涉及由多核苷酸編碼的免疫原性多肽的新型初免-加強(qiáng)方案的制作方法
【專利說明】涉及由多核苷酸編碼的免疫原性多肽的新型初免-加強(qiáng)方案
[0001]本發(fā)明涉及特別適用于疫苗組合物的施用方案，所述組合物包含編碼免疫原性多肽的多核苷酸。所述施用方案涉及重復(fù)施用疫苗組合物并增強(qiáng)針對免疫原性多肽的免疫應(yīng)口 O
[0002]發(fā)明背景
感染性疾病仍然是對人類的主要威脅。用于預(yù)防或治療感染性疾病的一種方式是通過接種人工誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，所述接種是將抗原物質(zhì)施用給個體使得產(chǎn)生針對相應(yīng)抗原的適應(yīng)性免疫應(yīng)答?？乖镔|(zhì)可以是病原體(例如微生物或病毒)，它們是結(jié)構(gòu)上完整的但滅活的(即非感染性的)或者它們是減毒的(即具有降低的感染性)，或者是已被發(fā)現(xiàn)為高免疫原性的病原體純化組分。誘導(dǎo)針對病原體的免疫應(yīng)答的另一種方法是提供包含一種或更多種載體的表達(dá)系統(tǒng)，所述載體編碼病原體的免疫原性蛋白質(zhì)或肽。這樣的載體可以是裸質(zhì)粒DNA的形式，或者免疫原性蛋白質(zhì)或肽是通過使用病毒載體而遞送的，例如基于修飾的牛痘病毒(例如修飾的安卡拉牛痘病毒(Vaccinia Ankara) ;MVA)或腺病毒載體。這樣的表達(dá)系統(tǒng)具有的優(yōu)點(diǎn)是包含對環(huán)境條件低敏感性的熟知組分。
[0003]具體的目標(biāo)是當(dāng)研發(fā)基于載體的表達(dá)系統(tǒng)時，這些表達(dá)系統(tǒng)應(yīng)用于患者引發(fā)了針對相應(yīng)病原體感染的保護(hù)性免疫應(yīng)答。然而，盡管誘導(dǎo)了針對病原體的免疫原性應(yīng)答，但一些表達(dá)系統(tǒng)不能引發(fā)強(qiáng)得足以完全防止病原體感染的免疫應(yīng)答。因此，仍然需要能夠誘導(dǎo)針對病原體的保護(hù)性免疫應(yīng)答的改進(jìn)表達(dá)系統(tǒng)，以及引發(fā)增強(qiáng)的免疫應(yīng)答的已知表達(dá)系統(tǒng)的新型施用方案。
[0004]發(fā)明概述
在第一方面，本發(fā)明涉及疫苗組合，其包含:
(a)包含第一載體的初免組合物，所述第一載體包含編碼至少一種免疫原性多肽的核酸構(gòu)建體，以及
(b)包含第二載體的至少一種加強(qiáng)組合物，所述第二載體包含編碼至少一種免疫原性多肽的核酸構(gòu)建體，
其中包含在第一載體中的由核酸構(gòu)建體編碼的免疫原性多肽的至少一個表位與包含在第二載體中的由核酸構(gòu)建體編碼的免疫原性多肽的至少一個表位是免疫學(xué)上相同的，其用于初免-加強(qiáng)接種方案，其中
(i)初免組合物是鼻內(nèi)施用的，并且至少一種加強(qiáng)組合物隨后肌內(nèi)施用；
(?)初免組合物是鼻內(nèi)施用的，并且至少一種加強(qiáng)組合物隨后鼻內(nèi)施用。
[0005](ii)初免組合物是肌內(nèi)施用的，并且至少一種加強(qiáng)組合物隨后肌內(nèi)施用；或者 (iv)初免組合物是肌內(nèi)施用的，并且至少一種加強(qiáng)組合物隨后鼻內(nèi)施用。
[0006]在另一方面，本發(fā)明涉及疫苗組合，其包含:
(a)包含載體的初免組合物，所述載體包含編碼至少一種免疫原性多肽的核酸構(gòu)建體，
以及
(b)包含至少一種免疫原性多肽的至少一種加強(qiáng)組合物， 其中包含在初免組合物中的由核酸構(gòu)建體編碼的免疫原性多肽的至少一個表位與包含在加強(qiáng)組合物中的免疫原性多肽的至少一個表位是免疫學(xué)上相同的，其用于初免-加強(qiáng)接種方案，其中初免組合物是肌內(nèi)施用的，并且至少一種加強(qiáng)組合物隨后施用。
[0007]發(fā)明詳述
除非另有定義，本文所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所通常理解的相同含義。
[0008]優(yōu)選地，本文所使用的術(shù)語是按照〃A multilingual glossary ofb1technological terms: (IUPAC Recommendat1ns)〃，Leuenberger, H.G.ff, Nagel,B.和 Klbl, H.編輯(1995)，Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland)中所描述的進(jìn)行定義。
[0009]在本說明書和隨后的權(quán)利要求書全文中，除非上下文另有要求，詞語“包含(comprise) ”和變型例如“包含(comprises) ”和“包含(comprising) ”都將被理解為暗含包括所述的整數(shù)或步驟或者一組整數(shù)或步驟，但不排除任何其他的整數(shù)或步驟或者一組整數(shù)或步驟。
[0010]在本說明書的文本全文中引用了幾篇文獻(xiàn)。每篇本文所引用的文獻(xiàn)(包括所有專利、專利申請、科學(xué)出版物、制造商的說明書、指示等)，無論在上文或下文，都由此通過引用以其整體并入。本文沒有任何內(nèi)容被解釋為承認(rèn)本發(fā)明無權(quán)由于在先發(fā)明而先于這些公開內(nèi)容。在本發(fā)明一方面的上下文中提供的所有定義也適用于本發(fā)明的其他方面。
[0011]在本發(fā)明的基礎(chǔ)研宄中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，特定的施用方案顯著增加了通過疫苗組合物所賦予的免疫力，所述疫苗組合物包含載體，所述載體包含編碼免疫原性肽的多核苷酸。
[0012]因此，在第一方面，本發(fā)明涉及疫苗組合，其包含:
(a)包含第一載體的初免組合物，所述第一載體包含編碼至少一種免疫原性多肽的核酸構(gòu)建體，以及
(b)包含第二載體的至少一種加強(qiáng)組合物，所述第二載體包含編碼至少一種免疫原性多肽的核酸構(gòu)建體，
其中包含在第一載體中的由核酸構(gòu)建體編碼的免疫原性多肽的至少一個表位與包含在第二載體中的由核酸構(gòu)建體編碼的免疫原性多肽的至少一個表位是免疫學(xué)上相同的，其用于初免-加強(qiáng)接種方案，其中:
(i)初免組合物是鼻內(nèi)施用的，并且至少一種加強(qiáng)組合物隨后肌內(nèi)施用；
(?)初免組合物是鼻內(nèi)施用的，并且至少一種加強(qiáng)組合物隨后鼻內(nèi)施用。
[0013](ii)初免組合物是肌內(nèi)施用的，并且至少一種加強(qiáng)組合物隨后肌內(nèi)施用；或者 (iv)初免組合物是肌內(nèi)施用的，并且至少一種加強(qiáng)組合物隨后鼻內(nèi)施用。
[0014]在一些情況下，優(yōu)選的初免-加強(qiáng)接種方案是(i)，因?yàn)樗峁┝颂貏e有效的保護(hù)性免疫，例如通過引發(fā)鼻內(nèi)和上呼吸道內(nèi)的強(qiáng)免疫應(yīng)答。
[0015]載體
本文所使用的術(shù)語“載體”是指至少一種多核苷酸或至少一種多核苷酸和至少一種蛋白質(zhì)的混合物，它能夠?qū)谄渲械亩嗪塑账嵋氲郊?xì)胞中。載體所包含的至少一種多核苷酸是由編碼至少一種免疫原性蛋白質(zhì)的至少一種核酸構(gòu)建體組成，或者包含編碼至少一種免疫原性蛋白質(zhì)的至少一種核酸構(gòu)建體。除了包含本發(fā)明核酸構(gòu)建體的多核苷酸或由其組成之外，還可以將另外的多核苷酸和/或多肽引入到細(xì)胞中。如果需要所述另外的多核苷酸和/或多肽以將本發(fā)明的核酸構(gòu)建體引入到細(xì)胞中，或者如果另外的多核苷酸和/或多肽的引入增加了由本發(fā)明核酸構(gòu)建體所編碼的免疫原性多肽的表達(dá)，那么另外的多核苷酸和/或多肽的添加是特別希望的。
[0016]在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選的是，由所引入的核酸構(gòu)建體編碼的一種或多種免疫原性多肽在引入載體后在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。合適載體的例子包括但不限于質(zhì)粒、粘粒、噬菌體、病毒或人工染色體。
[0017]在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，包含本發(fā)明核酸構(gòu)建體的第一和第二載體選自由質(zhì)粒、粘粒、噬菌體、病毒和人工染色體組成的組。更優(yōu)選地，適用于實(shí)施本發(fā)明的載體是噬菌體載體，優(yōu)選λ噬菌體和絲狀噬菌體載體，或病毒載體。
[0018]合適的病毒載體是基于天然存在的載體，它們被修飾為不能復(fù)制的，也被稱為非復(fù)制型的。非復(fù)制型病毒需要提供反式蛋白來復(fù)制。通常那些蛋白質(zhì)是在病毒生產(chǎn)細(xì)胞系中穩(wěn)定或瞬時表達(dá)的，由此允許病毒的復(fù)制。因此，病毒載體優(yōu)選是感染性的和非復(fù)制型的。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道如何致使各種病毒不能復(fù)制。
[0019]在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，載體選自腺病毒載體、腺相關(guān)病毒(AAV)載體(例如腺相關(guān)病毒AAV 5型和2型)、甲病毒載體(例如委內(nèi)瑞拉馬腦炎(equine encephalitis)病毒(VEE)、辛德畢斯(sindbis)病毒(SIN)、西門利克森林(semliki forest)病毒(SFV)和VEE-SIN嵌合體)、皰瘆病毒載體(例如源自巨細(xì)胞病毒的載體，如恒河猴巨細(xì)胞病毒(RhCMV) (14))、沙粒(arena)病毒載體(例如淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)載體
(15))、麻瘆病毒載體、痘病毒載體(例如牛痘病毒、修飾的安卡拉牛痘病毒(MVA) ,NYVAC (源自牛痘哥本哈根株)和禽痘病毒載體:金絲雀痘病毒(ALVAC)和雞痘病毒(FPV)載體)，水泡性口炎病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、病毒樣顆粒和細(xì)菌孢子。
[0020]在具體的實(shí)施方案中，優(yōu)選的載體是腺病毒載體，具體而言是源自人或非人的類人猿和痘病毒載體的腺病毒載體，優(yōu)選MVA。腺病毒所來源的優(yōu)選類人猿是黑猩猩(Chimpanzee) (Pan)、大猩猩(Gorilla)和猩猩(orangutans) (Pongo)、優(yōu)選倭黑猩猩(Bonobo) (/?/?和普通黑猩猩(/?/? troglodyte^)。一般而言，天然存在的非人的類人猿腺病毒是從相應(yīng)類人猿的糞便樣本中分離的。最優(yōu)選的載體是基于hAd5、hAdll、hAd26、hAd35、hAd49、ChAd3、ChAd4、ChAd5、ChAd6、ChAd7、ChAd8、ChAd9、ChAdlO, ChAdl 1、ChAdl6、ChAdl7、ChAdl9、ChAd20、ChAd22、ChAd24、ChAd26、ChAd30、ChAd31、ChAd37、ChAd38、ChAd44、ChAd55、ChAd63、ChAd73、ChAd82、ChAd83、ChAdl46、ChAdl47、PanAdl、PanAd2 和PanAd3載體的非復(fù)制型腺病毒載體或者復(fù)制型Ad4和Ad7載體。人腺病毒hAd4、hAd5、hAd7、hAdll、hAd26、hAd35和hAd49是現(xiàn)有技術(shù)中熟知的?；谔烊淮嬖诘腃hAd3、ChAd4、ChAd5、ChAd6、ChAd7、ChAd8、ChAd9、ChAdlO、ChAdl1、ChAdl6、ChAdl7、ChAdl9、ChAd20、ChAd22、ChAd24、ChAd26、ChAd30、ChAd31、ChAd37、ChAd38、ChAd44、ChAd63 和 ChAd82 的載體在 WO 2005/071093 中詳細(xì)描述了?；谔烊淮嬖诘?PanAdl、PanAd2、PanAd3、ChAd55、ChAd73、ChAd83、ChAd146 和 ChAdl47 的載體在 WO 2010/086189 中詳細(xì)描述了。
[0021]術(shù)語“非復(fù)制型腺病毒”是指已經(jīng)變得不能復(fù)制的腺病毒，因?yàn)樗驯还こ袒园《緩?fù)制所必需的基因產(chǎn)物的至少功能性缺失或者完全去除，例如選自El、E2、E3和E4的腺病毒基因之一或更多種。
[0022]優(yōu)選使用的第一載體是腺病毒載體，更優(yōu)選非人的類人猿例如黑猩猩或倭黑猩猩來源腺病毒載體，具體而言是基于ChAd3、ChAd4、ChAd5、ChAd6、ChAd7、ChAd8、ChAd9、ChAdl0、ChAdll、ChAdl6、ChAdl7、ChAdl9、ChAd20、ChAd22、ChAd24、ChAd26、ChAd30、ChAd31、ChAd37、ChAd38、ChAd44、ChAd55、ChAd63、ChAd73、ChAd82、ChAd83、ChAd146, ChAd147,PanAdl、PanAd2和PanAd3的非復(fù)制型腺病毒載體，或者基于hAd4和hAd7的復(fù)制型載體。最優(yōu)選的載體是基于PanAd3的。
[0023]優(yōu)選地，第二載體是痘病毒載體，具體地是MVA或者腺病毒載體，優(yōu)選非人的類人猿來源的腺病毒載體。優(yōu)選的非復(fù)制型載體是基于ChAd3、ChAd4、ChAd5、ChAd6、ChAd7、ChAd8、ChAd9、ChAdlO, ChAdll、ChAdl6、ChAdl7, ChAdl9、ChAd20、ChAd22、ChAd24、ChAd26、ChAd30、ChAd31、ChAd37、ChAd38、ChAd44、ChAd55、ChAd63、ChAd73、ChAd82、ChAd83、ChAdl46、ChAdl47、PanAdl、PanAd2 和 PanAd3 載體或者復(fù)制型 Ad4 和 Ad7 載體。
[0024]如果第一和第二載體都是腺病毒載體，有時優(yōu)選使用免疫學(xué)上不同的腺病毒載體作為第一和第二載體。如果兩種載體是免疫學(xué)上是相同的，可能存在的潛在風(fēng)險是在免疫應(yīng)答的初免期間針對第一載體產(chǎn)生的抗體損害了用于加強(qiáng)免疫應(yīng)答的第二載體對患者的轉(zhuǎn)導(dǎo)。腺病毒和由此的腺病毒載體通常包含三種包膜蛋白，即六鄰體、五鄰體和纖維蛋白。針對給定腺病毒的宿主免疫應(yīng)答主要由六鄰體蛋白來確定。因此，如果兩種腺病毒的六鄰體蛋白的至少一個表位不同，那么認(rèn)為這兩種腺病毒在本發(fā)明的意義上就是免疫學(xué)上不同的。六鄰體的T細(xì)胞和B細(xì)胞表位都已經(jīng)作圖。
[0025]在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一載體是腺病毒載體，具體而言是PanAd3，并且第二載體是痘病毒載體，具體而言是MVA或腺病毒載體。
[0026]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，第一載體是PanAd3并且第二載體是MVA。MVA的描述可以在 Mayr A, Stickl H, Muller HK, Danner K, Singer H."The smallpoxvaccinat1n strain MVA: marker, genetic structure, experience gained withthe parenteral vaccinat1n and behav1r in organisms with a debilitateddefence mechanism.〃 Zentralbl Bakter1l B.1978 Dec;167 (5-6):375-90 和 Mayr,A., Hochstein-MintzeI, V.& Stickl, H.(1975) “Abstammung, Eigenschaften undVerwendung des attenuierten Vaccinia-Stammes MVA.，，Infect1n 3, 6-14 中找到。
[0027]術(shù)語“多核苷酸”和“核酸”在本申請全文中可互換使用。多核苷酸被理解為由核苷酸單體制成的聚合物大分子。核苷酸單體是由核堿基、五碳糖(例如但不限于核糖或2’-脫氧核糖)，和一至三個磷酸基團(tuán)構(gòu)成。一般而言，多核苷酸是通過個體核苷