(duì)左右面部對(duì)稱的上中下三塊選定區(qū)域做面部表面油脂含量測(cè)試。受試者面部左、右選定區(qū)域分別涂抹A、B兩面霜，等待1小時(shí)。(期間不做劇烈運(yùn)動(dòng)等會(huì)刺激油脂分泌的行為、且面部不得擦拭)受試者在室內(nèi)靜坐10分鐘后，測(cè)試涂抹面霜后1小時(shí)的面部左右3塊對(duì)稱區(qū)域表面含油量。從涂抹面霜開始計(jì)算時(shí)間，在距其3、5、7小時(shí)再分別測(cè)得相應(yīng)時(shí)間的左右臉表面油脂量數(shù)據(jù)(方法與步驟3相同)。對(duì)8名受試者的數(shù)據(jù)進(jìn)行收集整理和分析。結(jié)果見表3所示。表3樣品A與空白基質(zhì)B對(duì)人臉部油脂分泌的抑制效果時(shí)間(小時(shí))左臉表面含油均值右臉表面含油均值01215128553511025761557108168表3的結(jié)果表明，含有本品0.1％的普通面霜對(duì)臉部油脂分泌短期有明顯抑制作用。效果實(shí)施例4本效果實(shí)施例中的控油試驗(yàn)方法同效果實(shí)施例3，在基質(zhì)膏霜中添加非那雄胺0.05％為對(duì)比樣品C，樣品A的制備如效果實(shí)施例3所示，其中中藥提取物的添加量仍為0.1％，所述百分比為質(zhì)量百分比。表4樣品A與對(duì)比樣品C的對(duì)比結(jié)果表4的結(jié)果表明，含有本品0.1％的普通面霜A效果比C初期效果較弱，但C后期效果下降，且部分受試者用C后面部略感不適，從控油效果、使用量、使用感覺整體評(píng)價(jià)，本發(fā)明成品具有優(yōu)秀的競(jìng)爭(zhēng)力?？梢姡景l(fā)明提供的中藥提取物可以安全有效地用于治療因5-α-還原酶過多引起的油脂分泌旺盛，可以添加至外用藥以及一般化妝品中，且因?yàn)楸酒芳兌雀?，僅需添加少量即可達(dá)到控油(5α-還原酶抑制)效果。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3