LT、大腸 桿菌ST和綠膿桿菌（銅綠假單胞菌，Pseudomonasaeruginosa)外毒素A。還可以使用細(xì) 菌外膜蛋白如外膜復(fù)合體C(OMPC)、孔蛋白、轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎球菌表面 蛋白A(PspA)、肺炎球菌粘附蛋白（PsaA)、組A或組B鏈球菌的C5a肽酶或流感嗜血桿菌 (Haemophilusinfluenzae)蛋白D。也可以將其它蛋白如卵清蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白（keyhole limpethemocyanin，KLH)、牛血清白蛋白（BSA)或純化的結(jié)核菌素的蛋白衍生物（PPD)用 作載體蛋白?？梢詫缀矶舅刈凅w如CRM173、CRM228、和0^45用作載體蛋白。
[0023] 為了制備用于與載體蛋白反應(yīng)的多糖，化學(xué)活化純化的多糖。一旦活化，將每種莢 膜多糖單獨(dú)結(jié)合至載體蛋白，以形成糖結(jié)合物（glycoconjugate)。在一個(gè)實(shí)施方式中，將 每種莢膜多糖結(jié)合至相同的載體蛋白。通過常規(guī)的方法（例如，美國專利號(hào)4, 673, 574和 4, 902, 506)實(shí)現(xiàn)多糖的化學(xué)活化和隨后結(jié)合至載體蛋白。通過氧化劑如高碘酸鹽（包括高 碘酸鈉、高碘酸鉀、高碘酸鈣或高碘酸）將多糖中的羥基基團(tuán)氧化為醛基團(tuán)?；瘜W(xué)活化導(dǎo)致 相鄰的羥基基團(tuán)的不規(guī)則氧化降解。通過還原氨化實(shí)現(xiàn)結(jié)合。例如，使活化的莢膜多糖和 載體蛋白與還原劑如氰基硼氫化鈉反應(yīng)。通過添加強(qiáng)氧化劑可以除去未反應(yīng)的醛基團(tuán)。
[0024] 在將莢膜多糖結(jié)合至載體蛋白之后，通過多種技術(shù)純化多糖-蛋白質(zhì)結(jié)合物（富 集多糖-蛋白質(zhì)結(jié)合物的量）。這些技術(shù)包括濃縮/滲濾（透析，dialfiltration)、柱色 譜法和深層過濾。混合純化的多糖-蛋白質(zhì)結(jié)合物以配制本發(fā)明的可被用作疫苗的免疫原 性組合物?？梢允褂帽绢I(lǐng)域公認(rèn)的方法實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的免疫原性組合物的配制。例如，可以 配制15種不同的肺炎球菌結(jié)合物與生理用載體來制備組合物。這種載體的實(shí)例包括但不 限于水、緩沖鹽水、多元醇（例如，丙三醇、丙二醇、液態(tài)聚乙二醇）和葡萄糖溶液。
[0025] 在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫原性組合物可以包含一種或多種佐劑。本文所 定義的"佐劑"是用于增強(qiáng)本發(fā)明的免疫原性組合物的免疫原性的物質(zhì)。因此，通常給出佐 劑以加強(qiáng)免疫應(yīng)答，并且佐劑是本技術(shù)領(lǐng)域熟知的。增強(qiáng)組合物的有效性的合適佐劑包括 但不限于：
[0026] (1)錯(cuò)鹽（錯(cuò)基鹽（alum))，如氣氧化錯(cuò)、憐酸錯(cuò)、硫酸錯(cuò)等；
[0027] (2)水包油乳液制劑（具有或不具有其他特定的免疫刺激劑如胞壁酰肽（以下定 義）或細(xì)菌細(xì)胞壁組分，如例如，（a)MF59 (W0 90/14837)，包含5%角鯊烯、0.5%吐溫80和 0. 5%斯盤85 (可選地包含不同量的MTP-PE(見下文），盡管不是所需的），使用微流化器如 型號(hào)IlOY微流化器（Microfluidics，Newton，MA)配制成亞微米顆粒；（b)SAF，包含10% 角鯊烯、0. 4%吐溫80、5%普朗尼克（pluronic)嵌段的聚合物L(fēng)121和thr-MDP(見下文）， 被微流化成亞微米乳劑或者被渦旋生成大顆粒尺寸的乳劑；和（c)Ribi?佐劑體系（RAS) (Corixa，Hamilton，MT)，包含2%角鯊烯、0. 2%吐溫80和來自由以下組成的組中的一種 或多種細(xì)菌細(xì)胞壁組分：美國專利號(hào)4, 912, 094中描述的3-0-脫?；膯瘟柞Ｖ珹(MPLtm) (Corixa)、海藻糖二霉菌酸酯（TDM)、和細(xì)胞壁骨架（CWS)，優(yōu)選MPL+CWS(Detox?);
[0028] (3)皂苷佐齊IJ、如QuilA或STMUL0N?QS-21 (Antigenics，F(xiàn)ramingham，MA)(美國 專利號(hào)5, 057, 540)或由其生成的顆粒如ISCOM(免疫刺激復(fù)合物）；
[0029] (4)細(xì)菌脂多糖，合成的脂A類似物如氨基烷基葡糖胺磷酸酯化合物（AGP)、或其 衍生物或類似物，其可以從Corixa得到，并且在美國專利號(hào)6, 113, 918中描述；一種這種 AGP是2- [ (R) -3-十四酰氧基十四?；被鵠乙基2-脫氧-4-0-磷?；?3-0- [ (R) -3-十四 酰氧基十四?；鵠-2-[(R)_3-十四酰氧基十四?；被鵠-b-D-吡喃葡萄糖苷，其也稱作 529 (以前稱作RC529)，其被配制為水性形式或穩(wěn)定的乳劑，
[0030] (5)合成的多核苷酸，如包含CpG基序的寡核苷酸（美國專利號(hào)6, 207, 646);
[0031] (6)細(xì)胞因子，如白介素（例如，IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15、 IL-18等）、干擾素（例如，Y干擾素）、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF)、巨噬細(xì) 胞集落刺激因子（M-CSF)、腫瘤壞死因子（TNF)、共刺激（協(xié)同刺激，costimulatory)分子 B7-1 和B7-2 等；
[0032] (7)細(xì)菌ADP-核糖基化毒素的脫毒突變體，如野生型或者突變型的霍亂毒 素（CT)，例如，其中氨基酸位置29的谷氨酸被另一氨基酸，優(yōu)選組氨酸替換（根據(jù)WO 00/18434(也見W002/098368和WO02/098369))，百日咳毒素（PT)、或者大腸桿菌不耐 熱毒素（LT)、具體是LT-K63、LT-R72、CT-S109、PT-K9/⑶9(見例如TO93/13302 和WO 92/19265);和
[0033] (8)補(bǔ)體（complement)成分，如補(bǔ)體成分C3d的三聚體。
[0034] 胞壁酰肽包括但不限于N-乙?；?胞壁酰基-L-蘇氨酰-D-異谷氨酰胺 (thr-MDP)、N-乙?；?去甲胞壁?；?L-丙氨酸-2- (1' -2'二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-羥 基磷?；趸?乙胺（MTP-PE)等。
[0035] 在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，將鋁鹽用作佐劑。鋁鹽佐劑可以是鋁鹽沉淀疫苗或鋁 鹽吸附疫苗。鋁鹽包括但不限于水合氧化鋁、三水合氧化鋁（ATH)、氫氧化鋁、三水合鋁、鋁 膠、31^6『；1；'〇8、纟11^110]_61、氫氧化錯(cuò)（111)、羥基磷酸錯(cuò)硫酸鹽（磷酸錯(cuò)佐劑（纟?纟)）、和無定 形氧化鋁。APA是羥基磷酸鋁的懸浮液。如果將氯化鋁和磷酸鈉以1:1的比值混合，則羥 基磷酸鋁硫酸鹽沉淀。通過使用高剪切混合器和用生理鹽水透析，隨后滅菌，使沉淀物的大 小為2-8ym。在一個(gè)實(shí)施方式中，將商業(yè)可獲得的Al(OH)3 (例如，鋁膠或Superfos)用于 吸附蛋白質(zhì)。每Img氫氧化鋁可以吸附50-200g蛋白質(zhì)，并且該比值依賴于蛋白的等電點(diǎn) (Pl)和溶劑的pH。相比高pi的蛋白，低pi的蛋白被強(qiáng)烈地吸附。鋁鹽形成在2至3周內(nèi) 緩慢釋放抗原的抗原儲(chǔ)存庫（depot)、非特異性活化吞噬細(xì)胞、補(bǔ)體和先天免疫機(jī)制。
[0036] 本發(fā)明提供了用于誘導(dǎo)對(duì)肺炎鏈球菌莢膜多糖結(jié)合物的免疫應(yīng)答的藥物組合物 (例如，疫苗制劑），該藥物組合物包含免疫學(xué)有效量的免疫原性組合物。
[0037] 通過經(jīng)由全身或粘膜途徑給予疫苗，本發(fā)明的疫苗制劑可以用于保護(hù)或治療易受 肺炎球菌感染的人體。本文定義的術(shù)語"有效劑量"是指將抗體誘導(dǎo)至足以顯著降低肺炎 鏈球菌感染的可能性或其嚴(yán)重性所需的量。這些給予可以包括通過肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)或皮 下途徑注射；或通過粘膜給藥至口腔/消化道、呼吸道或泌尿生殖道。在一個(gè)實(shí)施方式中， 由于可以更有效地防止鼻咽部攜帶的肺炎球菌，所以將鼻內(nèi)給藥用于治療肺炎或中耳炎， 從而在早期階段減弱感染。將每種疫苗劑量中的結(jié)合物的量選擇為誘導(dǎo)無顯著不利影響的 免疫保護(hù)性應(yīng)答的量。這種量可以根據(jù)肺炎球菌血清型變化。通常，每個(gè)劑量將包含0.1 至100yg多糖，具體地0. 1至10yg，以及更具體地1至5yg。可以通過涉及觀察受試者 適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答的標(biāo)準(zhǔn)研宄確定對(duì)于特定疫苗的組分的最佳量。例如，可以通過外推的動(dòng) 物測試結(jié)果確定用于人類受試者接種的量。此外，可以憑經(jīng)驗(yàn)確定劑量。
[0038] 在本發(fā)明的一個(gè)具體的實(shí)施方式中，疫苗組合物是單獨(dú)結(jié)合至CRM197的血清型1、 3、4、5、6八、68、7?、聽、14、18(：、194、19?和23?的肺炎球菌莢膜多糖的無菌液體制劑。將每 0. 5mL劑量配制為包含：除了在4yg的6B，2yg的每種糖；大約34ygCRM197載體蛋白； 0. 125mg元素鋁（0. 5mg磷酸鋁）佐劑；和作為賦形劑的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液。將該液 體填充至無防腐劑的單劑量注射器中。震蕩之后，該疫苗是即可用于肌內(nèi)給藥的均勻、白色 懸浮液。
[0039] 在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，可以以單次注射給予本發(fā)明的組合物。例如，可以以適當(dāng) 的時(shí)間間隔如1、2、3、4、5或6個(gè)月間隔或它們的組合給予2、3、4或更多次本發(fā)明的疫苗 組合物。免疫時(shí)間表可以遵循對(duì)于Prevnar疫苗指定的時(shí)間表。例如，嬰兒和幼兒由包含 在Prevnar疫苗中的血清型抵抗由肺炎鏈球菌引起的侵襲性疾病的常規(guī)時(shí)間是在2、4、6和 12-15個(gè)月的年齡。因此，在該方面，給予4次該組合物，即在2、4、6和12-15個(gè)月的年齡。
[0040] 本發(fā)明的組合物還可以包含來自肺炎鏈球菌的一種或多種蛋白質(zhì)。適用于包含的 肺炎鏈球菌蛋白質(zhì)的實(shí)例包括國際專利申請(qǐng)W002/083855中識(shí)別的那些，以及國際專利申 請(qǐng)TO02/053761中描述的那些。
[0041] 可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的一種或多種給藥途徑將本發(fā)明的組合物給予至 受試者，如腸胃外、透皮、或經(jīng)粘膜、鼻內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮