本發(fā)明涉及治療呼吸道疾病尤其是哮喘的藥物，特別是含有活性成分化合物Ⅰ其鹽酸鹽、一種或幾種可用于吸入粉霧劑的藥物輔料的干粉吸入藥物組合物。
背景技術(shù)：
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血管新生包括兩個(gè)概念：胚胎期的血管發(fā)生(vasculogenesis，VG)和出生后的血管生成(ang1ogenesis，AG)。VG指的是在沒有血管系統(tǒng)的情況下，由血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial progenitor cell，EPCs)或成血管細(xì)胞(angloblasts)分化成內(nèi)皮細(xì)胞，并形成血管網(wǎng)。AG指的是在成體血管，由已經(jīng)存在的成熟內(nèi)皮細(xì)胞沖破管壁基質(zhì)遷移，增殖和重構(gòu)，以發(fā)芽方式使血管樹枝持續(xù)延長。本發(fā)明中的血管新生是指出生后的血管生成(anglogenesis，AG)。血管新生(anglogenesis)不但是正常生理變化中(如生長、傷口愈合)所必需有的過程，近年來科學(xué)家們也發(fā)現(xiàn)它和腫瘤、老年性黃斑變性、惡性血液病等許多疾病的發(fā)展有密切的關(guān)系。抑制病理性的血管新生，可以治療或減緩腫瘤、老年性黃斑變性、惡性血液病等許多疾病。
目前臨床治療腫瘤的方法大多是針對不同腫瘤采用不同的方法，并且絕大部分是針對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行治療。而腫瘤生長是一個(gè)復(fù)雜的過程，它受到多種因素的影響，其中包括腫瘤血管網(wǎng)的建立。許多研究已經(jīng)證明腫瘤生長必須依賴血管生成，通過抑制血管生成的某些環(huán)節(jié)或整個(gè)過程，進(jìn)而控制腫瘤的生長，對腫瘤治療和防止腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有重要意義。70年代初隨著腫瘤生長依賴于血管形成概念的提出，也相應(yīng)提出了抗血管形成治療的概念，即通過阻止新生血管的發(fā)生和/或新生血管網(wǎng)的擴(kuò)展和/或破壞新生血管來阻止小的實(shí)體瘤的產(chǎn)生或建立，以阻止腫瘤生長、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。國外報(bào)道較多的肝素加氫化可的松.被公認(rèn)為能有效地抑制血管生成。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，其二者聯(lián)合應(yīng)用能抑制雞胚絨毛尿囊膜上血管的生成，井能使腫瘤消退和阻止轉(zhuǎn)移，還可抑制腫瘤引起的兔角膜血管新生。
而血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一類多功能的生長因子，具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)血管形成的作用，一般認(rèn)為抑制血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)可以治療或減緩病理性血管新生。
血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)與新生血管有關(guān)的疾病如腫瘤、支氣管哮喘等疾病有密切關(guān)系，通過抑制血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，可以治療或減緩這些疾病，大量文獻(xiàn)均有這方面的報(bào)道如《綜述VEGF的結(jié)構(gòu)特征及生物學(xué)功能》(中華臨床醫(yī)學(xué)研究雜志,2007年13卷3期,388)、《血管內(nèi)皮生長因子及其受體在婦科疾病中的研究進(jìn)展》(河北醫(yī)藥2006年28卷12期，1192-1194)、《血管內(nèi)皮生長因子與腫瘤關(guān)系研究進(jìn)展》(廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006年23卷2期，333-335)、《VEGF相關(guān)抗腫瘤治療的研究現(xiàn)狀》(吉林醫(yī)學(xué)，2006年27卷5期， 454-457)、《靶向VEGF治療惡性腫瘤的研究進(jìn)展》(現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2006年14卷3期，370-372)、《血管內(nèi)皮生長因子與支氣管哮喘》(實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2007年第23卷第3期，433)。
哮喘是一種慢性氣道炎癥，其特征為可逆性氣道阻塞和氣道反應(yīng)性增高，氣道阻塞由支氣管粘膜炎癥引起的分泌物增加、粘膜水腫和炎癥刺激平滑肌痙攣兩種因素造成；而氣道反應(yīng)性增高也是由于氣道炎癥引起的支氣管上皮細(xì)胞損傷的結(jié)果。人們認(rèn)識到，只有控制氣道粘膜的炎癥，才能達(dá)到最終降低氣道高反應(yīng)性、緩解哮喘癥狀的目的。目前治療哮喘等肺部疾病的藥物常見的是糖皮質(zhì)激素與腎上腺素β2-受體激動(dòng)劑的復(fù)方藥物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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我們驚奇的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明是式Ⅰ化合物的鹽具有抑制VEGF的作用，尤其是在藥用制劑方面，制成干粉吸入劑后，特別是針對腫瘤、哮喘的治療具有一定的作用。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以認(rèn)為，本文所涉及的“治療”可以延伸為疾病的預(yù)防和以確定疾病的治療。
一種吸入粉霧劑藥物組合物，其特征在于含有式Ⅰ化合物鹽酸鹽、一種或幾種可用于吸入粉霧劑的藥物輔料，
Ⅰ的鹽酸鹽
R＝含有3-10個(gè)碳原子的一個(gè)雜原子的環(huán)烷基，其中雜原子為N、O、S。
上述的藥物組合物，其特征在于可用于吸入粉霧劑的藥物輔料為載體和/或附加劑中的一種或幾種。上述藥物組合物，其特征在于所述載體的粒徑為20～60μm。上述藥物組合物，其特征在于所述的載體是糖類載體、氨基酸、卵磷酯或磷脂酰膽堿中的一種或幾種。上述藥物組合物，所述氨基酸為甘氨酸、纈氨酸、亮氨酸。上述藥物組合物，其特征在于所述糖類為單糖、二糖、或其衍生糖的一種或幾種，衍生糖是指糖分子上至少一個(gè)羥基被包含至多20個(gè)碳原子的直鏈或 支鏈烴鏈取代。所述單糖為甘露醇、果糖、葡萄糖。所述二糖為麥芽糖、海藻糖、纖維二糖、乳糖、蔗糖。所述的衍生糖為八醋酸纖維二糖酯、八醋酸蔗糖酯、八醋酸乳糖酯、五醋酸葡萄糖酯、六醋酸甘露醇酯和八醋酸海藻糖酯。
上述藥物組合物，其特征在于載體為乳糖。上述藥物組合物，其特征在于所述的載體是卵磷酯、磷脂酰膽堿中的一種或兩種和乳糖。上述藥物組合物，其特征在于所述的乳糖為α-乳糖一水合物，β-無水乳糖，無定形噴霧干燥乳糖、結(jié)晶干燥乳糖中的一種或幾種。上述藥物組合物，其特征在于所述的乳糖為結(jié)晶干燥乳糖。
上述藥物組合物，其特征在于附加劑為表面活性劑、潤滑劑中的一種或幾種。上述藥物組合物，其特征在于表面活性劑為泊洛沙姆。上述藥物組合物，其特征在于所述潤滑劑為硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉中的一種或幾種。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的取代基R為含有3-8個(gè)碳原子的雜原子環(huán)烷基。上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的取代基R中的雜原子為N。上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的取代基R中的雜原子為O或S。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的取代基R為含有3-8個(gè)碳原子的雜原子環(huán)烷基。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的取代基R中的雜原子為N。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的取代基R中的雜原子為O或S。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物為：
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)丙烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)丁烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)戊烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)戊烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)己烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)己烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)己烷-4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)庚烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)庚烷--3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)庚烷--4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)辛烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)辛烷-5-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺,
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氧雜環(huán)丙烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氧雜環(huán)戊烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氧雜環(huán)己烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氧雜環(huán)庚烷-4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氧雜環(huán)辛烷-4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(硫雜環(huán)丁烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(硫雜環(huán)戊烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(硫雜環(huán)己烷-4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(硫雜環(huán)庚烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(硫雜環(huán)辛烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的為：
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)丙烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)丁烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)戊烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)戊烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)己烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)己烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)己烷-4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)庚烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)庚烷--3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)庚烷--4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)辛烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)辛烷-5-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺。
如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的為：
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)丙烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)戊烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)己烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)己烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)庚烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的為：
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)丁烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)戊烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)己烷-4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)庚烷--3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)庚烷-4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)辛烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氮雜環(huán)辛烷-5-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的為：
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氧雜環(huán)丙烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氧雜環(huán)戊烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氧雜環(huán)己烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氧雜環(huán)庚烷-4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(氧雜環(huán)辛烷-4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物的為：
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(硫雜環(huán)丁烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(硫雜環(huán)戊烷-3-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(硫雜環(huán)己烷-4-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(硫雜環(huán)庚烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺，
5-氨基-2-(2,6-二氟苯基)-N-[5-(硫雜環(huán)辛烷-2-羥基)-異噻唑-4-]-噻唑甲酰胺。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物或其鹽作為治療疾病的藥物中的應(yīng)用。
上述的藥物組合物，其特征在于式Ⅰ化合物或其鹽作為血管內(nèi)皮生長因子受體抑制劑。
血管新生性疾病，主要涉及腫瘤、眼部新生血管、惡性血液病、支氣管哮喘、腦白質(zhì)疏松疾病。
腫瘤主要是各種實(shí)體腫瘤如胃部腫瘤、肺部腫瘤、肝部腫瘤、各種腺體腫瘤、鼻部腫瘤、眼部腫瘤、咽部腫瘤、喉部腫瘤等；惡性血液病是指血液系統(tǒng)的惡性腫瘤，主要包括白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤及惡性組織細(xì)胞病等。
上述的藥用組合物在血管內(nèi)皮生長因子受體抑制劑的藥物中的應(yīng)用。
上述的藥用組合物，其特征在于藥用組合物作為制備治療病理性血管新生疾病的藥物中的應(yīng)用。
上述的藥用組合物，其特征在于藥用組合物在于制備治療病理性血管新生疾病的藥物中的應(yīng)用。
上述的藥用組合物，其特征在于藥用組合物在制備治療肺部腫瘤類疾病藥物的應(yīng)用。
上述的藥用組合物，其特征在于藥用組合物在制備治療呼吸道炎癥的藥物中的應(yīng)用。
上述的藥用組合物，其特征在于藥用組合物在制備治療惡性血液病的藥物中的應(yīng)用。
上述的藥用組合物，其特征在于藥用組合物在制備治療哮喘的藥物中的應(yīng)用。
上述的式Ⅰ化合物鹽酸鹽作為治療疾病的藥物中的應(yīng)用。
上述的式Ⅰ化合物鹽酸鹽在血管內(nèi)皮生長因子受體抑制劑的藥物中的應(yīng)用。
血管新生性疾病，主要涉及腫瘤、眼部新生血管、惡性血液病、支氣管哮喘、腦白質(zhì)疏松疾病。
腫瘤主要是各種實(shí)體腫瘤如胃部腫瘤、肺部腫瘤、肝部腫瘤、各種腺體腫瘤、鼻部腫瘤、眼部腫瘤、咽部腫瘤、喉部腫瘤等；惡性血液病是指血液系統(tǒng)的惡性腫瘤，主要包括白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤及惡性組織細(xì)胞病等。
上述的式Ⅰ化合物鹽酸鹽在于制備治療病理性血管新生疾病的藥物中的應(yīng)用。
上述的式Ⅰ化合物鹽酸鹽在制備治療腫瘤類疾病藥物的應(yīng)用。
上述的式Ⅰ化合物鹽酸鹽在制備治療呼吸道炎癥的藥物中的應(yīng)用。
上述的式Ⅰ化合物鹽酸鹽在制備治療惡性血液病的藥物中的應(yīng)用。
上述的式Ⅰ化合物鹽酸鹽在制備治療哮喘的藥物中的應(yīng)用。
一種制備上述雜原子為N的式Ⅰ化合物的方法：
步驟一：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物1加入8個(gè)碳以內(nèi)的常溫下為液體的醚中，然后降溫至0℃以下，向其中滴加正丁基鋰，反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)液中滴加溴，滴加完成后升至室溫，攪拌半小時(shí)后向其中加入鹽酸溶液，分層，水相用常溫下為液體的有機(jī)醚類溶劑萃取后棄去，合并有機(jī)相，過濾后濃縮至干，得黃色油狀物化合物2；
步驟二：
將化合物2加入裝置中，冷至0℃以下，將提前配好的混酸(濃硫酸：發(fā)煙硝酸的體積比為55：36)滴加入反應(yīng)瓶中，TLC顯示原料消失后冷至室溫，反應(yīng)液傾入碎冰中，有黃色固體析出，過濾，濾餅用水洗滌至中性，干燥，得化合物3粗品，所得粗品柱層析純化后得白色固體化合物3；
步驟三：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物4加入8個(gè)碳以內(nèi)的常溫下為液體的醚中，然后加入NaH室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后加入化合物3，反應(yīng)2小時(shí)，TLC顯示原料消失后，向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯和飽和食鹽水，分層后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾 后減壓濃縮至干，剩余物柱層析純化得黃色固體化合物6；
步驟四：
將化合物6和5％Pd/C加入1-3個(gè)碳的醇中，通氫氣進(jìn)行硝基還原反應(yīng)，反應(yīng)畢過濾，濾液減壓濃縮得化合物7；
步驟五：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物7和化合物8加入1-3個(gè)碳的醇中，加熱反應(yīng)，反應(yīng)畢，減壓濃縮至干，剩余物柱層析純化得化合物9；
步驟六：制備化合物Ⅰ
將化合物9加入1-3個(gè)碳的常溫液態(tài)鹵代烷中攪拌，然后加入HCl/二氧六環(huán)，攪拌反應(yīng)半小時(shí)，用有機(jī)堿調(diào)節(jié)PH>7后過濾，得化合物Ⅰ。
一種制備上述雜原子為O或S的式Ⅰ化合物的方法：
步驟一：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物1加入8個(gè)碳以內(nèi)的常溫下為液體的醚中，然后降溫至 0℃以下，向其中滴加正丁基鋰，反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)液中滴加溴，滴加完成后升至室溫，攪拌半小時(shí)后向其中加入鹽酸溶液，分層，水相用常溫下為液體的有機(jī)醚類溶劑萃取后棄去，合并有機(jī)相，過濾后濃縮至干，得黃色油狀物化合物2；
步驟二：
將化合物2加入裝置中，冷至0℃以下，將提前配好的混酸(濃硫酸：發(fā)煙硝酸的體積比為55：36)滴加入反應(yīng)瓶中，TLC顯示原料消失后冷至室溫，反應(yīng)液傾入碎冰中，有黃色固體析出，過濾，濾餅用水洗滌至中性，干燥，得化合物3粗品，所得粗品柱層析純化后得白色固體化合物3；
步驟三：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物4加入8個(gè)碳以內(nèi)的常溫下為液體的醚中，然后加入NaH室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后加入化合物3，反應(yīng)2小時(shí)，TLC顯示原料消失后，向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯和飽和食鹽水，分層后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮至干，剩余物柱層析純化得黃色固體化合物6；
步驟四：
將化合物6和5％Pd/C加入1-3個(gè)碳的醇中，通氫氣進(jìn)行硝基還原反應(yīng)，反應(yīng)畢過濾，濾液減壓濃縮得化合物7；
步驟五：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物7和化合物8加入1-3個(gè)碳的醇中，加熱反應(yīng)，反應(yīng)畢，
減壓濃縮至干，剩余物柱層析純化得化合物Ⅰ。
一種制備上述式Ⅰ化合物的鹽方法為將化合物Ⅰ溶于1-3個(gè)碳的常溫為液態(tài)的鹵代烷中，相應(yīng)的酸溶于8個(gè)碳以內(nèi)的常溫下為液體的醚或醇中，混合后調(diào)節(jié)PH值為酸性，室溫?cái)嚢璋胄r(shí)后過濾，即可得到化合物Ⅰ的鹽。
一種制備上述雜原子為N的式Ⅰ化合物酸鹽的方法：
步驟一：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物1加入8個(gè)碳以內(nèi)的常溫下為液體的醚中，然后降溫至0℃以下，向其中滴加正丁基鋰，反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)液中滴加溴，滴加完成后升至室溫，攪拌半小時(shí)后向其中加入鹽酸溶液，分層，水相用常溫下為液體的有機(jī)醚類溶劑萃取后棄去，合并有機(jī)相，過濾后濃縮至干，得黃色油狀物化合物2；
步驟二：
將化合物2加入裝置中，冷至0℃以下，將提前配好的混酸(濃硫酸：發(fā)煙硝酸的體積比為55：36)滴加入反應(yīng)瓶中，TLC顯示原料消失后冷至室溫，反應(yīng)液傾入碎冰中，有黃色固體析出，過濾，濾餅用水洗滌至中性，干燥，得化合物3粗品，所得粗品柱層析純化后得白色固體化合物3；
步驟三：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物4加入8個(gè)碳以內(nèi)的常溫下為液體的醚中，然后加入NaH室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后加入化合物3，反應(yīng)2小時(shí)，TLC顯示原料消失后，向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯和飽和食鹽水，分層后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮至干，剩余物柱層析純化得黃色固體化合物6；
步驟四：
將化合物6和5％Pd/C加入1-3個(gè)碳的醇中，通氫氣進(jìn)行硝基還原反應(yīng)，反
應(yīng)畢過濾，濾液減壓濃縮得化合物7；
步驟五：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物7和化合物8加入1-3個(gè)碳的醇中，加熱反應(yīng)，反應(yīng)畢，減壓濃縮至干，剩余物柱層析純化得化合物9；
步驟六：制備化合物Ⅰ的鹽酸鹽
化合物9→化合物Ⅰ的鹽酸鹽
將化合物9加入1-3個(gè)碳的常溫液態(tài)鹵代烷中攪拌，然后加入鹽酸/5個(gè)碳以內(nèi)的醚，調(diào)節(jié)PH值為酸性，攪拌反應(yīng)半小時(shí)，過濾，得化合物Ⅰ的鹽。
上述藥物組合物，所述活性成分的微粉化方法采用噴霧干燥法，流化床超音速氣流粉碎法，高速研磨法、球磨法、流能磨法或溶劑法。
應(yīng)當(dāng)理解，因?yàn)楣脑?，如活性成分在吸入裝置中的潴留，患者吸入的每種活性成分的量可以不同于計(jì)量的量。因此活性成分之間的施用比例可不同于計(jì)量的比例。優(yōu)選的施用的比例是在所述的指明的計(jì)量比例內(nèi)。
本發(fā)明中的粒徑如無特指均為D90質(zhì)量平均粒徑(mass mean diameter)，該粒徑是通過激光粒度儀檢測一個(gè)樣品的累計(jì)粒度分布百分?jǐn)?shù)達(dá)到90％時(shí)所對應(yīng)的粒徑。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明微粉化可以使用公知的機(jī)械粉碎法或噴霧干燥法。機(jī)械粉碎法是指利用流能磨的方法分別將活性成分和載體粉碎成所需要的粒徑。噴霧干燥法是指將環(huán)索奈德或載體全溶于有機(jī)溶媒如乙醇中，經(jīng)過噴霧干燥器，將固體物料制成所需要的粒徑。使用噴霧干燥法時(shí)還可以加入表面活性劑如泊洛沙姆等。
膠囊型干粉吸入劑可以采用3號植物膠囊(中美合資蘇州膠囊有限公司生產(chǎn)，商品名：Vcaps)，每個(gè)實(shí)施例按照1000粒膠囊投料。粉霧劑的膠囊裝入泡罩式鋁塑包裝，使用時(shí)取出，裝入粉霧劑吸入器(上海天平制藥廠)使用。
復(fù)方藥物的混合方法：取量小的藥物與等量的量大的藥物，同時(shí)置于混合器中混合，再加入與混合物等量的量大藥物稀釋均勻，如此倍量增加至加完全部量大組分為止，混勻，每次混合的時(shí)間為10分鐘。
藥物與輔料混合的方法(等量遞增法)：取藥物與等量的輔料組分，同時(shí)置 于混合器中混合，再加入與混合物等量的輔料組分稀釋均勻，如此倍量增加至加完全部輔料組分為止，混勻，每次混合的時(shí)間為10分鐘。
混合機(jī)械采用FGD固定料斗混合機(jī)(上海天九機(jī)械制造廠)。
具體實(shí)施方式：
本發(fā)明中柱層析方法：
層析柱的長度最少70cm，內(nèi)部裝填254-硅膠，并將需要分離的有機(jī)物全溶于最少量的氯仿：甲醇＝1：1中，用最少量254-硅膠將該溶液吸收后置于層析柱內(nèi)硅膠的上部，使用流動(dòng)相洗脫，層析柱下用若干個(gè)10ml試管接經(jīng)過柱層析得到的溶液，控制流速為10ml/3min，將每個(gè)試管的溶液用HPLC進(jìn)行分析，將保留時(shí)間相同的試管溶液合并，取主點(diǎn)的化合物進(jìn)行重結(jié)晶，得到相應(yīng)的產(chǎn)物。
確定主點(diǎn)的方法：將需要分離的有機(jī)物用HPLC進(jìn)行分析，除原料點(diǎn)外峰面積最大的點(diǎn)確定為主點(diǎn)，其保留時(shí)間為主點(diǎn)的保留時(shí)間。
本發(fā)明中手性柱分離相應(yīng)的手性化合物柱的方法：
采用CHIRALPAK AS-H粒徑5u 4.6mm(id)X 250mm分析柱，
流動(dòng)相：正己烷：異丙醇：乙二胺＝90:9:0.1，
檢測波長：紫外300納米，
柱溫：25℃
流速：1.0ml/min
將實(shí)施例中的RS化合物分離出R或S的手性化合物。
13C，400MHz，DMSO-d6，1位至13位碳的δ數(shù)值:
實(shí)施例1-1至1-22中的R見上表。
實(shí)施例1-1化合物Ⅰ的
步驟一：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物1(20g，0.235mol)加入干燥的100ml乙醚中攪拌溶解，然后降溫至0℃以下，向其中滴加正丁基鋰(0.24mol)，滴加過程中保持在0℃以下，滴加完成后保溫反應(yīng)直至無化合物1。
向反應(yīng)液中滴加溴素(0.5mol)，滴加過程中保持在0℃以下，滴加完成后緩慢升至室溫，攪拌半小時(shí)后向其中加入鹽酸溶液(2N，500ml)淬滅反應(yīng)。
分層，水相用乙醚(200ml*3)萃取后棄去，合并有機(jī)相，連二亞硫酸鈉溶液洗滌(100ml*2)、無水硫酸鈉干燥、過濾后濃縮至干，得黃色油狀物化合物2。
本步驟中乙醚還可以用甲乙醚、二甲醚、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)等溶劑代替。
步驟二：
將1mol化合物2加入裝置中，冷至0℃以下。將提前配好的混酸(濃硫酸：發(fā)煙硝酸的體積比為55：36)緩慢滴加入反應(yīng)瓶中，TLC顯示原料消失后冷至室溫，反應(yīng)液傾入碎冰中，有黃色固體析出。過濾，濾餅用水洗滌至中性，干燥，得化合物3粗品。所得粗品柱層析(乙酸乙酯/正己烷＝1/20-1/10)純化后得白色固體化合物3。
步驟三：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將1mol化合物4加入乙醚中，然后加入1.1molNaH室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后加入化合物3(0.8mmol)，反應(yīng)至TLC顯示原料消失后，向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯和飽和食鹽水，分層后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮至干，剩余物柱層析(乙酸乙酯/正己烷＝1/10-1/5)純化得黃色固體化合物6。
本步驟中乙醚還可以用甲乙醚、二甲醚、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)等溶劑代替。
步驟四：
將1mol化合物6和60g5％Pd/C加入甲醇中，通氫氣進(jìn)行硝基還原反應(yīng)，反應(yīng)至無原料點(diǎn)，反應(yīng)畢過濾，濾液減壓濃縮得化合物7。
本步驟中甲醇還可以用乙醇、丙醇等溶劑代替。
步驟五：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將1.3mol化合物7和1mol化合物8加入500ml甲醇中，加熱反應(yīng)，反應(yīng)畢，減壓濃縮至干。剩余物柱層析(乙酸乙酯/正己烷＝1/5-1/2)純化得化合物9。
本步驟中甲醇還可以用乙醇、丙醇等溶劑代替。
步驟六：
將1mol化合物9加入氯仿中攪拌，然后加入2N HCl/二氧六環(huán)，攪拌反應(yīng)半小時(shí)，三乙胺調(diào)節(jié)pH>7后過濾，用氯仿洗滌后烘干，得化合物Ⅰ。
本步驟中氯仿還可以用二氯甲烷、1，2-二氯乙烷等溶劑代替。
通過溶解加入鹽酸的常規(guī)方法，得到實(shí)施例1-1至1-22的復(fù)合鹽酸鹽，具體方法如下：
將0.1mol化合物9加入甲醇中，然后加入37％HCl中，混合后調(diào)節(jié)PH值為5-6，攪拌反應(yīng)0.5小時(shí)后過濾，濾餅用甲醇洗滌后烘干，得化合物Ⅰ的復(fù)合鹽酸鹽。
本步驟中甲醇還可以用乙醇、甲乙醚、二甲醚、四氫呋喃、乙醚等溶劑代替。
用上述的制備方法得到的物質(zhì)通過元素分析發(fā)現(xiàn)，物質(zhì)中化合物1-1至1-22與鹽酸鹽的摩爾比為1.42-1.71，發(fā)現(xiàn)存在化合物1-1至1-22的單鹽酸鹽和二鹽酸鹽兩種物質(zhì)，即得到的應(yīng)當(dāng)是化合物1-1至1-22的單鹽酸鹽、雙鹽酸鹽的復(fù)合鹽酸鹽。同時(shí)即使將化合物1-1至1-22與鹽酸按照等摩爾反應(yīng)，也會(huì)得到復(fù)合鹽酸鹽，僅是相應(yīng)的收率會(huì)下降?；衔?-1至1-22的復(fù)合鹽酸鹽進(jìn)行元素分析，所以形成的是復(fù)合鹽酸鹽，即由單鹽酸鹽和二鹽酸鹽兩種物質(zhì)組成。
為了更好地獲得化合物Ⅰ的單鹽酸鹽，通過反復(fù)研究，以下方法可以直接得到相應(yīng)的單鹽酸鹽，并通過元素分析得到了驗(yàn)證。
實(shí)施例1-1鹽酸鹽的制備方法-1
0.1mol化合物Ⅰ溶于氯仿中，然后加入2N HCl/1,4-二氧六環(huán)中，并將PH調(diào)節(jié)為低于5-6后，減壓濃縮，過濾，得到化合物Ⅰ的鹽酸鹽。。通過元素分析中氯元素的數(shù)據(jù)，得出化合物Ⅰ與鹽酸的摩爾比為1.02.，說明該反應(yīng)得到化合物Ⅰ的鹽酸鹽。
本步驟中1,4-二氧六環(huán)還可以用甲乙醚、二甲醚、四氫呋喃、乙醚等溶劑代替。
實(shí)施例1-1鹽酸鹽的制備方法-2
將1mol化合物9加入二氯甲烷中溶解，然后加入2N HCl/1,4-二氧六環(huán)中，混合后調(diào)節(jié)PH值為5-6，攪拌反應(yīng)0.5小時(shí)后過濾，濾餅用甲醇洗滌后烘干，得 化合物Ⅰ的鹽酸鹽。通過元素分析中氯元素的數(shù)據(jù)，元素分析中化合物Ⅰ與鹽酸的摩爾比為1.03.，說明該反應(yīng)得到化合物Ⅰ的鹽酸鹽。
本步驟中1,4-二氧六環(huán)還可以用甲乙醚、二甲醚、四氫呋喃、乙醚等溶劑代替。本步驟中氯仿還可以用二氯甲烷、1，2-二氯乙烷等溶劑代替。
實(shí)施例1-2至1-12
化合物1-2至1-12的制備方法同實(shí)施例1-1的制備方法。
實(shí)施例1-13的制備方法
實(shí)施例1-13化合物Ⅰ的
步驟一：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將化合物1(20g，0.235mol)加入干燥的100ml乙醚中攪拌溶解，然后降溫至0℃以下，向其中滴加正丁基鋰(0.24mol)，滴加過程中保持在0℃以下，滴加完成后保溫反應(yīng)直至無化合物1。
向反應(yīng)液中滴加溴素(0.5mol)，滴加過程中保持在0℃以下，滴加完成后緩慢升至室溫，攪拌半小時(shí)后向其中加入鹽酸溶液(2N，500ml)淬滅反應(yīng)。
分層，水相用乙醚(200ml*3)萃取后棄去，合并有機(jī)相，連二亞硫酸鈉溶液洗滌(100ml*2)、無水硫酸鈉干燥、過濾后濃縮至干，得黃色油狀物化合物2。
本步驟中乙醚還可以用甲乙醚、二甲醚、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)等溶劑代替。
步驟二：
將1mol化合物2加入裝置中，冷至0℃以下。將提前配好的混酸(濃硫酸：發(fā)煙硝酸的體積比為55：36)緩慢滴加入反應(yīng)瓶中，TLC顯示原料消失后冷至室溫，反應(yīng)液傾入碎冰中，有黃色固體析出。過濾，濾餅用水洗滌至中性，干燥，得化合物3粗品。所得粗品柱層析(乙酸乙酯/正己烷＝1/20-1/10)純化后得白色固體化合物3。
步驟三：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將1mol化合物4加入乙醚中，然后加入1.1molNaH室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后加入化合物3(0.8mmol)，反應(yīng)至TLC顯示原料消失后，向反應(yīng)液中加入乙酸乙酯和飽和食鹽水，分層后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮至干，剩余物柱層析(乙酸乙酯/正己烷＝1/10-1/5)純化得黃色固體化合物6。
本步驟中乙醚還可以用甲乙醚、二甲醚、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)等溶劑代替。
步驟四：
將1mol化合物6和60g5％Pd/C加入甲醇中，通氫氣進(jìn)行硝基還原反應(yīng)，反應(yīng)至無原料點(diǎn)，反應(yīng)畢過濾，濾液減壓濃縮得化合物7。
本步驟中甲醇還可以用乙醇、丙醇等溶劑代替。
步驟五：
氮?dú)獗Ｗo(hù)下將1.3mol化合物7和1mol化合物8加入500ml甲醇中，加熱反應(yīng)，反應(yīng)畢，減壓濃縮至干。剩余物柱層析(乙酸乙酯/正己烷＝1/7-1/3)純化得化合物Ⅰ。
本步驟中甲醇還可以用乙醇、丙醇等溶劑代替。
實(shí)施例1-14至1-22
化合物1-14至1-22的制備方法同實(shí)施例1-13的制備方法
實(shí)施例1-2至1-22的鹽酸鹽
化合物1-2至1-22鹽酸鹽的制備方法同實(shí)施例1-1鹽酸鹽的制備方法
在上述得到單鹽酸鹽和復(fù)合鹽酸鹽的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，得到的復(fù)合鹽酸鹽在常溫中存放1小時(shí)后，表面存在類似于融化的狀態(tài)，而單鹽酸鹽則不存在類似情況。鑒于化合物1-1至1-22的單鹽酸鹽和復(fù)合鹽酸鹽進(jìn)行引濕性試驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：
化合物1-1至1-22的單鹽酸鹽和復(fù)合鹽酸鹽引濕性試驗(yàn)：
將含水量低于0.5％的化合物1-1至1-22的單鹽酸鹽和復(fù)合鹽酸鹽各10g平鋪3cmX3cm的玻璃盤中，放在常溫高濕條件下儲(chǔ)存，存儲(chǔ)條件為相對濕度75％±5％，4小時(shí)后測定重量，并以此重量/10g-1，得出相對增重比例，說明鹽的引濕性結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
通過實(shí)驗(yàn)證明，化合物1-1至1-22的單鹽酸鹽的引濕性明顯好于復(fù)合鹽酸鹽。
由于原料藥工業(yè)化生產(chǎn)和存儲(chǔ)過程中，較大的引濕性會(huì)造成化合物表面對于空氣中的水進(jìn)行吸附，會(huì)造成化合物表面出現(xiàn)溶解，從而使化合物粘連，影響化合物的物理穩(wěn)定性，不利于制劑使用。
實(shí)施例1-2至1-22其他的鹽的制備方法
化合物1-1至1-22的其他鹽的制備方法同實(shí)施例1-1的鹽酸鹽制備方法-1或2的方法。
上述鹽均通過元素分析進(jìn)行驗(yàn)證，
實(shí)施例1-1至1-22中的R見上表。
實(shí)施例2-1至2-22：吸入劑
將活性成分分別粉碎，粒徑見下表，粉碎后的藥物鹽酸鹽分別與輔料按照上述方法混合后按照活性成分400μg/粒裝入植物膠囊中。
實(shí)施例3：吸入劑
將活性成分分別粉碎，粒徑見下表，粉碎后的藥物分別與輔料按照上述方法混合后按照活性成分400μg/粒裝入植物膠囊中。
實(shí)施例4-1至4-22：吸入粉霧劑膠囊
活性成分：實(shí)施例1-1至1-222g(D50粒徑5μm)
輔料：
乳糖：180g
用細(xì)碎的乳糖將活性成分稀釋混合成200g的藥物組合物，裝入4號硬膠囊中，200mg/粒。
實(shí)施例5-1至5-22：吸入粉霧劑膠囊
活性成分：活性成分：2g(D50粒徑5μm)
乳糖：198g
用細(xì)碎的乳糖將活性成分稀釋混合成200g的藥物組合物，裝入4號硬膠囊中，200mg/粒。
藥理實(shí)施例1：體外實(shí)驗(yàn)
采用生長因子誘導(dǎo)的雞胚絨毛尿囊膜(CAM)血管增生模型觀察式Ⅰ化合物對血管增生的影響，了解式Ⅰ化合物對血管生成的作用。
實(shí)驗(yàn)材料：受精3日齡雞胚、玻璃纖維濾紙
血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)Chem1con公司產(chǎn)品
將實(shí)施例1-13所制成的化合物先用DMSO溶解，再用PBS稀釋至所需要的濃度(DMSO濃度<0.1％)
實(shí)驗(yàn)方法
1.CAM模型的建立：
75％乙醇清洗雞胚卵殼于超凈臺中吹干，水平放置5min后，在100mm培養(yǎng)皿邊緣小心將卵殼敲碎，卵內(nèi)容物置于培養(yǎng)皿中(培養(yǎng)皿中預(yù)先加有10ml DMEM培養(yǎng)基)。將此培養(yǎng)皿放入150mm大培養(yǎng)皿中(大培養(yǎng)皿中加少許水)，蓋上皿蓋， 置于37℃、5％CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2.對CAM血管增生的影響
用打孔機(jī)將玻璃纖維濾紙制成直徑3mm的小圓片，濕熱滅菌,將試劑各10μl滴于玻璃纖維濾紙上，制成藥膜，吹干備用。雞胚培養(yǎng)3d后，隨機(jī)分組，每組10個(gè)，將實(shí)施例1-1至1-12所得的化合物設(shè)為12個(gè)給藥組(1g/L)，同時(shí)給予生長因子(2μg/L)，以及生長因子(VEGF)單獨(dú)刺激組(陽性對照組)和PBS(磷酸鹽緩沖液，pH 7.4)刺激組(陰性對照組)。將藥膜貼于CAM和卵黃囊膜(yolk sacmembrane，YSM)外2/3處血管較少的部位。加藥48h后，顯微鏡下觀察，計(jì)數(shù)藥膜周圍5mm內(nèi)大、中、小血管數(shù)。
表1 對CAM血管增生的影響表(n＝10)
注：統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)以表示.組間比較應(yīng)用t檢驗(yàn)
3.結(jié)果
1式Ⅰ化合物對VEGF誘導(dǎo)的CAM
血管增生的影響結(jié)果見表1，PBS組血管生長良好.VEGF組小血管增生明顯，式Ⅰ化合物的各組血管增生明顯受到抑制.小血管顯著減少，基本回到正常水平。
CAM是經(jīng)典的血管生成評價(jià)模型，具有方法簡便、易觀察、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn).是目前最常用的在體模型。VEGF是重要的促血管生成因子，能刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增生和遷移，促進(jìn)血管生成，且在多種腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)過度表達(dá)。本研究表明：式Ⅰ化合物抑制VEGF誘導(dǎo)的CAM血管增生，表明式Ⅰ化合物具有抑制VEGF的促血管生成作用。
式Ⅰ化合物對血管生成有抑制作用，進(jìn)一步證實(shí)了具有抑制腫瘤血管生成的潛力。
尤其是通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明，化合物中含有氮雜環(huán)的化合物與含氧或硫雜環(huán)的化合物相比，抑制VEGF的促血管生成作用相對較低。
而化合物與相應(yīng)的鹽相比其療效明顯較低，證明化合物相應(yīng)的鹽藥理作用更好，同時(shí)鹽酸鹽效果更好。
藥理實(shí)施例2：體內(nèi)抗肺癌實(shí)驗(yàn)
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及瘤株
實(shí)驗(yàn)選用中國大耳白兔，體重2.5±0.1Kg，分組，每組2只。
2.肺癌模型制備方法
根據(jù)文獻(xiàn)《兔VX2肺癌模型的建立及MR觀察》(包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013年 第29卷第2期，7-9頁)中的方法制備兔VX2肺癌模型。
3.治療及分組：按下列表格給與藥物
活性成分按照實(shí)施例4的處方和制備方法制備吸入制劑，試驗(yàn)分組情況表
注：實(shí)施例試驗(yàn)組中給藥量按活性成分計(jì)。
4.給藥方式
每天在5升左右的玻璃罩中進(jìn)行給藥，實(shí)驗(yàn)組是將的藥物裝入吸入裝置中按照吸入途徑同時(shí)給予藥物，對照組按照吸入途徑給予平均粒徑為55μm的無水乳糖，
劑量為5mg/Kg，
5.模型動(dòng)物生存情況平均生存情況比較結(jié)果
表2 吸入制劑對肺癌的抑制作用
5結(jié)論
通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，式Ⅰ化合物與其生理上的鹽能夠提高試驗(yàn)肺癌動(dòng)物的生存時(shí)間，但原型藥物與其生理上的鹽提高時(shí)間的存在明顯的差別。同時(shí)通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明，化合物中含有氮雜環(huán)的化合物與含氧或硫雜環(huán)的化合物相比，抑制腫瘤生長作用相對較低。而在含氮雜環(huán)的化合物中1-1、1-3、1-5、1-6、1-8的藥理作用好于其他。
藥理實(shí)施例3哮喘藥理實(shí)驗(yàn)
1、動(dòng)物模型
選取健康雄性Wistar大鼠(對檢查出存在細(xì)菌、細(xì)菌感染的大鼠不予選用)，體重為200±10g，放入5升左右的玻璃罩中，以400mmHg的壓力噴入3％氯化乙酞膽堿和0.1％磷酸組織胺容積混合液15秒鐘。噴霧停止后，觀察大鼠的引喘潛伏期(即發(fā)生哮喘、呼吸極度困難，直至抽搐跌倒的時(shí)間)，引喘潛期小于70秒或大于120秒的大鼠不予選用。
2、實(shí)驗(yàn)方法
取經(jīng)測定引喘潛伏期合格的大鼠，按照下表中的組別進(jìn)行隨機(jī)分組，每組10只，每天在5升左右的玻璃罩中進(jìn)行給藥，實(shí)驗(yàn)組是將實(shí)施例5-1至5-48中的藥物裝入吸入裝置中按照吸入途徑同時(shí)給予藥物，給藥劑量為500μg/kg，模型組1按照吸入途徑給予平均粒徑為55μm的無水乳糖，劑量為5mg/Kg，給藥的第10天當(dāng)給予全部藥物后1.5小時(shí)后噴霧給予0.3％二鹽酸組織胺，觀察給藥物前后引喘潛伏期及抽搐發(fā)生率的變化(引喘時(shí)動(dòng)物6分鐘內(nèi)不出現(xiàn)跌倒者以引喘伏期為360秒計(jì)算)。
3、實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果：動(dòng)物發(fā)生哮喘、直至抽搐跌倒的時(shí)間見下表。
本實(shí)施例內(nèi)有多個(gè)表格均為本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，為了便于說明問題，將實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了分割。
表1-1 實(shí)施例實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n＝10，mean±SD)
通過藥理實(shí)施例3體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，式Ⅰ化合物的鹽能夠提高動(dòng)物引喘潛伏期時(shí)間，實(shí)施例組的引喘潛伏期和模型組的引喘潛伏期相比，兩者差距明顯，所以說明式Ⅰ化合物的鹽通過抑制新生血管生成，具有治療哮喘、慢性阻塞性肺炎等呼吸道炎癥疾病的作用。
尤其是通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明，式Ⅰ化合物的鹽中含有氮雜環(huán)的化合物與含氧或硫雜環(huán)的化合物相比，提高動(dòng)物引喘潛伏期時(shí)間相對較高，療效明顯好；而在含氮雜環(huán)的化合物中5-1、5-4、5-7、5-9、5-10、5-11、5-12藥理作用好于其他。
通過藥理實(shí)施例1、2、3中的數(shù)據(jù)可以證明，式Ⅰ化合物的鹽對血管新生和VEGF具有抑制作用，可以治療或預(yù)防與此有關(guān)的疾病，能夠抑制腫瘤的生長與增殖，提高引喘潛伏期等。
同時(shí)化合物的鹽酸鹽治療哮喘的效果好于其他鹽。