一種組合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種組合物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人們生活水平的提高，抗皺已成為越來越多人的需求。脂肪組織在抗皺方面 的應(yīng)用歷史悠久。脂肪組織被認為是一個具有儲存脂肪、內(nèi)分泌、軟組織充填功能的器官， 但在美容領(lǐng)域求美者經(jīng)常會要求施行抽脂術(shù)去除多余脂肪。自從脂肪組織被認為是成人干 細胞很有前景的來源之后，脂肪組織開始引起科研人員的關(guān)注，關(guān)于脂肪組織的研宄也逐 漸多了起來。脂肪組織主要由脂肪細胞、ASCs、血管內(nèi)皮細胞、周細胞、成纖維細胞、巨噬細 胞、和細胞外基質(zhì)等組成，其中ASCs是近年來的研宄熱點。
[0003] 20世紀初，自體顆粒脂肪移植開始應(yīng)用于臨床，由于其吸收率高、存活率低，且并 發(fā)癥較多，限制了其在臨床中的應(yīng)用。21世紀初，通過改進脂肪獲取技術(shù)，加速了脂肪血 管化，提高了脂肪顆粒移植的成活率。但是壞死、吸收仍然是顆粒脂肪移植的主要并發(fā)癥。 2003年，Kotaro等開始采用細胞輔助脂肪移植術(shù)（Cell-assisted lipotransfer, CAL),將 自體脂肪中新鮮分離的基質(zhì)血管組分（Stromal vascular fraction, SVF)與移植脂肪混 合，提高了移植脂肪中ASCs/脂肪細胞比例，取得了不錯的臨床效果，移植物存活率大約為 40%到 80%。
[0004] 目前的抗皺用品應(yīng)用時，修復(fù)效果有限，尤其是對較為明顯的皺紋，且維持抗皺效 果的時間亦較短。因此，提供一種抗皺效果顯著、維持抗皺效果時效久的抗皺產(chǎn)品具有重要 的現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明提供一種組合物及其應(yīng)用。該組合物將SVF、PRP二者聯(lián)合起來， 應(yīng)用于皮膚抗皺，取得了更優(yōu)的抗皺效果，抗皺效果維持的時間比兩者單獨應(yīng)用的時間更 長。從抗皺評分、抗皺時間來說，本發(fā)明提供的組合物與SVF、PRP兩者單獨使用均具有顯著 差異（P < 0? 05)。
[0006] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0007] 本發(fā)明提供了一種組合物，包括基質(zhì)血管組分和富含血小板血漿。
[0008] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述基質(zhì)血管組分和富含血小板血漿的質(zhì)量比 為 1:10 ~10:1〇
[0009] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述基質(zhì)血管組分包括間充質(zhì)干細胞、血管內(nèi) 皮細胞和血管平滑肌細胞。
[0010] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述基質(zhì)血管組分的制備方法為：獲得脂肪組 織，預(yù)處理后酶解。
[0011] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述酶解采用I型膠原酶；所述I型膠原酶的 酶活為50~200IU/mg ;所述酶解為20~40°C酶解10~60min。
[0012] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述基質(zhì)血管組分的制備方法包括如下步驟：
[0013] 步驟1 :獲得脂肪組織，與生理鹽水混合，400g離心10min ;
[0014] 步驟2 :取步驟1獲得的離心后脂肪組織，破碎，與I型膠原酶混合，于37°C，100R 酶解30min ;
[0015] 步驟3 :取步驟2酶解后的脂肪組織，800g離心10min ;離心后收集沉淀；
[0016] 步驟4 :收集步驟3離心后的上清液，800g離心10min ;離心后收集沉淀；與步驟3 所得沉淀混合，用生理鹽水重懸，800g離心5min，收集沉淀；
[0017] 步驟5 :重復(fù)步驟4至少1次；
[0018] 步驟6 :取步驟5獲得的沉淀與紅細胞裂解液（Miltenyi Biotec)混合，裂解 15min，800g離心5min，收集沉淀；
[0019] 步驟7 :取步驟6獲得的沉淀用生理鹽水重懸，過濾，800g離心5min，用生理鹽水 重懸。
[0020] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述基質(zhì)血管組分中間充質(zhì)干細胞表面抗原表 達率為31. 9%，血管內(nèi)皮細胞表面抗原表達率為2. 2%，血管平滑肌細胞表面抗原表達率 為 1. 5%〇
[0021] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述I型膠原酶與破碎后的脂肪組織的體積比 為1:1，所述I型膠原酶的濃度為0.01 %~10%，優(yōu)選I型膠原酶的濃度為0. 125%。
[0022] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述紅細胞裂解液與上述步驟5獲得的沉淀的 體積比為1:1，所述紅細胞裂解液的濃度為〇. 125 %。
[0023] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述富含血小板血漿的制備方法為：獲得臍帶 血，離心，獲得富含血小板血漿。
[0024] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述富含血小板血漿的制備方法為：獲得臍帶 血，與枸橡酸鈉抗凝劑混合，300g離心10min，收集血衆(zhòng)，1500g離心10min ;收集離心管底部 的血漿和血小板，重懸。
[0025] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述富含血小板血漿中血小板數(shù)量為 340. 49 X IO6~432. 67 X 106。
[0026] 本發(fā)明還提供了上述組合物在制備抗皺藥物或化妝品中的應(yīng)用。
[0027] 本發(fā)明提供了一種組合物，包括基質(zhì)血管組分和富含血小板血漿。將SVF、PRP二 者聯(lián)合起來，應(yīng)用于皮膚抗皺，取得了更優(yōu)的抗皺效果，抗皺效果維持的時間比兩者單獨應(yīng) 用的時間更長。從抗皺評分、抗皺時間來說，本發(fā)明提供的組合物與SVF、PRP兩者單獨使用 均具有顯著差異（P < 〇. 05)。
【附圖說明】
[0028] 為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。
[0029] 圖1示實施例1制得的SVF中間充質(zhì)干細胞表面抗原表達流式細胞儀檢測結(jié)果； 其中，圖I (A)、圖I (B)示空白同型對照組，圖I (C)、圖I (D)示樣品組；
[0030] 圖2示實施例1制得的SVF中血管內(nèi)皮細胞表面抗原表達流式細胞儀檢測結(jié)果； 其中，圖2 (A)、圖2 (B)示空白同型對照組，圖2 (C)、圖2 (D)示樣品組；
[0031] 圖3示實施例1制得的SVF中血管平滑肌細胞表面抗原表達流式細胞儀檢測結(jié) 果；其中，圖3 (A)、圖3 (B)示空白同型對照組，圖3 (C)、圖3 (D)示樣品組。
【具體實施方式】
[0032] 本發(fā)明公開了一種組合物及其應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改 進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯 而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進行了 描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進行 改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0033] 基質(zhì)血管組分（Stromal vascular fraction, SVF):脂肪組織或抽脂術(shù)后抽吸物 經(jīng)過膠原酶消化，脂肪細胞破裂，離心之后漂浮在上層的組織和油棄掉，沉淀在底層的細胞 成分叫SVF，包括基質(zhì)細胞、血管內(nèi)皮細胞、血管平滑肌細胞、周細胞以及大量血液循環(huán)來源 的細胞，比如白細胞、紅細胞等。
[0034] 富含血小板血漿（Platelet-rich plasma, PRP)是從血液中分離的含高濃度血小 板的血漿，具有迅速止血、止痛、加速傷口愈合的作用。
[0035] 本發(fā)明提供的一種組合物及其應(yīng)用所用原料及試劑均可由市場購得。