功效改進且毒性降低的抗體與sn-38的免疫綴合物的劑量的制作方法
【專利說明】功效改進且毒性降低的抗體與SN-38的免疫綴合物的劑量
[0001] 相關申請
[0002] 本申請根據(jù)35 U. S. C. 119 (e)要求12/13/12提交的美國臨時專利申請 61/736, 684 及 1/7/13 提交的 61/749, 548 的權益。
[0003] 序列表
[0004] 本申請含有經由EFS-Web以ASCII格式提交的序列表并且在此以引用的方式整體 并入。在2013年7月17日創(chuàng)建的所述ASCII副本的名稱是IMM340W01_SL. txt并且大小 是60, 405個字節(jié)。 發(fā)明領域
[0005] 本發(fā)明涉及抗體或抗原結合抗體片段與喜樹堿如SN-38的免疫綴合物的治療用 途，所述免疫綴合物靶向人受試者中的各種癌細胞的能力得以改進。在優(yōu)選實施方案中，抗 體及治療性部分經由提高治療功效的細胞內可裂解的鍵連接。在更優(yōu)選的實施方案中，免 疫綴合物是以使治療效果達到最佳的特定劑量和/或特定施用方案來施用的。用于本文所 公開的人治療用途的SN-38綴合抗體的最佳劑量和施用方案顯示從動物模型研宄中不能 預測到的出乎意料的優(yōu)良功效，從而允許有效治療耐受標準抗癌療法（包括母體化合物， 依立替康（CPT-Il))的癌癥。
[0006] 發(fā)明背景
[0007] 多年來在特異性地靶向藥物療法的領域中科學家的一個目標是使用單克隆抗體 (Mb)來特定遞送毒性試劑到人癌癥。已經開發(fā)了腫瘤相關Mb與合適的毒性試劑的綴合 物，但是在人的癌癥療法中已經取得了各式各樣的成功，并且實際上沒有應用在如感染性 及自體免疫疾病的其它疾病中。毒性試劑最通常是化學治療性藥物，雖然發(fā)射顆粒的放射 性核素或細菌或植物毒素也已與MAb綴合，尤其用于癌癥療法（Sharkey和Goldenberg, CA Cancer J Clin. 2006年7月-8月；56 (4) :226-243)并且更近來，將放射性免疫綴合物 用于某些感染性疾病的臨床前療法中（Dadachova和Casadevall，Q J Nucl Med Mol Imaging2006 ;50 (3):193-204) 〇
[0008] 使用Mb-化學治療性藥物綴合物的優(yōu)點在于：(a)化學治療性藥物本身在結構上 被明確定義；(b)使用充分定義的綴合化學過程將化學治療性藥物連接至Mb蛋白，經常在 遠離Mb抗原結合區(qū)的特異性位點處；（c)與涉及Mb及細菌或植物毒素的化學綴合物相 比，Mb-化學治療性藥物綴合物更具有可重復性且通常具有更小的免疫原性，且因此更有 商業(yè)發(fā)展前途并且容易獲得管理批準；以及（d)Mb-化學治療性藥物綴合物與放射性核素 Mb綴合物相比全身毒性要小幾個數(shù)量級，尤其是針對輻射敏感的骨髓。
[0009] 喜樹堿（CPT)及其衍生物是一類有效的抗腫瘤劑。依立替康（又稱為CPT-11) 及拓撲替康是CPT類似物，其是被批準的癌癥治療劑（Iyer *Ratain，CancerChemother. Phamacol. 42: S31-S43 (1998))。CPT通過經由使拓撲異構酶I-DNA復合物穩(wěn)定來抑制拓撲 異構酶 I 酶，從而發(fā)揮作用（Liu,等人 The Camptothecins:Unfolding Their Anticancer Potential, Liehr J. G. , Giovanella,B.C.和 Verschraegen (編著），NY Acad Sci. , NY 922:1-10(2000))。CPT在綴合物的制備中帶來了特殊問題。一個問題是大多數(shù)CPT衍生物 在含水緩沖液中的不溶性。其次，CPT提供對于綴合至大分子的結構修飾的特別挑戰(zhàn)。例 如，CPT本身僅在環(huán)E中含有叔羥基。在CPT的情況下羥基官能團必須偶聯(lián)至適用于隨后 的蛋白綴合的接頭；并且在有效的CPT衍生物如SN-38、化學治療性CPT-Il的活性代謝物 及其它含有C-10-羥基的衍生物如拓撲替康和10-羥基-CPT中，酚羥基在C-IO位置處的 存在使得必需的C-20-羥基衍生作用復雜化。第三，喜樹堿的E環(huán)的δ-內酯部分在生理 條件下的不穩(wěn)定性導致抗腫瘤效力大大降低。因此，進行綴合方案以便在7或更低的pH下 進行其以避免內酯環(huán)打開。然而，具有胺反應性基團如活性酯的雙官能CPT的綴合通常需 要8或更大的pH。第四，細胞內可裂解部分優(yōu)選地并入連接CPT與抗體或其它結合部分的 接頭/間隔物中。
[0010] 存在制備及施用抗體-CPT綴合物如抗體-SN-38綴合物的更有效方法的需要。優(yōu) 選地，所述方法包括使得用于人患者的治療用途的抗體-CPT綴合物的功效最大化且使得 毒性最小化的最佳給藥及施用方案。
[0011] 發(fā)明概述
[0012] 除非另外明確地說明，如本文所用的縮寫"CPT"可以是指喜樹堿或其任何衍生物， 如SN-38。本發(fā)明通過提供用于制備和施用CPT抗體免疫綴合物的改進的方法及組合物來 解決在本領域中未實現(xiàn)的需要。優(yōu)選地，所述喜樹堿是SN-38。所公開的方法及組合物適用 于治療耐受其它形式的療法或對其反應較小的多種疾病及病狀，并且可以包括針對其用于 選擇性靶向的合適的抗體或抗原結合抗體片段可產生、或可獲得或已知的疾病?？捎帽景l(fā) 明的免疫綴合物治療的優(yōu)選疾病或病狀包括例如癌癥或由感染性有機體所引起的疾病。
[0013] 優(yōu)選地，靶向部分是抗體、抗體片段、雙特異性或其它多價抗體、或其它基于抗體 的分子或化合物。所述抗體可以具有各種同種型，優(yōu)選地人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4,更優(yōu) 選地包括人IgGl鉸鏈及恒定區(qū)序列?？贵w或其片段可以是嵌合的人-小鼠、嵌合的人-靈 長類動物、人源化（人構架及鼠科高變（CDR)區(qū)）、或完全人抗體以及其變型，如一半IgG4 抗體（稱為"單抗體（unibody)"），如由 van der Neut Kolfschoten 等人（Science 2007 ; 317:1554-1557)所描述。更優(yōu)選地，抗體或其片段可被設計或選擇以包含屬于特定同種異 型的人恒定區(qū)序列，這可以造成在向人受試者施用免疫綴合物時降低的免疫原性。供施用 的優(yōu)選同種異型包括非Glml同種異型（nGlml)，如Glm3、Glm3, 1、Glm3, 2或Glm3, 1，2。更 優(yōu)選地，同種異型選自由以下組成的組：nGlml、Glm3、nGlml, 2及Km3同種異型。
[0014] 使用的抗體可以結合至本領域中已知的任何疾病相關抗原。舉例來說，當疾病病 況是癌癥時，由腫瘤細胞表達或另外與腫瘤細胞有關的許多抗原在本領域中是已知的，包 括但不限于碳酸酐酶IX、α-甲胎蛋白（AFP)、 α-輔肌動蛋白-4、A3、對A33抗體有特異 性的抗原、ART-4、Β7、Ba 733、BAGE、BrE3-抗原、CA125、CAMEL、CAP-1、CASP-8/m、、CCCL19、 CCCL21、CD1、CDla、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、 CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、 CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD66a-e、CD67、CD70、CD70L、CD74、CD79a、CD80、CD83、 CD95、CD126、CD132、CD133、CD138、CD147、CD154、CDC27、CDK-4/m、CDKN2A、CTLA-4、CXCR4、 CXCR7、CXCL12、HIF-I a、結腸特異性抗原-p (CSAp)、CEA (CEACAM5)、CEACAM6、c-Met、DAM、 EGFR、EGFRvIII、EGP-I (TR0P-2)、EGP-2、ELF2-M、Ep-CAM、成纖維細胞生長因子（FGF)、 Flt-1、Flt-3、葉酸受體、G250 抗原、GAGE、gplOO、GRO-β、HLA-DR、HML 24 人絨毛膜促性 腺激素（HCG)及其亞基、HER2/neu、HMGB-1、低氧誘導因子（HIF-I)、HSP70-2M、HST-2、Ia、 IGF-1R、IFN- γ、IFN- α、IFN- β、IFN- λ、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、 11^-2、11^-6、幾-8、11^-12、11^-15、11^-17、11^-18、11^-23、11^-25、胰島素樣生長因子-1(16卩-1)、 KC4-抗原、KS-I-抗原、KSl-4、Le-Y、LDR/FUT、巨噬細胞迀移抑制因子（MIF)、MAGE、MAGE-3、 MART-1、MART-2、NY-ESO-I、TRAG-3、mCRP、MCP-I、ΜΙΡ-1Α、ΜΙΡ-1Β、MIF、MUCl、MUC2、MUC3、 MUC4、MUC5ac、MUC13、MUC16、MUM-1/2、MUM-3、NCA66、NCA95、NCA90、PAM4 抗原、胰腺癌粘 蛋白、PD-I受體、胎盤生長因子、p53、PLAGL2、前列腺酸性磷酸酶、PSA、PRAME、PSMA、P1GF、 ILGF、ILGF-1R、IL-6、IL-25、RS5、RANTES、T101、SAGE、S100、存活素、存活素-2B、TAC、 TAG-72、腱生蛋白、TRAIL 受體、TNF-α、Tn 抗原、Thomson-Friedenreich 抗原、腫瘤壞死 抗原、VEGFR、ED-B纖連蛋白、WT-1、17-1A-抗原、補體因子C3、C3a、C3b、C5a、C5、血管生 成標記物、bcl-2、bcl-6、Kras、致癌基因標記物以及致癌基因產物（參見，例如Sensi等 人，Clin Cancer Res 2006, 12:5023-32 ;Parmiani 等人，JImmunol 2007, 178:1975-79 ; Novellino 等人 Cancer Tmmunol Immunother 2005, 54:187-207)。優(yōu)選地，抗體結合至 CEACAM5、CEACAM6、EGP-I (TR0P-2)、MUC-16、AFP、MUC5a, c、PAM4 抗原、CD74、CD19、CD20、 CD22 或 HLA-DR0
[0015] 可以利用的示例性抗體包括但不限于：hRl (抗IGF-1R，3/12/10申請的美國專 利申請序列號12/722,645)、hPAM4(抗粘蛋白，美國專利號7,282,567)、hA20(抗CD20， 美國專利號 7,251，164)、hA19(抗 CD19,美國專利號 7, 109,304)、hIMMU31(抗 AFP，美國 專利號7, 300, 655)、hLLl (抗CD74,美國專利號7, 312, 318)、hLL2 (抗CD22,美國專利 號 7, 074, 403)、hMu-9 (抗 CSAp，美國專利號 7, 387, 773)、hL243 (抗 HLA-DR，美國專利號 7, 612, 180)、hMN-14 (抗 CEACAM5,美國專利號 6, 676, 924)、hMN-15 (抗 CEACAM6,美國專 利號 7,541,440)、hRS7(抗 EGP-1，美國專利號 7,238,785)、hMN-3(抗 CEACAM6,美國專利 號7, 541，440)、Abl24和Abl25 (抗CXCR4,美國專利號7, 138, 496)，每個引用專利或申請 的實施例部分以引用的方式并入本文。更優(yōu)選地