酸緩沖溶液中，充分混勻，用酸或堿調(diào)節(jié)pH至7. 4,無菌條件下通過 0. 22 μ m濾膜，過濾除菌后置4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0030] 實(shí)施例2 一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，該病毒稀釋液每1000 ml磷酸緩沖液（由氯化鈉6g， 氯化鉀0. 05g，磷酸氫二鈉 lg，磷酸二氫鉀0. 05g，氯化鈣0. 05g，含6個(gè)結(jié)晶水的氯化鎂 〇. 〇5g溶于1000 ml雙蒸水中得到)中含有：氨基酸組合4g(其中蛋氨酸0. 5g、賴氨酸0. 8g、色 氨酸0. 4g、谷氨酸0. 8g、甘氨酸0. 9g和丙氨酸0. 6g)、維生素組合8g(其中維生素 A I. 4g、 維生素 D 2. 4g和維生素 E 1.6g、維生素 K 2. 6g)、復(fù)方中藥多糖15g(由云芝20份、角叉藻 10份、天麻10份、茍藥5份和桃仁5份提取得到)、亞硒酸鈉5mg，該輔助液pH為7. 5。
[0031] 一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液的制備方法，其步驟同實(shí)施例1。
[0032] 實(shí)施例3 一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，該病毒稀釋液每1000 ml磷酸緩沖液（由氯化鈉10g， 氯化鉀0. 5g，磷酸氫二鈉 I. 2g，磷酸二氫鉀0. 5g，氯化鈣0. 2g，含6個(gè)結(jié)晶水的氯化鎂0. 2g 溶于1000ml雙蒸水中得到)中含有：氨基酸組合5g (其中蛋氨酸0. 6g、賴氨酸I. 2g、色氨 酸0. 8g、谷氨酸0. 6g、甘氨酸0. 6g和丙氨酸I. 2g)、維生素組合IOg (其中維生素 A I. 0g、 維生素 D 3. 0g、維生素 E 2. 8g、維生素 K 3. 2g)、復(fù)方中藥多糖30g、亞硒酸鈉10mg，該輔助 液pH為7. 6。
[0033] 一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液的制備方法，其步驟同實(shí)施例1。
[0034] 實(shí)施例4 :一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液的使用方法 1)接種家兔用豬瘟病毒輔助液及其配制，方法同實(shí)施例1。
[0035] 2)豬瘟病毒家兔接種與病毒收獲 (1)接種家兔的選擇 選擇生長狀況良好、體重I. 5_3kg的家兔100只。
[0036] (2)接種 取生產(chǎn)用毒種，用上述病毒輔助液作適當(dāng)稀釋(如ΚΓ1·5或10 _2)，每只家兔耳靜脈接種 lml。接種后家兔正常飼養(yǎng)。
[0037] (3)測(cè)溫觀察 家兔接種后，上、下午各測(cè)體溫一次，24小時(shí)后，每隔6小時(shí)測(cè)體溫一次。測(cè)溫至72小 時(shí)。
[0038] (4)收獲 選擇定型熱和輕熱反應(yīng)兔，從體溫下降及其以后的24小時(shí)內(nèi)剖殺，以無菌手術(shù)采取脾 臟。
[0039] (5)病毒懸液檢驗(yàn) 在無菌操作下剔除脂肪組織。將脾臟組織稱重、剪碎，于同一容器內(nèi)混合研磨，然后濾 過，測(cè)定病毒含量，脾毒對(duì)家兔的最小感染量應(yīng)< KTVml。
[0040] 比較例1 :采用上述稀釋液稀釋病毒接種家兔與常用稀釋液稀釋病毒接種家兔各 項(xiàng)指標(biāo)的比較。
[0041] 1)本發(fā)明接種家兔用病毒輔助液及其配制，方法同實(shí)施例1。
[0042] 2)常用病毒稀釋液及其配制，即生理鹽水，按常規(guī)技術(shù)進(jìn)行配制。
[0043] 3)豬瘟病毒家兔接種與病毒收獲 (1)接種家兔的選擇 選擇生長狀況良好、體重I. 5-3kg的家兔200只。
[0044] (2)接種 將200只家兔分兩組，一組取生產(chǎn)用毒種，用本發(fā)明輔助液作適當(dāng)稀釋(如KT15或 1〇_2)，每只家兔耳靜脈接種Iml ;另一組采用常規(guī)稀釋液將種毒做同樣倍數(shù)稀釋，每只家兔 耳靜脈接種lml，接種后家兔正常飼養(yǎng)。
[0045] (3)測(cè)溫觀察 家兔接種后，上、下午各測(cè)體溫一次，24小時(shí)后，每隔6小時(shí)測(cè)體溫一次。測(cè)溫至72小 時(shí)。
[0046] (4)收獲 選擇定型熱和輕熱反應(yīng)兔，從體溫下降及其以后的24小時(shí)內(nèi)剖殺，以無菌手術(shù)采取脾 臟和淋巴結(jié)。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別收獲。
[0047] (5)病毒懸液檢驗(yàn) 在無菌操作下剔除脂肪組織。將脾臟組織稱重、剪碎，于同一容器內(nèi)混合研磨，然后濾 過，測(cè)定病毒含量，脾毒對(duì)家兔的最小感染量應(yīng)< KTVml。
[0048] 4)兩組組方法接種家兔后熱反應(yīng)數(shù)據(jù)表，見表1。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，其特征在于每1000 ml磷酸緩沖液中含有以下重 量配比的組分：維生素組合6~10g、氨基酸組合3~5g、復(fù)方中藥多糖10~30g、亞硒酸 鈉0~IOmg ; 所述的氨基酸組合包括蛋氨酸、賴氨酸、色氨酸、谷氨酸、甘氨酸和丙氨酸； 所述的維生素組合包括維生素A、維生素D、維生素E和維生素K ; 所述的復(fù)方中藥多糖由云芝、角叉藻、天麻、芍藥、桃仁提取得到。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，其特征在于該輔助液的pH為 7. 2 ~7. 6。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，其特征在于所述的磷酸緩沖 液由氯化鈉6~10g，氯化鉀0? 05~0? 5g，磷酸氫二鈉1~I. 2g，磷酸二氫鉀0? 05~0? 5g， 氯化鈣0. 05~0. 2g，含6個(gè)結(jié)晶水的氯化鎂0. 05~0. 2g溶于1000ml雙蒸水中得到。
4. 如權(quán)利要求1所述的一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，其特征在于所述的每1000 ml 磷酸緩沖液中含有以下重量配比的組分：維生素組合7~9g、氨基酸組合3. 5~4. 5g、復(fù)方 中藥多糖15~25g、亞硒酸鈉2~8mg。
5. 如權(quán)利要求1所述的一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，其特征在于所述的氨基酸組 合中含有：蛋氨酸10~15%、賴氨酸20~30%、色氨酸5~20%、谷氨酸10~30%、甘氨酸 5~30%和丙氨酸5~30%。
6. 如權(quán)利要求1所述的一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，其特征在于所述的氨基酸組 合中含有：蛋氨酸12~14%、賴氨酸22~26%、色氨酸10~15%、谷氨酸15~25%、甘氨酸 10~20%和丙氨酸15~25%。
7. 如權(quán)利要求1所述的一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，其特征在于所述的維生素組 合中含有：維生素A 10~20%、維生素D 15~30%和維生素E 15~45%、維生素K 25~ 60% 〇
8. 如權(quán)利要求1所述的一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，其特征在于所述的維生素組 合中含有：維生素A 12~18%、維生素D 20~25%和維生素E 20~35%、維生素K 30~ 40% 〇
9. 如權(quán)利要求1所述的一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液，其特征在于所述的復(fù)方中藥 多糖按以下步驟制得： a、 按云芝20~40份、角叉藻10~30份、天麻10~30份、茍藥5~20份和桃仁5~ 20份稱取各中藥原料，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴 至90°C，并保持在90°C，熬制2小時(shí)，熬制過程中每10分鐘攪拌一次； b、 棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經(jīng)1000 Orpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上 清； c、 將b中上清進(jìn)行醇沉，沉淀得到粗制中藥多糖； d、 用滅菌純化水洗滌c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進(jìn)行溶 解，溶解后，按通過活性炭柱進(jìn)行內(nèi)毒素吸附，收集濾出液； e、 將d中上濾出液通過sevag法除去蛋白； f、 將e中中藥多糖進(jìn)行真空冷凍干燥制得復(fù)方中藥多糖。
10. -種接種家兔用豬瘟病毒輔助液的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟： 1) 磷酸緩沖溶液的配制：稱取氯化鈉，氯化鉀，磷酸氫二鈉，磷酸二氫鉀，氯化鈣，含6 個(gè)結(jié)晶水的氯化鎂溶于雙蒸水中，無菌條件下通過0. 22 y m濾膜，過濾除菌備用； 2) 復(fù)方中藥多糖的制備 a、 稱取云芝份、角叉藻份、天麻份、芍藥份和桃仁份，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再 加入原料重量15倍的純化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬制2小時(shí)，熬制過程中每10 分鐘攪拌一次； b、 棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經(jīng)1000 Orpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上 清； c、 將b中上清進(jìn)行醇沉，沉淀得到粗制中藥多糖； d、 用滅菌純化水洗滌c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進(jìn)行溶 解，溶解后，按通過活性炭柱進(jìn)行內(nèi)毒素吸附，收集濾出液； e、 將d中上濾出液通過sevag法除去蛋白； f、 將e中中藥多糖進(jìn)行真空冷凍干燥制得復(fù)方中藥多糖； 3) 接種家兔用病毒輔助液配制：按比例稱取氨基酸組合、維生素組合、復(fù)方中藥多糖和 亞硒酸鈉，溶解于步驟1)制得的磷酸緩沖溶液中，充分混勻，用酸或堿調(diào)節(jié)pH至7. 2~7. 6 之間，無菌條件下通過0. 22 y m濾膜，過濾除菌后置4°C保存?zhèn)溆谩?br>【專利摘要】一種接種家兔用豬瘟病毒輔助液及其制備方法，屬于獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域。該輔助液中每1000ml磷酸緩沖液中含有以下重量配比的組分：維生素組合6～10g、氨基酸組合3～5g、復(fù)方中藥多糖10～30g、亞硒酸鈉0～10mg。本發(fā)明具有積極有益的效果：在接種家兔時(shí)能夠?qū)⒉《舅椭烈赘衅鞴?，減少接種損失，提高接種成功率；可提高家兔感染的穩(wěn)定性，減少了批次間差異，確保成品疫苗批次間穩(wěn)定性，提高了疫苗質(zhì)量；可特異性的提高豬瘟病毒在家兔體內(nèi)的增殖密度，比現(xiàn)有技術(shù)相比提高了病毒滴度5～10倍；接種家兔后發(fā)現(xiàn)所收獲的脾臟重量稍有增加，與現(xiàn)有技術(shù)相比，所獲得的脾臟重量增加了15%～40%。
【IPC分類】A61K31-59, A61K31-715, A61K31-198, A61P37-04, A61K36-8988, A61K31-355, A61K39-39, A61P31-14, A61K31-07, A61K31-405, A61K31-05
【公開號(hào)】CN104873796
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510311129
【發(fā)明人】沈建軍, 張秀文, 李陽
【申請(qǐng)人】浙江美保龍生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年9月2日
【申請(qǐng)日】2015年6月9日