] 實(shí)施例1、從桑葉中提取生物堿、多糖和黃酮
[0051] 按照如圖1所示的流程圖進(jìn)行提取藥桑葉中的生物堿、多糖和黃酮。
[0052] (1)提?。?br>[0053] 1)稱取100g的100目藥桑葉粉末于5000ml圓底燒瓶中，加入鹽酸/乙醇水溶液 加熱回流，其中鹽酸的濃度為0. 02mo1 /ml，乙醇的質(zhì)量百分濃度為60 %，料液的質(zhì)量體積 比（即藥桑葉粉末與鹽酸和乙醇溶液的混合液的質(zhì)量比）為20g/L，提取溫度為80°C，提取 時間為60min，提取次數(shù)為3次。濾過得到提取液I(即為含有生物堿與多糖的粗提產(chǎn)物） 和濾渣；
[0054] 2)將1)中的濾渣重新加入氫氧化鈣/乙醇的水溶液中加熱回流，其中，氫氧化鈣 在水溶液中為飽和氫氧化鈣溶液，調(diào)節(jié)水溶液的pH值為10~12,乙醇的質(zhì)量百分濃度為 60%，料液質(zhì)量體積比為20g/L，溫度為80°C，提取時間為60min，提取次數(shù)為3次。濾過得 到提取液II(即為含有黃酮的粗提產(chǎn)物）。
[0055] ⑵濃縮：
[0056] 將⑴中得到的提取液I和提取液II分別濃縮至30ml體積。
[0057] (3)提取糖：
[0058] 將濃縮后的溶液分別加入90 %乙醇兩倍于濃縮液體積，調(diào)PH值為3-4,放入冰箱 (約2-4°C)24h，抽濾，得到提取液III和提取液IV，以及二者的沉淀（即為粗糖）。
[0059](4)萃?。?br>[0060] 將提取糖后的提取液III和提取液IV分別減壓旋蒸除去溶劑，再分別以蒸餾水溶 解，蒸餾水體積為20ml，得到濃度為0. 25g/ml的提取液III的水溶液（即為生物堿水溶液） 和濃度為〇. 3g/ml的提取液IV的水溶液（即為黃酮水溶液）。
[0061] (5)樹脂吸附：
[0062]1) 732型陽離子交換樹脂：將80ml提取液III的水溶液中加入500g732型陽離子 交換樹脂吸附，先用3000mL蒸餾水洗脫，收集水相（即為含多糖的水溶液），然后用3000mL 0. 5mol/l氨水（換算成質(zhì)量為191.lg)洗脫，收集堿液相，減壓濃縮至干，即得生物堿；
[0063] 2)D-101型大孔樹脂吸附：將80ml提取液IV的水溶液（即為黃酮水溶液）加入 500g大孔樹脂吸附，先用3000mL蒸餾水洗脫，收集水相（即為含多糖的水溶液），然后用 3000mL的質(zhì)量百分濃度為90%乙醇（換算成質(zhì)量為244. 5g)洗脫，收集有機(jī)相，減壓濃縮 至干，即得到黃酮；
[0064] 3)將步驟（3)中得到的沉淀（即為粗糖）和步驟（5)中1)與2)得到的水相合 并，除去蒸餾水，即得到多糖。
[0065] 對本發(fā)明提取的生物堿、多糖和黃酮進(jìn)行含量的測定：
[0066] 采用酸堿滴定法測生物堿含量，甲基紅-溴甲酚綠為指示劑，100g藥桑葉中得到 生物堿0. 18g;
[0067] 將多糖以蒸餾水溶解，定容至50ml容量瓶，用葡萄糖為對照品，采用硫酸-蒽酮法 測多糖含量，l〇〇g藥桑葉中得到多糖9. 8g;
[0068] 將黃酮以65%乙醇溶解，定容至50ml容量瓶，蘆丁為對照品，采用 NaN02-Al(N03)3-Na0H比色法測定總黃酮含量，100g藥桑葉中得到黃酮16. 5g。
[0069] 實(shí)施2、從桑葉中提取生物堿、多糖和黃酮的條件優(yōu)化
[0070] 與實(shí)施例1中方法相同，如表1中所示，不同的條件對應(yīng)提取的生物堿、多糖和黃 酮的含量。圖2、3和4所示分別為本發(fā)明提取生物堿、多糖和黃酮的條件的交互作用圖。
[0071] 表1不同提取條件對應(yīng)的提取量的響應(yīng)值
[0073] 利用Design-ExpertV8. 0? 6. 1軟件進(jìn)行多元回歸擬合，得到回歸模型方程：
[0074]Y:= -19. 39+0. 43X:+0. 56X2+0. 04X3+122. 99X4-3. 75X10^2+6, 56X10^^3+0. 1 7XA+3. 38Xl(T5X2X3-0. 94X2X4+0. 06X3X4-3. 71XKT%2-。. 01X22-3. 53Xl(T4X32-2893. 85X42
[0075] R2= 0. 9306
[0076]Y2=-23L81+7.61X1-4.92X2+L97X3+16322.77X4+0.35X1X2+0.03X1X3-68.27X1X4-0. 02X2X3-347. 87X2X4-76. 19X3X4-0. 14X/-0. 20X/-0. 02X/-58704. 06X42
[0077]R2=0.6172
[0078]Y3= -906. 88+28. 38Xi+13. 26X2+1. 60X3+2509. 12X4+0. 02X&+0. 03XA-37.72XJ4+0 ? 02X2X3+75. 64X2X4+44. 03X3X4-0. 24X/-0. 44X22-0. 04X32-1. 10X105X42
[0079]R2= 0. 9091
[0080] 通過上述的計(jì)算得出本發(fā)明提取的生物堿、多糖和黃酮的含最優(yōu)選提取工藝條 件，如表2所示。
[0081] 表2本發(fā)明最優(yōu)選提取工藝條件
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從桑葉中提取生物堿、多糖和黃酮的方法，包括如下步驟：1)將桑葉粉末在酸 和提取溶劑I的水溶液I中加熱回流、提取至少1次，過濾，收集提取液I和濾渣； 將所述濾渣在堿和提取溶劑II的水溶液II中加熱回流、提取至少1次，過濾，收集提取 液II; 2) 將所述提取液I和所述提取液II分別溶于溶劑、調(diào)節(jié)pH值，放置，然后抽濾，分別收 集提取液III和提取液IV，以及收集得到的沉淀； 3) 將提取液III和提取液IV均除去溶劑，然后分別配成提取液III的水溶液和提取液IV的 水溶液； 4) 向所述提取液III的水溶液中加入陽離子交換樹脂吸附，將吸附后的所述陽離子交換 樹脂依次用水和堿液洗脫，分別收集水相I和堿液相，將所述堿液相除去溶劑，即得到所述 生物堿； 向所述提取液IV的水溶液中加入大孔樹脂吸附，將吸附后的所述大孔樹脂依次用水和 有機(jī)溶劑洗脫，分別收集水相II和有機(jī)相，將所述有機(jī)相除去溶劑，即得到所述黃酮； 將步驟2)中所述沉淀與所述水相I和所述水相II合并，除去水，即得到所述多糖。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟2)中還包括將所述提取液I和所述 提取液II濃縮的步驟。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述提取液I濃縮后的體積為濃縮前體 積的1/10~1/50 ; 所述提取液II濃縮后的體積為濃縮前體積的1/10~1/50。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：所述桑葉粉末為藥桑葉粉 末； 所述桑葉粉末的粒徑為50~200目； 所述桑葉粉末與所述酸和提取溶劑I的水溶液I的質(zhì)量體積比為10~l〇〇g/L ; 在所述酸和提取溶劑I的水溶液I中，所述酸的濃度為〇. 01~〇. 〇3mol/mL，所述酸為 鹽酸、硫酸或硝酸；所述提取溶劑I為乙醇、水或甲醇，所述提取溶劑I的質(zhì)量百分濃度為 50 ~90% ; 在所述酸和提取溶劑I的水溶液I中，提取的溫度為75~85°C，提取的時間為30~ 90min，提取的次數(shù)為2~5次。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：步驟1)中，所述濾渣與所述 堿和提取溶劑II的水溶液II的質(zhì)量比為1 :10~100 ; 所述堿調(diào)節(jié)所述水溶液II的pH值為10~12,所述堿為氫氧化鈣、氫氧化鈉或碳酸鈉； 所述提取溶劑II為乙醇、水或甲醇，所述提取溶劑II的質(zhì)量百分濃度為50~90 % ; 在所述堿和提取溶劑II的水溶液II中，提取的溫度為75~85°C，提取的時間為30~ 90min，提取的次數(shù)為2~5次。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：步驟2)中所述溶劑為乙醇； 所述提取液I與所述溶劑的體積比為1 :1~5,所述提取液II與所述溶劑的體積比為 I : 1 ~5 ; 所述pH值為3~4,所述放置的溫度2~4°C，時間為12~24h。7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：所述提取液III的水溶液的濃 度為0. 2~0. 5g/ml，提取液IV的水溶液的濃度為0. 25~0. 6g/ml ; 步驟3)還包括將所述提取液III除去溶劑后至少進(jìn)行1次萃取的步驟。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：步驟3)中，所述萃取采用水、石油醚和正 丁醇的混合液，收集正丁醇相； 所述萃取進(jìn)行1~5次。9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：步驟4)中，所述陽離子交換 樹脂為732型陽離子交換樹脂、⑶-180型陽離子交換樹脂或D152型大孔弱酸性陽離子交 換樹脂； 所述堿液為氨水水溶液，所述堿液的濃度為〇. 3~0. 6mol/L ; 所述有機(jī)溶劑為乙醇。10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：步驟4)中，所述提取液III 的水溶液、所述陽離子交換樹脂、洗脫所述陽離子交換樹脂的水和所述堿液的質(zhì)量比為1 : 3 ~50 :3 ~1000 :1 ~1000 ; 所述提取液IV的水溶液、所述大孔樹脂、洗脫所述大孔樹脂的水和所述有機(jī)溶劑的質(zhì) 量比為1 :3~50 :3~1000 :1~1000。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種從桑葉中提取生物堿、多糖和黃酮的方法。步驟如下：將桑葉粉末在酸性溶液中提取，收集提取液Ⅰ和濾渣；將濾渣在堿性溶液中提取，收集提取液Ⅱ；將提取液Ⅰ和提取液Ⅱ處理，分離沉淀，并分別收集提取液Ⅲ和提取液Ⅳ，均除溶劑，分別配成水溶液；提取液Ⅲ的水溶液用陽離子交換樹脂吸附，吸附后的陽離子交換樹脂依次用水和堿液洗脫，分別收集水相Ⅰ和堿液相，堿液相除溶劑，即得到生物堿；提取液Ⅳ的水溶液用大孔樹脂吸附，將吸附后的大孔樹脂依次用水和有機(jī)溶劑洗脫，分別收集水相Ⅱ和有機(jī)相，有機(jī)相除溶劑，即得到黃酮；將上述沉淀與水相Ⅰ和水相Ⅱ除去水，即得到多糖。本發(fā)明可節(jié)約原材料，能在同一批桑葉粉末中將生物堿、多糖和黃酮提出來。
【IPC分類】C07G5/00, C07D311/30, C07D211/46, A61K36/605, A61P3/10, C07G99/00, C08B37/00
【公開號】CN104940293
【申請?zhí)枴緾N201510331224
【發(fā)明人】楊玲, 王賀, 張貴會
【申請人】塔里木大學(xué)
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年6月15日