到 來源于胚胎干細(xì)胞系的小鼠品系中，所述胚胎干細(xì)胞系含有內(nèi)源性重鏈基因座和輕鏈基 因座的靶向破壞。轉(zhuǎn)基因小鼠可合成對(duì)各種抗原有特異性的人抗體，并且小鼠可用來產(chǎn) 生分泌人抗體的雜交瘤。用于從轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得人抗體的方法由Green等人，Nature Genet. 7:13 (1994)、Lonberg 等人，Nature 368:856(1994)以及 Taylor 等人，Int. Immun. 6:579(1994)描述。完全地人抗體還可通過基因轉(zhuǎn)染或染色體轉(zhuǎn)染方法以及菌 體展示技術(shù)來構(gòu)建，所有所述方法和技術(shù)均為本領(lǐng)域中已知的。參見，例如McCafferty 等人，Nature 348:552-553(1990)用于從來自未免疫供體的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域基因 庫（gene repertoire)中體外產(chǎn)生人抗體及其片段。在此技術(shù)中，將人抗體可變結(jié)構(gòu)域 基因同框克隆到絲狀噬菌體的主要或次要外殼蛋白基因中，并在噬菌體顆粒的表面上展 示為功能性抗體片段。因?yàn)榻z狀顆粒含有噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，所以基于抗體 功能性質(zhì)的選擇也導(dǎo)致選擇編碼展現(xiàn)那些性質(zhì)的抗體的基因。以此方式，噬菌體模擬B 細(xì)胞的一些性質(zhì)。可以多種形式進(jìn)行噬菌體展示，對(duì)于它們的綜述，參見例如Johnson和 Chiswell, Current Opinion in StructuralBiology 3:5564-571(1993)。還可由體外激活 的B細(xì)胞來生成人抗體。參見美國專利號(hào)5, 567, 610和5, 229, 275,每個(gè)專利的實(shí)施例部分 以引用的方式并入本文。
[0047] 治療劑是適用于治療疾病的原子、分子或化合物。治療劑的實(shí)例包括但不限于抗 體、抗體片段、免疫綴合物、藥物、細(xì)胞毒性劑、促細(xì)胞凋亡劑、毒素、核酸酶（包括DNA酶和 RNA酶）、激素、免疫調(diào)節(jié)劑、螯合劑、硼化合物、光活化劑或染料、放射性核素、寡核苷酸、干 擾RNA、siRNA、RNAi、抗血管生成劑、化療劑、細(xì)胞因子、趨化因子、前藥、酶、結(jié)合蛋白或肽或 其組合。
[0048] 免疫綴合物是綴合至治療劑的抗體、抗原結(jié)合抗體片段、抗體復(fù)合物或抗體融合 蛋白。綴合可以是共價(jià)或非共價(jià)的。綴合優(yōu)選是共價(jià)的。
[0049] 如本文所用，術(shù)語抗體融合蛋白是重組產(chǎn)牛的抗原結(jié)合分子，其中一種或多種天 然抗體、單鏈抗體或抗體片段連接至另一部分，如蛋白質(zhì)或肽、毒素、細(xì)胞因子、激素等。在 某些優(yōu)選實(shí)施方案中，融合蛋白可以包含融合在一起的兩種或更多種相同或不同抗體、抗 體片段或單鏈抗體，其可以結(jié)合至相同抗原或不同抗原上的相同表位、不同表位。
[0050] 免疫調(diào)節(jié)劑是當(dāng)存在時(shí)改變、抑制或刺激身體免疫系統(tǒng)的治療劑。通常，使用的免 疫調(diào)節(jié)劑刺激免疫細(xì)胞增殖或在免疫應(yīng)答級(jí)聯(lián)中變得活化，如巨噬細(xì)胞、樹狀細(xì)胞、B細(xì)胞 和/或T細(xì)胞。然而，在一些情況下，免疫調(diào)節(jié)劑可以抑制免疫細(xì)胞的增殖或活化。如本文 所述的免疫調(diào)節(jié)劑的一個(gè)實(shí)例是細(xì)胞因子，其是大約5-20kDa的可溶性小蛋白，其一旦與 特定抗原接觸便由一個(gè)細(xì)胞群（例如激發(fā)的T-淋巴細(xì)胞）釋放并且用作細(xì)胞之間的細(xì)胞 間介質(zhì)。如熟練技術(shù)人員將了解，細(xì)胞因子的實(shí)例包括淋巴因子、單核因子、白介素以及若 干相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)分子，如腫瘤壞死因子（TNF)和干擾素。趨化因子是細(xì)胞因子的子集。某 些白介素和干擾素是刺激T細(xì)胞或其它免疫細(xì)胞增殖的細(xì)胞因子的實(shí)例。示例性干擾素包 括干擾素-α、干擾素-β、干擾素-γ以及干擾素-λ。
[0051] 逆!是喜樹堿的縮寫，并且當(dāng)用于本發(fā)明的應(yīng)用CPT中時(shí)，代表喜樹堿本身或喜樹 堿的類似物或衍生物，如SN-38。喜樹堿及其一些類似物的結(jié)構(gòu)在下文的圖1中以式1給 出，其中指明編號(hào)并且環(huán)用字母A-E來標(biāo)記。
[0052] M 1
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療癌癥的方法，其包括向具有癌癥的人受試者施用包含綴合至抗體或其抗 原結(jié)合片段的SN-38的免疫綴合物；其中所述抗體或其片段結(jié)合至選自由以下組成的組的 抗原：EGP-I (TR0P-2)、CEACAM5、CEACAM6、CD74、CD19、CD20、CD22、CSAp、HLA-DR、MUC5ac 以及AFP (甲胎蛋白）；并且其中所述免疫綴合物是以在4 mg/kg與18 mg/kg之間的劑量 施用。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述劑量選自由以下組成的組：4 mg/kg、6 mg/kg、 8 mg/kg、9 mg/kg、10 mg/kg、12 mg/kg、16 mg/kg 和 18 mg/kg〇
3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體選自由以下組成的組：hLLl (抗CD74)、 hLL2 (抗 CD22)、hRFB4 (抗 CD22)、hRS7 (抗 TR0P-2)、hPAM4 (抗 MUC5ac)、hMN-3 (抗 CEACAM6)、hMN-14 (抗CEACAM5)、hMN-15 (抗CEACAM6)、hA19 (抗CD19)、hA20 (抗CD22)、 hMu-9 (抗 CSAp)、hL243 (抗 HLA-DR)以及 hIMMU31 (抗 AFP)。
4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥是實(shí)體腫瘤并且所述治療造成至少15%、 至少20%、至少30%或至少40%的腫瘤尺寸的減小。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥選自由以下組成的組：B細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì) 胞白血病、結(jié)腸癌、胃癌、食道癌、甲狀腺髓樣癌、腎癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、膀胱癌、卵巢 癌、子宮癌、子宮頸癌、睪丸癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、骨癌、腦癌、直腸癌以及黑素瘤。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述B細(xì)胞白血病或B細(xì)胞淋巴瘤選自由以下組成 的組：無痛形式的B細(xì)胞淋巴瘤、侵襲形式的B細(xì)胞淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、急性淋 巴細(xì)胞性白血病、毛細(xì)胞白血病、非何杰金氏淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、濾泡 性淋巴瘤、彌漫性B細(xì)胞淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤以及多發(fā)性骨髓瘤。
7. 如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述癌癥是轉(zhuǎn)移性的。
8. 如權(quán)利要求7所述的方法，進(jìn)一步包括縮小尺寸或消除轉(zhuǎn)移。
9. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥難以用其它療法醫(yī)治但對(duì)所述免疫綴合 物有反應(yīng)。
10. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述患者在用所述免疫綴合物治療之前未能對(duì)至 少一種其它療法有反應(yīng)。
11. 如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述患者在用所述免疫綴合物治療之前未能對(duì) 依立替康的療法有反應(yīng)。
12. 如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述癌癥是實(shí)體腫瘤并且所述治療造成至少 15%、至少20%、至少30%或至少40%的腫瘤尺寸的減小。
13. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中在SN-38與所述抗體之間存在接頭。
14. 如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述接頭是CL2A并且所述免疫綴合物的結(jié)構(gòu)是 MAb-CL2A-SN-38
15. 如權(quán)利要求14所述的方法，其中在MAb-CL2A-SN-38中SN-38的10-羥基位置是使 用'COR'部分的10-仏酯或10-仏碳酸酯衍生物；其中"CO"是羰基且"R"是選自以下的基 團(tuán)：⑴N，N-二取代的氨基烷基"N(CH 3)2-(CH2)n-"，其中η是1-10并且其中末端氨基任選 地呈季鹽形式；（ii)烷基殘基"CH 3-(CH2)n-"，其中η是0-10 ; (iii)烷氧基部分"CH3-(CH2) n-O-"，其中 η 是 0-10 ;(iv) "N(CH3)2-(CH2)n-〇-"，其中 η 是 2-10;或（V) aR1O-(CH2-CH2-O) n-CH2_CH2-〇-"，其中R1是乙基或甲基并且η是值為0-10的整數(shù)。
16. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中存在6個(gè)或更多個(gè)附接于每個(gè)抗體分子的SN-38 分子。
17. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體是IgGl或IgG4抗體。
18. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗體具有選自由以下組成的組的同種異型： Glm3、Glm3, l、Glm3, 2、Glm3, 1，2、nGlml、nGlml，2 及 Km3 同種異型。
19. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述免疫綴合物劑量是以具有選自由以下組成的 組的周期的方案每周向人受試者施用一次或兩次：（i)每周；（ii)每隔一周；（iii) 一周療 法，然后是二、三或四周停藥；（iv)兩周療法，然后是一、二、三或四周停藥；（V)三周療法， 然后是一、二、三、四或五周停藥；（vi)四周療法，然后是一、二、三、四或五周停藥；（vii)五 周療法，然后是一、二、三、四或五周停藥；以及（viii)每月。
20. 如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述周期重復(fù)4、6、8、10、12、16或20次。
21. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述免疫綴合物是與一種或多種選自由以下組成 的組的治療方式組合施用：非綴合抗體、放射性標(biāo)記的抗體、藥物-綴合的抗體、毒素-綴合 的抗體、基因療法、化學(xué)療法、治療性肽、細(xì)胞因子療法、寡核苷酸、局部放射療法、手術(shù)以及 干擾RNA療法。
22. 如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述藥物、毒素或化療劑選自由以下組成的 組：5_氟尿嘧啶、阿法替尼、阿普立定、阿扎立平、阿那曲唑、蒽環(huán)類、阿西替尼、AVL-101、 AVL-291、苯達(dá)莫司汀、博來霉素、硼替佐米、博舒替尼、苔蘚抑素-1、白消安、卡奇霉素、喜 樹堿、卡鉬、IO-羥基喜樹堿、卡莫司汀、塞來昔布、苯丁酸氮芥、順鉬（⑶DP)、Cox-2抑制 劑、伊立替康（CPT-Il)、SN-38、卡鉑、克拉屈濱、喜樹堿類、環(huán)磷酰胺、克唑替尼、阿糖胞 苷、達(dá)卡巴嗪、達(dá)沙替尼、dinaciclib、多西紫杉醇、放線菌素 D、柔紅霉素、阿霉素、2-吡 咯啉阿霉素（2P-D0X)、氰基-嗎啉代阿霉素、葡糖苷酸阿霉素、葡糖苷酸表柔比星、埃羅 替尼、雌莫司汀、表鬼臼毒素、埃羅替尼、恩替諾特、雌激素受體結(jié)合劑、依托泊苷（VP16)、 葡糖苷酸依托泊苷、磷酸依托泊苷、依西美坦、芬戈莫德、黃酮吡啶酚、氟尿苷（FUdR)、 3'，5' -0-二油?；?FudR (FUdR-dO)、氟達(dá)拉濱、氟他胺、法呢基-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、 福他替尼、ganetespib、⑶C-0834、GS-1101、吉非替尼、吉西他濱、羥基脲、依魯替尼、伊達(dá) 比星、idelalisib、異環(huán)磷酰胺、伊馬替尼、L-天冬酰胺酶、拉帕替尼、來那度胺、亞葉酸、 LFM-A13、洛莫司汀、氮芥、美法侖、巰嘌呤、6-巰嘌呤、甲氨蝶呤、米托蒽醌、光神霉素、絲裂 霉素、米托坦、諾維本、來那替尼、尼洛替尼、亞硝基脲、奧拉帕尼、普卡霉素、丙卡巴肼、紫杉 醇、PCI-3276、噴司他丁、PSI-341、雷洛昔芬、司莫司汀、索拉非尼、鏈佐星、SU11248、舒尼替 尼、他莫昔芬、替莫唑胺（DTIC的含水形式）、反鉑、沙利度胺、硫鳥嘌呤、塞替派、替尼泊苷、 托泊替康、尿喃啶氮芥、瓦他拉尼、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花生物堿以及ZD1839。
23. -種治療胰腺癌、結(jié)腸直腸癌、肺癌、胃癌、膀胱癌、腎癌、乳腺癌、卵巢癌、子宮癌 或前列腺癌的方法，其包括向具有胰腺癌、結(jié)腸直腸癌、肺癌、胃癌、膀胱癌、腎癌、乳腺癌、 卵巢癌、子宮癌或前列腺癌的人受試者施用包含綴合至hRS7 (抗TR0P-2)抗體或其抗原結(jié) 合片段的SN-38的免疫綴合物；其中所述免疫綴合物是以在4 mg/kg與24 mg/kg之間的劑 量施用。
24. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述劑量選自由以下組成的組：4 mg/kg、6 mg/ kg、8