本文所用，所述的miR-144的抑制劑包括了拮抗劑、下調(diào)劑、阻滯劑、阻斷劑等。 任何可降低miR-144的活性、降低miR-144的穩(wěn)定性、抑制miR-144的表達(dá)、減少miR-144 的有效作用時間、或抑制miR-144的轉(zhuǎn)錄和加工的物質(zhì)均可用于本發(fā)明，作為可用于預(yù)防 或治療心臟疾病的有效物質(zhì)。所述的miR-144的抑制劑也可以是經(jīng)過修飾的形式。
[0028] 在得知了 miR-144對于心肌氧化應(yīng)激的作用后，本領(lǐng)域人員可以方便地得知可以 通過miR-144抑制劑來防治心肌損傷疾病的發(fā)生或發(fā)展。因此，任何miR-144的抑制劑都 可用于本發(fā)明。根據(jù)miR-144的特性，本領(lǐng)域人員可以獲得多種miR-144的抑制劑。
[0029] 本發(fā)明通過構(gòu)建小鼠糖尿病心肌損傷模型，進行心肌組織中microRNAs表達(dá)的 分析，其中 miR-199a、miR-101、miR-499 等表達(dá)顯著降低，而 miR-144、miR-21、miR-22、 miR-155、miR_15a、miR-125等表達(dá)顯著升高。此后，在25mM高糖誘導(dǎo)的心肌氧化應(yīng)激 損傷的細(xì)胞模型中進一步驗證上述表達(dá)差異較明顯的miRNA，發(fā)現(xiàn)miR-199a、miR-101、 miR-499 (表達(dá)減少），及miR-144、miR-155、miR-15a (表達(dá)增加）在動物和細(xì)胞模型中較對 照組表達(dá)均發(fā)生較大變化（>2倍）。
[0030] 基礎(chǔ)條件下和高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞經(jīng)miR-144mimic轉(zhuǎn)染后，提示心肌細(xì)胞氧化 應(yīng)激水平（R0S含量）增加。同樣方法檢測miR-199a、miR-101，因其在糖尿病心肌損傷模 型中表達(dá)下調(diào)，分別將miR-199a mimic、miR-101 mimic轉(zhuǎn)染至培養(yǎng)的心肌，對照及高糖 刺激下檢測細(xì)胞氧化應(yīng)激水平，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)ROS發(fā)生明顯變化。另外研宄表明，miR-155、 miR-15a等主要存在于心肌成纖維細(xì)胞中，并非在心肌細(xì)胞中，所以，只有miR-144在心肌 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中表達(dá)顯著升高并能影響氧化應(yīng)激水平，同時具備心肌細(xì)胞表達(dá)相對特 異性。
[0031] 本發(fā)明人分離了正常小鼠心臟的心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，通過定量PCR方法證 實，miR-144主要在心肌細(xì)胞檢測到，而在成纖維細(xì)胞表達(dá)量較低，具體有心肌細(xì)胞表達(dá)相 對特異性。
[0032] 本發(fā)明進一步探討miR-144在整個心肌氧化應(yīng)激進程中的異常表達(dá)，探索其可能 的病理意義，發(fā)現(xiàn)miR-144可能在糖尿病心肌損傷的發(fā)生過程起重要功能。
[0033] 本發(fā)明又通過miR-144過表達(dá)、miR-144沉默，觀察高糖環(huán)境下心肌細(xì)胞氧化應(yīng) 激水平。發(fā)現(xiàn)，在心肌細(xì)胞中過表達(dá)miR-144水平：基礎(chǔ)條件下和高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞經(jīng) miR-144 mimic轉(zhuǎn)染后，提示心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激水平增加。而在培養(yǎng)的心肌細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染 miR-144的反義RNA 48h后，結(jié)果表明：與對照組相比，心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平受到明顯 抑制。
[0034] 本發(fā)明的第三方面，還提供了 miR-144在制備診斷心肌氧化應(yīng)激及損傷疾病試劑 或試劑盒中的應(yīng)用。
[0035] 所述的試劑，為檢測miR-144有效量的試劑。
[0036] 所述的試劑盒，包含檢測miR-144有效量的試劑。
[0037] 所述的試劑盒，其包含：（i)檢測miR-144有效量的的一種或多種試劑；（ii)選自 下組的一種或多種物質(zhì)：容器、使用說明書、陽性對照物、陰性對照物、緩沖劑、助劑或溶劑， 例如用于混懸或固定細(xì)胞的溶液，可檢測的標(biāo)簽或標(biāo)記，使核酸易于雜交的溶液，用于裂解 細(xì)胞的溶液，或用于核酸純化的溶液。
[0038] 本發(fā)明通過在心肌細(xì)胞中過表達(dá)和抑制mir-144表明，mir-144可促進心肌氧化 應(yīng)激。進一步分析證實，過表達(dá)mir-144可抑制Nrf2的mRNA表達(dá)，而后者在高糖刺激的心 肌氧化應(yīng)激中具有重要保護作用；生物信息學(xué)及報告基因結(jié)果提示Nrf2為mir-144的潛在 靶基因，提示mir-144正常表達(dá)或表達(dá)受抑制可能具有高糖環(huán)境下獨特的心肌保護作用。 此外，在動物模型中，血漿mir-144隨著心肌損傷加重和糖尿病心功能逐漸減退，其水平逐 漸升高，提示血漿mir-144水平可能作為早期識別糖尿病心肌損傷的重要標(biāo)記物。為盡早 治療和延緩心肌損傷提供了診斷依據(jù)和作用靶點。
[0039] 在本發(fā)明的優(yōu)選例中，所述的藥物為藥物組合物，所述的藥物組合物含有有效量 的所述的miR-144抑制劑，以及藥學(xué)上可接受的載體。
[0040] 所述"藥學(xué)上可接受的"的成分是適用于人和/或動物而無過度不良副反應(yīng)（如 毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng)）的，即有合理的效益/風(fēng)險比的物質(zhì)。
[0041] 所述"有效量"是指可對人和/或動物產(chǎn)生功能或活性的且可被人和/或動物所 接受的量。
[0042] 所述"藥學(xué)上可接受的載體"指用于治療劑給藥的載體，包括各種賦形劑和稀釋 劑。該術(shù)語指這樣一些藥劑載體：它們本身并不是必要的活性成分，且施用后沒有過分的 毒性。合適的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。在Remington' s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub. Co.，N. J. 1991)中可找到關(guān)于藥學(xué)上可接受的賦形劑的充分討論。在 組合物中藥學(xué)上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這些載體中還可 能存在輔助性的物質(zhì)，如填充劑、潤滑劑、助流劑、潤濕劑或乳化劑、PH緩沖物質(zhì)等。
[0043] 本發(fā)明的miR-144抑制劑的有效量可隨給藥的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度 等而變化。優(yōu)選的有效量的選擇可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)各種因素來確定（例如通 過臨床試驗）。所述的因素包括但不限于：miR-144抑制劑的藥代動力學(xué)參數(shù)例如生物利 用率、代謝、半衰期等；患者所要治療的疾病、患者的體重、患者的免疫狀況、給藥的途徑等。 通常，當(dāng)本發(fā)明的miR-144抑制劑每天以約0. 001-100mg/kg(優(yōu)選的為0. 01-20mg/kg)動 物體重的劑量給予時，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以2-4次分開的劑量給予，或以 緩釋形式給藥。對大部分大型哺乳動物而言，每天的總劑量約為0. 005-100mg，較佳地約為 0.008-50mg?？烧{(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每 天給予若干次分開的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。
[0044] 任何適用的給藥途徑都是可以的，包括但不限于：口服、靜脈內(nèi)注射、皮下注射、肌 肉給予、局部給予、植入、緩釋給予、心臟內(nèi)給予等；優(yōu)選的，所述給藥方式是非腸道給予的。
[0045] 本發(fā)明的第四方面，提供一種篩選預(yù)防或治療心肌氧化應(yīng)激損傷的潛在物質(zhì)的方 法，所述方法包括：
[0046] (1)用候選物質(zhì)處理表達(dá)miR-144的體系；
[0047] (2)檢測所述體系中miR-144的表達(dá)或活性；
[0048] 其中，若所述候選物質(zhì)可降低miR-144的表達(dá)或活性，則表明該候選物質(zhì)是預(yù)防 或治療心臟疾病的潛在物質(zhì)。
[0049] 在一個優(yōu)選例中，步驟（1)包括：在測試組中，將候選物質(zhì)加入到抑制miR-144的 體系中；和/或
[0050] 步驟（2)包括：檢測測試組的體系中miR-144的表達(dá)或活性，并與對照組比較，其 中所述的對照組是不添加所述候選物質(zhì)的抑制miR-144的體系；
[0051] 如果測試組中miR-144的表達(dá)或活性在統(tǒng)計學(xué)上低于（優(yōu)選顯著低于，如低20% 以上，較佳的低50%以上；更佳的低80%以上）對照組，就表明該候選物是預(yù)防或治療心肌 氧化應(yīng)激損傷的潛在物質(zhì)。
[0052] 所述的體系包括但不限于：溶液體系、亞細(xì)胞體系、細(xì)胞體系、組織體系、器官體 系、或動物體系。
[0053] 在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括：對獲得的潛在物質(zhì)進行進一步的細(xì)胞實驗 和/或動物試驗，以從候選物質(zhì)中進一步選擇和確定對于預(yù)防或治療心肌氧化應(yīng)激損傷有 用的物質(zhì)。
[0054] 另一方面，本發(fā)明采用所述篩選方法獲得的可用于預(yù)防或治療心肌損傷疾病的潛 在物質(zhì)，這些初步篩選出的物質(zhì)可構(gòu)成一個篩選庫，以便于人們最終可以從中篩選出真正 有用的物質(zhì)。
[0055] 本發(fā)明的其它方面由于本文