一種從桑葉中提取生物堿、多糖和黃酮的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種從桑葉中提取生物堿、多糖和黃酮的方法，屬于天然產(chǎn)物的提取 純化技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 桑葉（mulberryleaves)，別名鐵扇子，為?？疲╩oraceae)桑屬（morusnigra)植 物桑樹的葉子，是國家衛(wèi)生部發(fā)布的藥食兩用的植物葉，其味甘、苦，性寒，歸肺，肝經(jīng)，具有 疏散風(fēng)熱、平抑肝陽、清肺潤燥、止血涼血等作用。桑屬植物（Morus,Moraceae)，世界上大 約有16種，分布于北溫帶、亞洲熱帶、非洲熱帶和美洲地區(qū)。中國的桑樹資源以豐富著稱， 其每年的桑葉的產(chǎn)量位居世界前列，桑葉分布在全國各地，其中中國南部的桑葉產(chǎn)量較大， 主要用于養(yǎng)蠶，江蘇和浙江區(qū)域產(chǎn)量最大。由于中國氣候條件復(fù)雜，生態(tài)環(huán)境多樣，造就了 非常豐富的桑樹種類資源，目前中國有15個桑種，主要有：家桑（Morusalba)、雞桑（Morus australisPoir)、華桑（MoruscathayanaHems1)、蒙桑（MorusMongolicaSchneid)、山 桑（Morusdiabolia)、長果桑（MoruslaevigataWall)。當(dāng)代藥理研宄證明，桑葉具有很高 的營養(yǎng)價值，并且還含有人類所必需的一些氨基酸，此外還包含維生素、無機(jī)鹽、生物堿類、 黃酮類、多糖類功能性成分。
[0003] 藥桑在植物分類學(xué)上屬?？疲∕oraceae)桑屬（MorusL.)黑桑種（Morusnigra L.)，是我國唯一具有22染色體倍數(shù)的黑桑種桑樹品種。在新疆主要栽培地為南疆的阿克 蘇、庫車及和田地區(qū)，一直被作為維吾爾族的民間藥材，桑葉、桑枝、桑椹具有消炎、降血壓、 降血糖、清除體內(nèi)自由基、補(bǔ)血和鎮(zhèn)靜等藥用功效。藥桑因長期生長于極端干旱且極冷極熱 的新疆沙漠地區(qū)，惡劣的環(huán)境導(dǎo)致其產(chǎn)生特殊的22倍染色體倍數(shù)類型，由此也導(dǎo)致藥桑體 內(nèi)的某些已經(jīng)存在的化學(xué)物質(zhì)超量表達(dá)或生成某些在同屬其它桑種質(zhì)資源中沒有的物質(zhì)， 因此藥桑體內(nèi)的次生代謝產(chǎn)物與其它桑品種相比，可能存在較大的差異，從而具有重要的 科學(xué)研宄和開發(fā)利用價值。
[0004] 國內(nèi)外對桑屬植物的化學(xué)成分的藥理活性研宄報道較多，但對新疆的特色種一藥 桑的研宄尚不充分，近年來國內(nèi)開展了對藥桑生物活性成分及藥理作用的相關(guān)研宄，并取 得了一定進(jìn)展：西南大學(xué)徐立課題組采用乙醇浸泡、有機(jī)溶劑萃取和樹脂純化，從藥桑枝 中得到桑色素；周靜分析了新疆庫車地區(qū)三種桑葚營養(yǎng)成分，得出藥桑椹的營養(yǎng)價值最高； 買買提依明報道了藥桑的黃酮和多酚類物質(zhì)分離；對藥桑多糖的提取也有報道；Song分析 了我國33種不同桑葉包括新疆藥桑、和田白桑中的NDJ、黃酮、白藜蘆醇等幾種活性物質(zhì)的 含量，多數(shù)研宄主要集中在單一目標(biāo)化學(xué)成分的提取和含量測定，但是不能同時獲得生物 堿、多糖和黃酮，使浪費(fèi)了材料，加大了成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從桑葉中提取生物堿、多糖和黃酮的方法，本發(fā)明能在 同一批桑葉粉末中將生物堿、多糖和黃酮提出來，節(jié)約原材料，從而節(jié)省成本。
[0006] 本發(fā)明提供的從桑葉中提取生物堿、多糖和黃酮的方法，包括如下步驟：1)將桑 葉粉末在酸和提取溶劑I的水溶液I中加熱回流、提取至少1次，過濾，收集提取液I和濾 渣；
[0007] 將所述濾渣在堿和提取溶劑II的水溶液II中加熱回流、提取至少1次，過濾，收集 提取液II;
[0008] 2)將所述提取液I和所述提取液II分別溶于溶劑、調(diào)節(jié)pH值，放置，然后抽濾，分 別收集提取液III和提取液IV，以及收集得到的沉淀；
[0009] 3)將提取液III和提取液IV均除去溶劑，然后分別配成提取液III的水溶液和提取液 IV的水溶液；
[0010] 4)向所述提取液III的水溶液中加入陽離子交換樹脂吸附，將吸附后的所述陽離子 交換樹脂依次用水和堿液洗脫，分別收集水相I和堿液相，將所述堿液相除去溶劑，即得到 所述生物堿；
[0011] 向所述提取液IV的水溶液中加入大孔樹脂吸附，將吸附后的所述大孔樹脂依次用 水和有機(jī)溶劑洗脫，分別收集水相II和有機(jī)相，將所述有機(jī)相除去溶劑，即得到所述黃酮；
[0012] 將步驟2)中所述沉淀與所述水相I和所述水相II合并，除去水，即得到所述多 糖。
[0013] 上述的方法，步驟2)中還包括將所述提取液I和所述提取液II濃縮的步驟。
[0014] 上述的方法，所述提取液I濃縮后的體積可為濃縮前體積的1/10~1/50;
[0015] 所述提取液II濃縮后的體積可為濃縮前體積的1/10~1/50。
[0016] 上述的方法，所述桑葉粉末為藥桑葉粉末；
[0017] 所述桑葉粉末的粒徑可為50~200目，具體可為100目；
[0018] 所述桑葉粉末與所述酸和提取溶劑I的水溶液I的質(zhì)量體積比可為10~100g/ L，具體可為20g/L、50g/L或20~50g/L;
[0019] 在所述酸和提取溶劑I的水溶液I中，所述酸的濃度可為0. 01~0. 03mol/mL，具 體可為20mol/L(即0. 02mol/mL)，所述酸性為鹽酸、硫酸或硝酸，優(yōu)選鹽酸；所述提取溶劑 I為乙醇、水或甲醇，優(yōu)選乙醇，所述提取溶劑I的質(zhì)量百分濃度可為50~90%，具體可為 59%、60%或 59 ~60%;
[0020] 在所述酸和提取溶劑I的水溶液I中，提取的溫度可為75~85°C，具體可為 80°C，提取的時間可為30~90min，具體可為60min、65min或60~65min，提取的次數(shù)可為 2~5次，具體可為3次。
[0021] 本發(fā)明中，所述桑葉粉末的預(yù)處理為將桑葉以流動水沖洗干凈，晾干，然后粉碎成 50~200目的粉狀物，制備所述桑葉粉末。
[0022] 上述的方法，步驟1)中，所述濾渣與所述堿和提取溶劑II的水溶液II的質(zhì)量比可 為1 :10~100,具體可為1 :20;
[0023] 所述堿調(diào)節(jié)所述水溶液II的pH值可為10~12,所述堿為氫氧化鈣、氫氧化鈉或碳 酸鈉，優(yōu)選氫氧化媽，在水溶液II中為飽和的氫氧化媽溶液；
[0024] 所述提取溶劑II為乙醇、水或甲醇，優(yōu)選乙醇，所述提取溶劑II的質(zhì)量百分濃度可 為50~90%，具體可為60%;
[0025]在所述堿和提取溶劑II的水溶液II中，提取的溫度為75~85°C，具體可為80°C， 提取的時間為30~90min，具體可為60min，提取的次數(shù)為2~5次，具體可為3次。
[0026] 上述的方法，步驟2)中所述溶劑為乙醇，85%以上的乙醇可以有效去除糖，蛋白 等物質(zhì)，根據(jù)相似相溶，跟多糖的極性有關(guān)，如果多糖的單糖基越多，所帶的羥基也就越多， 多糖的極性也就增大，極性的有機(jī)物易容于極性的溶劑，極性小的易溶于極性小或非極性 溶劑，多糖極性較大在水中的溶解性很好不過，在醇的溶解性很低，做到了分級純化）；
[0027] 所述提取液I與所述溶劑的體積比為1 :1~5,所述提取液II與所述溶劑的體積 比為1 :1~5 ;
[0028] 所述pH值可為3~4,所述放置的溫度可為2~4°C，時間可為12~24h，具體可 為 24h。
[0029] 上述的方法，所述提取液III的水溶液的濃度可為0.2~0.5g/ml，具體可為0.25g/ ml、0. 5g/ml或0? 25~0? 5g/ml提取液IV的水溶液的濃度可為0? 25~0? 6g/ml，具體可為 0? 3g/ml、0. 6g/ml或 0? 3 ~0? 6g/ml
[0030] 步驟3)還包括將所述提取液III除去溶劑后至少進(jìn)行1次萃取的步驟。
[0031] 上述的方法，步驟3)中，所述萃取采用水、石油醚和正丁醇，收集正丁醇相，所述 正丁醇相采用減壓蒸餾的方法除去正丁醇；
[0032] 所述萃取進(jìn)行1~5次，具體可為3次。
[0033] 上述的方法，步驟4)中，所述陽離子交換樹脂為732型陽離子交換樹脂、⑶-180型 陽離子交換樹脂或D152型大孔弱酸性陽離子交換樹脂，優(yōu)選732型陽離子交換樹脂，生物 堿在中性或者酸性溶液中一般以離子形式存在，一般是利用陽離子樹脂的酸根與生物堿的 胺基基團(tuán)作用，將生物堿富集在樹脂上，再用堿液將生物堿解離，得到游離的生物堿；
[0034] 所述堿液為氨水水溶液，所述堿液的濃度可為0.3~0.6mol/L，具體可為0.5mol/ L；
[0035] 所述有機(jī)溶劑為乙醇，具體可為質(zhì)量百分濃度為90%的乙醇。
[0036] 上述的方法，步驟4)中，所述提取液III的水溶液、所述陽離子交換樹脂、洗脫所述 陽尚子交換樹脂的水和所述堿液的質(zhì)量比為1 :3~50 :3~1000 :1~1000,具體可為1 : 25 ： 15 ：9. 5；
[0037] 所述提取液IV的水溶液、所述大孔樹脂、洗脫所述大孔樹脂的水和所述有機(jī)溶劑 的質(zhì)量比可為1 :3~50 :3~1000 :1~1000,具體可為1 :25 :15 :12. 2。
[0038] 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0039] 1、桑葉為多年生植物桑的干燥葉片，約占桑樹地上部分的64%，是桑樹的主要產(chǎn) 物，資源豐富，可以充分利用。
[0040] 2、本發(fā)明利用生物堿是堿性物質(zhì)，與酸易結(jié)合成鹽易溶于水；多糖類物質(zhì)在酸性 溶液中溶解較好；黃酮類物質(zhì)多呈酸性，采用堿溶液提取，得到初步純化。
[0041] 3、以同一份原材料，可以獲得多種有效成分，原材料有效利用，節(jié)約了成本。
[0042] 4、本發(fā)明采用樹脂吸附法分離黃酮，多糖，生物堿，可以除去雜質(zhì)，并達(dá)到分離的 目的，操作方便，成本低廉。
[0043] 5、本發(fā)明采用石油醚，正丁醇萃取生物堿粗提物，不僅有效富集了總生物堿，且得 到了具有降糖作用的1-脫氧野尻霉素（1 一DNJ)等有效成分。
【附圖說明】
[0044] 圖1為本發(fā)明的提取流程圖。
[0045]圖2為本發(fā)明提取生物堿的條件的交互作用圖。
[0046]圖3為本發(fā)明提取多糖的條件的交互作用圖。
[0047] 圖4為本發(fā)明提取黃酮的條件的交互作用圖。
【具體實(shí)施方式】
[0048] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0049] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
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