高溫死端抗體過(guò)濾的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及濃縮的含有蛋白的溶液，具體涉及濃縮的含有抗體的溶液，尤其是這些濃縮的含有抗體的溶液的過(guò)濾。
【背景技術(shù)】
[0002]多種含有可注射蛋白的溶液尤其是含有抗體的溶液供應(yīng)到市場(chǎng)上。用那些溶液進(jìn)行皮下注射，導(dǎo)致了由于注射體積的限制而產(chǎn)生的對(duì)溶液中高濃度蛋白的需求。
[0003]尤其對(duì)于高度濃縮的蛋白溶液而言，因?yàn)槿芤赫扯雀?，通過(guò)將溶液泵過(guò)過(guò)濾器諸如0.22 μ的過(guò)濾器進(jìn)行除菌/微生物過(guò)濾可能非常繁瑣或是不可能的，并且可導(dǎo)致非常低的產(chǎn)率和極低的過(guò)濾能力。其還經(jīng)常導(dǎo)致濾液中蛋白含量的降低以及低過(guò)濾能力。結(jié)果是可能需要使用高壓來(lái)保持流動(dòng)。這種高壓向蛋白施加應(yīng)激并可導(dǎo)致更高的雜質(zhì)率。
[0004]大多數(shù)蛋白在高溫下不穩(wěn)定，并因此在高于+30 °C的升高的溫度下可能變性和失去活性。這限制了在過(guò)濾時(shí)使用升高高度濃縮蛋白溶液的溫度來(lái)降低粘度。然而，出乎意料地，抗體似乎在較高的溫度下(高達(dá)50-70 0C )非常穩(wěn)定，使得在較高的溫度下過(guò)濾抗體可行。
[0005]發(fā)明概述
本發(fā)明提供一種高度濃縮的抗體和/或片段溶液過(guò)濾的方法。本發(fā)明還提供一種包含濃度高于100 g/L的抗體或/和其片段的高度濃縮的溶液過(guò)濾的方法，其中所述溶液在過(guò)濾過(guò)程中被加熱到高于30 °0的溫度。
[0006]本發(fā)明還提供一種高度濃縮的抗體溶液過(guò)濾的方法，其中所述抗體或其片段以高于200 g/L的濃度存在，其中所述溶液在過(guò)濾過(guò)程中被加熱到高于30 °C的溫度。本發(fā)明還提供了一種在高度濃縮的抗體溶液過(guò)濾的過(guò)程中增加過(guò)濾產(chǎn)率的方法。本發(fā)明還提供一種在高度濃縮的抗體溶液過(guò)濾的過(guò)程中保持過(guò)濾器流速恒定的方法。此外，本發(fā)明提供一種在高度濃縮的抗體溶液過(guò)濾的過(guò)程中增加過(guò)濾器流速的方法。
【具體實(shí)施方式】
[0007]如上文解釋的，在室溫過(guò)濾高度濃縮的蛋白溶液很慢，可能導(dǎo)致蛋白的低回收或產(chǎn)率，并且還可能顯示濾液中蛋白含量的降低，同時(shí)顯示低的過(guò)濾能力。一種傳統(tǒng)的解決方法是在過(guò)濾過(guò)程中施加高壓以保持流動(dòng)。這種使用高壓向蛋白施加了應(yīng)激，可導(dǎo)致蛋白變性并增加其他產(chǎn)物相關(guān)的雜質(zhì)。
[0008]令人驚訝地發(fā)現(xiàn)抗體在較高的溫度(高于30 °C)下比預(yù)期的更穩(wěn)定，因此可適當(dāng)?shù)卦诒阮A(yù)期更高的溫度下進(jìn)行高度濃縮的抗體溶液的過(guò)濾。這種在升高的溫度下過(guò)濾高度濃縮的抗體溶液顯著提高了過(guò)濾速度和過(guò)濾能力而沒(méi)有蛋白變性。此外，提高了蛋白回收或產(chǎn)率，維持了濾液中的蛋白含量。
[0009]如所證明的，剛好位于過(guò)濾器之前以加熱泵過(guò)過(guò)濾器的溶液的內(nèi)置(inline)換熱器顯著減少了過(guò)濾時(shí)間并增加了過(guò)濾的產(chǎn)率，或者可用其他方式進(jìn)行溶液加熱，即通過(guò)將過(guò)濾器置于適當(dāng)溫度下的烤箱/水浴中。
[0010]如本文所用的術(shù)語(yǔ)“蛋白”、“多肽”和“肽”指由通過(guò)肽鍵連接的至少5個(gè)組分氨基酸組成的化合物。該組分氨基酸可以來(lái)自由遺傳密碼編碼的氨基酸組，它們也可以為不是由遺傳密碼編碼的天然氨基酸，以及合成氨基酸。不是由遺傳密碼編碼的天然氨基酸是例如，羥脯氨酸，y_羧基谷氨酸(y-carboxylglutamate)，鳥(niǎo)氨酸，磷酸絲氨酸，D-丙氨酸和D-谷氨酰胺。合成氨基酸包括通過(guò)化學(xué)合成制備的氨基酸，即遺傳密碼編碼的氨基酸的D-異構(gòu)體，諸如D-丙氨酸和D-亮氨酸，Aib (a-氨基異丁酸)，Abu (α-氨基丁酸)，Tle(叔丁基甘氨酸)，β -丙氨酸，3-氨基甲基苯甲酸和鄰氨基苯甲酸。
[0011]術(shù)語(yǔ)“抗體”涵蓋了單克隆抗體(包括具有免疫球蛋白Fe區(qū)的全長(zhǎng)抗體)，具有多表位特異性的抗體組合物，雙特異性抗體，雙體，和單鏈分子，以及抗體片段(例如，F(xiàn)ab,F(ab’)2，和 Fv)。
[0012]如本文所用的術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”指從實(shí)質(zhì)上均質(zhì)的抗體群獲得的抗體，S卩，除了可少量存在的可能的天然發(fā)生的突變之外，組成該群體的個(gè)體抗體是相同的。單克隆抗體是高度特異性的，針對(duì)單個(gè)抗原位點(diǎn)。此外，與通常包括針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的傳統(tǒng)(多克隆)抗體制備物相反，各單克隆抗體針對(duì)抗原上的單個(gè)決定簇。除了它們的特異性之外，單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)還在于它們是通過(guò)雜交瘤培養(yǎng)而合成的，未被其他免疫球蛋白污染。修飾語(yǔ)“單克隆”表明抗體的特征是從實(shí)質(zhì)上均質(zhì)的抗體群獲得的，不解釋為需要通過(guò)任何特定的方法來(lái)生產(chǎn)抗體。例如，根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過(guò)由Kohler等人，Nature, 256: 495 (1975)首先描述的雜交瘤方法制備，或可通過(guò)重組DNA方法制備(參見(jiàn)，例如美國(guó)專利N0.4，816，567)。“單克隆抗體”還可用例如Clackson等人，Nature, 352: 624-628 (1991)和 Marks 等人，J.Mol.B1l., 222: 581-597 (1991)所述的技術(shù)從噬菌體抗體文庫(kù)分離。
[0013]本文的單克隆抗體可擴(kuò)展到包括“嵌合”抗體(免疫球蛋白)，在所述“嵌合”抗體中，重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源或?qū)儆谔囟ǖ目贵w類別或亞類，而所述鏈的剩余部分與衍生自另一個(gè)物種的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源或?qū)儆诹硪粋€(gè)抗體類別或亞類；以及這種抗體的片段，只要它們顯示出所需的生物學(xué)活性(美國(guó)專利 N0.4,816, 567; Morrison 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 81:6851-6855 (1984))。
[0014]可配制在本發(fā)明穩(wěn)定組合物中的合適抗體的例子包括:3F8、阿巴伏單抗(Abagovomab)、阿昔單抗(Abciximab)、ACZ885 (卡那單抗(canakinumab))、阿達(dá)木單抗(Adalimumab)、阿德木單抗(Adecatumumab)、阿非莫單抗(Afelimomab)、阿福圖珠單抗(Afutuzumab)、培化阿珠單抗(Alacizumab pegol)、阿侖單抗(Alemtuzumab)、噴替酸阿妥莫單抗(AItumomab pentetate)、馬安那莫單抗(Anatumomab mafenatox)、安蘆珠單抗(Anrukinzumab) (IMA-638)、阿泊珠單抗(Apolizumab)、阿西莫單抗(Arcitumomab)、阿塞珠單抗(Aselizumab)、阿利珠單抗(Atlizumab)(托珠單抗(tocilizumab))、阿托木單抗(Atorolimumab)、巴匹珠單抗(Bapineuzumab)、巴利昔單抗(Basiliximab)、巴土昔單抗(Bavituximab)、貝妥莫單抗(Bectumomab)、貝利木單抗(Belimumab)、柏替莫單抗(Bertilimumab)、貝索單抗(Besilesomab)、貝伐單抗(Bevacizumab)、比西單抗(Biciromab)、比伐單抗美登素(Bivatuzumab mertansine)、蘭妥莫單抗(Blinatumomab)、布仁妥昔單抗維度丁(Brentuximab vedotin)、布奇努單抗(Briakinumab)、卡那單抗(Canakinumab)、莫坎妥珠單抗美登素(Cantuzumab mertansine)、卡羅單抗噴地肽(Capromab pendetide)、卡妥索單抗(Catumaxomab)、西利珠單抗(Cedelizumab)、賽妥珠單抗(Certolizumab pegol)、西妥昔單抗(Cetuximab)、泊西他珠單抗(Citatuzumabbogatox)、西妥木單抗(Cixutumumab)、克立昔單抗(Clenoliximab)、克利伐珠單抗(Clivatuzumab tetraxetan)、CNT0148 (戈利木單抗(golimumab))、CNTO 1275 (優(yōu)特克單抗(ustekinumab))、可那木單抗(Conatumumab)、達(dá)西珠單抗(Dacetuzumab)、達(dá)克珠單抗(Daclizumab)、地舒單抗(Denosumab)、地莫單抗(Detumomab)、阿托度單抗(Dorlimomab aritox)、多利昔珠單抗(Dorlixizumab)、依美昔單抗(Ecromeximab)、依庫(kù)珠單抗(Eculizumab)、埃巴單抗(Edobacomab)、依決洛單抗(Edrecolomab)、依法珠單抗(Efalizumab)、依夫單抗(Efungumab)、艾西莫單抗(Elsilimomab)、培戈賴莫單抗(Enlimomab pegol)、西依匹莫單抗(Epitumomab cituxetan)、依帕珠單抗(Epratuzumab)、厄利珠單抗(Erl izumab)、厄馬索單抗(Ertumaxomab)、埃達(dá)珠單抗(Etaracizumab)、艾韋單抗(Exbivirumab)、法索單抗(Fanolesomab)、法拉莫單抗(Faralimomab)、非維珠單抗(Felvizumab)、非扎奴單抗(Fezakinumab)、芬妥木單抗(Figitumumab)、芳妥珠單抗(Fontolizumab)、福拉韋單抗(Foravirumab)、夫蘇木單抗(Fresolimumab)、加利昔單抗(Galiximab)、甘藤如單抗(Gantenerumab)、加維莫單抗(Gavilimomab)、吉妥珠單抗奧佐米星(Gemtuzumab ozogamicin)、戈利木單抗(Golimumab)、戈利昔單抗(Gomiliximab)、伊巴珠單抗(Ibalizumab)、替伊莫單抗(Ibritumomab tiuxetan)、伊戈伏單抗(Igovomab)、英西單抗(Imciromab)、英利昔單抗(Infliximab)、英妥木單抗(Intetumumab)、伊諾莫單抗(Inolimomab)、伊珠單抗奧佐米星(Inotuzumab ozogamicin)、伊匹木單抗(Ipilimumab)、伊妥木單抗(Iratumumab)、凱利昔單抗(Keliximab)、拉貝珠單抗(Labetuzumab)、來(lái)金珠單抗(Lebrikizumab)、來(lái)馬索單抗(Lemalesomab)、樂(lè)地單抗(Lerdelimumab)、來(lái)沙木單抗(Lexatumumab)、利韋單抗(Libivirumab)、林妥珠單抗(Lintuzumab)、魯卡木單抗(Lucatumumab)、魯昔單抗(Lumiliximab)、馬帕木單抗(Mapatumumab)、馬司莫單抗(Maslimomab)、馬妥珠單抗(Matuzumab)、美泊利單抗(Mepolizumab)、美替木單抗(Metelimumab)、米拉珠單抗(Milatuzumab)、明瑞莫單抗(Minretumomab)、米妥莫單抗(Mitumomab)、莫羅木單抗(Morolimumab)、莫他珠單抗(Motavizumab)、莫羅單抗-CD3 (Muromonab_CD3)、MY0-029 (司他莫單抗(stamulumab))、他那可單抗(Nacolomab tafenatox)、他那莫單抗(Naptumomab estafenatox)、那他珠單抗(Natalizumab)、奈巴庫(kù)單抗(Nebacumab)、奈昔木單抗(Necitumumab)、奈瑞莫單抗(Nerelimomab)、尼妥珠單抗(Nimotuzumab)、疏諾莫單抗(Nofetumomab merpentan)、奧瑞珠單抗(Ocrelizumab)、奧度莫單抗(Odulimomab)、奧法木單抗(Ofatumumab)、奧馬珠單抗(Omalizumab)、莫奧珠單抗(Oportuzum