的濃度?？梢酝ㄟ^(guò)使用本領(lǐng)域 已知的方法測(cè)定Ki。本公開因此考慮抵消直接FXa抑制劑，其以下述Ki結(jié)合不含凝血酶原 酶復(fù)合物的FXa變體：約2xKT 8M或更少、約lxKT8M或更少、約9xKT9M或更少、約8xKT9M或 更少、約7x1 (T9M或更少、約6x1 (T9M或更少、約5x1 (T9M或更少、約4x1 (T9M或更少、約3x1 (T9M 或更少、約2χ10-9Μ或更少、約IxKT9M或更少、約9x104°]?或更少、約SxKT kiM或更少、約 7x1 (TwM或更少、約6x1 (TwM或更少、約5x1 (TkiM或更少、約4x1 (TwM或更少、約3x1 (TkiM或更 少、約2xKr1QM或更少、約IxKTiqM或更少、約9xl(T nM或更少、約8xl(TnM或更少、約7xl(TnM 或更少、約6xl(TnM或更少、約5xl(TnM或更少、約4xl(TnM或更少、約3xl(T nM或更少、約 2χ10_ηΜ或更少、約IxKT11M或更少、約9χ10_ 12Μ或更少、約8χ10_12Μ或更少、約7χ10_12Μ或更 少、約6χ10- 12Μ或更少、約5χ10-12Μ或更少、約4χ10-12Μ或更少、約3χ10- 12Μ或更少、約2χ10-12Μ 或更少、或約IxKT12M或更少。根據(jù)本公開的方法待由FXa變體抵消的直接FXa抑制劑可以 與野生型FXa結(jié)合，其K i比它結(jié)合FXa變體小至少1. 5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、 至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、 或至少50倍。直接FXa抑制劑可以結(jié)合野生型FXa，其K i比不含凝血酶原酶復(fù)合物的FXa 變體的Ki小至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、 至少90%、至少95%、或至少99%。直接FXa抑制劑可以結(jié)合包含野生型FXa的凝血酶原 酶復(fù)合物，其K i與它結(jié)合包含F(xiàn)Xa變體的凝血酶原酶復(fù)合物大約相同。
[0053] 在一個(gè)方面，本公開提供了通過(guò)施用FXa變體抵消對(duì)象中的直接FXa抑制劑效應(yīng) 的方法，所述對(duì)象正在出血（內(nèi)部或外部）或處于出血的危險(xiǎn)中（例如在計(jì)劃手術(shù)的過(guò)程 中）。在一些實(shí)施方案中，直接FXa抑制劑可以以治療濃度或更高濃度（即，超治療濃度） 存在于對(duì)象中。在一些實(shí)施方案中，治療濃度可以是敏感個(gè)體中的藥物過(guò)量。本公開的方 法因此可用于提供對(duì)直接FXa抑制劑的藥物過(guò)量的解毒藥。在多個(gè)實(shí)施方案中，治療對(duì)象 可以是人或獸醫(yī)對(duì)象。
[0054] 基于過(guò)度降低的凝血能力的癥狀或體征的存在，可以檢測(cè)直接抑制劑藥物過(guò)量。 非限制性例子包括胃腸道出血的證據(jù)，包括黑柏油樣便、血便和嘔血。其他例子包括鼻出 血，以及對(duì)來(lái)自微小切口和擦傷的瘀血或出血的趨勢(shì)或嚴(yán)重性增加。
[0055] 在臨床背景下，直接抑制劑藥物過(guò)量可以直接地或通過(guò)下述進(jìn)行檢測(cè)：測(cè)量對(duì)象 血液凝固的能力，且檢測(cè)與預(yù)期抗凝程度的偏差。血液凝固潛力可以以本領(lǐng)域普通技術(shù)人 員熟悉的方式進(jìn)行測(cè)量。例如，當(dāng)對(duì)象的凝血酶原時(shí)間過(guò)度延長(zhǎng)時(shí)，可以懷疑藥物過(guò)量。在 某些實(shí)施方案中，當(dāng)表示為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比率（INR)的凝血酶原時(shí)間測(cè)量為大于約1.0、1. 5、 2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0、4. 5、5. 0、5. 5、6. 0、6. 5、7. 0、7. 5、8. 0、8. 5、9. 0、9. 5、10、12、14、16、 18、20或更大時(shí)，證實(shí)藥物過(guò)量。
[0056] 每當(dāng)需要抵消直接FXa抑制劑的效應(yīng)時(shí)，包括但不限于在計(jì)劃手術(shù)前、導(dǎo)致外部 或內(nèi)部出血的損傷后或者直接FXa抑制劑藥物過(guò)量后，可以施用FXa變體。根據(jù)本公開，當(dāng) 需要抵消效應(yīng)時(shí)，例如在計(jì)劃手術(shù)前、導(dǎo)致外部或內(nèi)部出血的損傷后或者直接FXa抑制劑 藥物過(guò)量后，F(xiàn)Xa變體可以施用至少約12小時(shí)、至少約6小時(shí)、至少約3小時(shí)、至少約2小 時(shí)、至少約1小時(shí)、至少約30分鐘、至少約10分鐘、或至少約5分鐘。
[0057] 根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本公開提供了施用FXa變體以實(shí)現(xiàn)患有急性大出血的對(duì)象 中由于FXa抑制療法的獲得性凝血病的緊急逆轉(zhuǎn)的方法。在一些實(shí)施方案中，對(duì)象是成人 患者。在其他實(shí)施方案中，對(duì)象是兒科人患者。
[0058] 在一些實(shí)施方案中，急性大出血由創(chuàng)傷引起。在其他實(shí)施方案中，急性大出血在手 術(shù)或其他類型的干預(yù)操作期間發(fā)生。示例性非限制性干預(yù)操作包括切口、引流、血管手術(shù)、 闌尾切除術(shù)、疝切開術(shù)或疝修補(bǔ)術(shù)、腹部手術(shù)、膽囊切除術(shù)、環(huán)鉆術(shù)（鉆孔）、腰椎穿刺、心臟 起搏器插入、髖部骨折手術(shù)及其他。在另外其他實(shí)施方案中，急性大出血可以是沒有明顯原 因的自發(fā)性出血。
[0059] 無(wú)限制地，急性大出血的部位包括胃腸道出血、皮下或肌內(nèi)出血、膀胱出血、關(guān)節(jié) 積血、硬膜下血腫、鼻出血、腹膜出血、子宮出血及其他部位的出血。
[0060] 用本公開的FXa變體的有效治療可以逆轉(zhuǎn)直接FXa抑制劑的效應(yīng)。此類效應(yīng)通過(guò) FXa變體的成功逆轉(zhuǎn)可以以多種方式進(jìn)行測(cè)定，并且可以使用不同測(cè)定、方法或終末點(diǎn)進(jìn)行 測(cè)量或監(jiān)控。
[0061] 在一些實(shí)施方案中，使用對(duì)來(lái)自用FXa變體治療的對(duì)象的血液或血漿進(jìn)行的測(cè)試 或測(cè)定，監(jiān)控用FXa變體治療逆轉(zhuǎn)直接FXa抑制劑的效應(yīng)。血樣可以在用FXa變體治療后 的預(yù)定時(shí)間取自對(duì)象。隨后對(duì)由其制備的血液或血漿實(shí)施一種或多種測(cè)試，以測(cè)定某些止 血藥效學(xué)參數(shù)是否已正?；M管存在直接FXa抑制劑。如果發(fā)現(xiàn)正?；?，則對(duì)象無(wú)需進(jìn)一 步用FXa變體治療。然而，如果未發(fā)現(xiàn)正?；瑒t可能需要依照本公開的方法用FXa變體的 進(jìn)一步治療，以逆轉(zhuǎn)直接FXa抑制劑的效應(yīng)。用于監(jiān)控用FXa變體治療的有效性的測(cè)試包 括這樣的測(cè)試，其直接或間接測(cè)量凝血的能力或者測(cè)量直接FXa抑制劑的活性。非限制性 示例性測(cè)試包括凝血酶原時(shí)間或相關(guān)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比率、凝血酶原酶誘導(dǎo)的凝血時(shí)間測(cè)定、 血栓彈力描記術(shù)（thromboelastometry)、血栓彈力圖、生色抗FXa測(cè)定、凝血酶生成測(cè)定、 凝血酶原片段1+2水平、凝血酶-抗凝血酶III復(fù)合物水平、活化部分凝血活酶時(shí)間和部分 凝血活酶時(shí)間。其他測(cè)試在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的知識(shí)內(nèi)也是可能的。
[0062] 根據(jù)一些實(shí)施方案，通過(guò)施用FXa變體逆轉(zhuǎn)對(duì)象中的直接FXa抑制劑的效應(yīng)降低 對(duì)象中的出血。在一些實(shí)施方案中，與不存在用FXa變體治療相比較，在直接FXa抑制劑 的存在下，用FXa變體治療使對(duì)象中的出血降低至少10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、 70%、80%、90%、95%或99%。在其他實(shí)施方案中，用FXa變體治療使對(duì)象中的出血降低 約 5% -10%、10% -15%、15% -20%、20% -25%、25% -30%、30% -35%、35% -40%、 40 % -45 %,45 % -50 %,50 % -55 %,55 % -60 %,60 % -65 %,65 % -70 %,70 % -75 %, 75% -80%、80% -85%、85% _90%、90% -95%、或 95% -100%。
[0063] 根據(jù)一些實(shí)施方案，通過(guò)施用FXa變體逆轉(zhuǎn)對(duì)象中的直接FXa抑制劑的效應(yīng)降低 對(duì)象中的直接FXa抑制劑的活性。在一些實(shí)施方案中，與不存在用FXa變體治療相比較， 在直接FXa抑制劑的存在下，用FXa變體治療使對(duì)象中的直接FXa抑制劑的活性降低至少 10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、95 % 或 99 %。在其他實(shí)施方案中，用 FXa變體治療使對(duì)象中的直接FXa抑制劑的活性降低約5 % -10 %、10 % -15 %、15 % -20 %、 20 % -25 %,25 % -30 %,30 % -35 %,35 % -40 %,40 % -45 %,45 % -50 %,50 % -55 %, 55 % -60 %,60 % -65 %,65 % -70 %,70 % -75 %,75 % -80 %,80 % -85 %,85 % -90 %, 90% -95%、或 95% -100%。
[0064] 使用生色抗 FXa 測(cè)定，例如 Asmis 等人，Thromb Res.，129:492-498(2012)，或 Barrett等人，Thromb Haemost. 104:1263-71 (2010)中所述的那種（所述參考文獻(xiàn)各自援 引加入本文），可以監(jiān)控直接FXa抑制劑的活性。
[0065] 根據(jù)一些實(shí)施方案，通過(guò)施用FXa變體逆轉(zhuǎn)對(duì)象中的直接FXa抑制劑的效應(yīng)增加 對(duì)象的血液或血漿中產(chǎn)生的凝血酶量。在一些實(shí)施方案中，與不存在FXa變體的情況相比 較，在直接FXa抑制劑的存在下，用FXa變體治療使對(duì)象中的凝血酶生產(chǎn)增加至少10%、 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、100%、1· 5 倍、2 倍、3 倍、4 倍、5 倍、6 倍、7倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、至少50倍或更多。使用凝血酶生成測(cè)定（TGA)或 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟悉的其他技術(shù)，可以測(cè)定對(duì)象的血液或血漿中的凝血酶產(chǎn)生。
[0066] 根據(jù)一些實(shí)施方案，通過(guò)施用FXa變體逆轉(zhuǎn)對(duì)象中的直接FXa抑制劑的效應(yīng)增加 對(duì)象的凝血。在一些實(shí)施方案中，與不存在FXa變體的情況相比較，在直接FXa抑制劑的存 在下，用FXa變體治療使對(duì)象中的凝血增加至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、 80%、90%、95%、100%、1. 5 倍、2 倍、3 倍、4 倍、5 倍、6 倍、7 倍、10 倍、15 倍、20 倍、25 倍、30 倍、至少50倍或更多。
[0067] 根據(jù)一些實(shí)施方案，通過(guò)施用FXa變體逆轉(zhuǎn)對(duì)象中的直接FXa抑制劑的效應(yīng)降低 對(duì)象中的凝血時(shí)間。在一些實(shí)施方案中，與不存在用FXa變體治療相比較，在直接FXa抑制 劑的存在下，用FXa變體治療使對(duì)象中的凝血時(shí)間降低至少10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60 %、70 %、80 %、90 %、95 %或99 %。在其他實(shí)施方案中，用FXa變體治療使對(duì)象中的凝 血時(shí)間降低約 5% -10 %、10 % -15 %、15 % -20 %、20 % -25 %、25 % -30 %、30 % -35%、 35 % -40 %,40 % -45 %,45 % -50 %,50 % -55 %,55 % -60 %,60 % -65 %,65 % -70 %, 70% -75%、75% -80%、80% -85%、85% _90%、90% -95%、或 95% -100%。
[0068] 根據(jù)一些實(shí)施方案，凝血時(shí)間通過(guò)測(cè)量對(duì)象的凝血酶原時(shí)間（PT)進(jìn)行測(cè)定，所述 凝血酶原時(shí)間隨著止血恢復(fù)而減少。PT是在添加組織因子后血清凝固花費(fèi)的時(shí)間量。PT 因此測(cè)量外源凝血系統(tǒng)支持凝血的能力。PT可以取決于實(shí)驗(yàn)室用于運(yùn)行測(cè)試的特定試劑， 但正常PT為約11至13秒。凝血時(shí)間還可以使用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比率（INR)進(jìn)行表示，所述國(guó) 際標(biāo)準(zhǔn)化比率消除在凝血時(shí)間測(cè)量中的實(shí)驗(yàn)室間可變性。使用INR，0. 8至I. 1的比率指示 正常凝血。在FXa變體施用于需要逆轉(zhuǎn)直接FXa抑制劑的效應(yīng)的對(duì)象后，PT或INR可以在 預(yù)定時(shí)間進(jìn)行測(cè)定。
[0069] 在一些實(shí)施方案中，用FXa變體治療以逆轉(zhuǎn)直接FXa抑制劑的效應(yīng)使對(duì)象的PT降 低約25秒、24秒、23秒、22秒、21秒、20秒、19秒、18秒、17秒、16秒、15秒、14秒、13秒、12 秒、11秒、10秒或更少。在其他實(shí)施方案中，用FXa變體治療使對(duì)象的INR降低至約4. 0、 3· 9、3· 8、3· 7、3· 6、3· 5、3· 4、3· 3、3· 2、3· 1、3· 0、2· 9、2· 8、2· 7、2· 6、2· 5、2· 4、2· 3、2· 2、2· 1、 2· 0、1· 9、1· 8、1· 7、1· 6、1· 5、1· 4、1· 3、1· 2、1· 1、1· 0、0· 9、0· 8、0· 7 或更少。根據(jù)其他實(shí)施 方案，用FXa變體治療使對(duì)象中的PT或INR降低約5% -10%、10 % -15%、15 % -20%、 20 % -25 %,25 % -30 %,30 % -35 %,35 % -40 %,40 % -45 %,45 % -50 %,50 % -55 %, 55 % -60 %,60 % -65 %,65 % -70 %,70 % -75 %,75 % -80 %,80 % -85 %,85 % -90 %, 90% -95%、或 95% -100%。
[0070] 凝血酶原時(shí)間可以在FXa變體施用后的預(yù)定時(shí)間進(jìn)行測(cè)量。因此，在一些非限制 性實(shí)施方案中，PT在FXa施用后15分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、45分鐘、50分鐘、60分 鐘或更久進(jìn)行測(cè)量。其他時(shí)間根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的知識(shí)也是可能的。
[0071] 凝血時(shí)間還可以使用一步凝血酶原酶誘導(dǎo)的凝血時(shí)間（PiCT)測(cè)定進(jìn)行測(cè) 量， 如 Graff 等人，Monitoring effects of direct FXa-inhibitors with a new one-step prothrombinase-induced clotting time (PiCT) assay: comparative in vitro investigation with heparin， enoxaparin, fondaparinux and DX 9065a， Int J Clin Pharmacol Ther.，45:237_43(2007)和 Harder 等人，Monitoring direct FXa-inhibitors and fondaparinux by prothrombinase-induced Clotting Time (PiCT)!relation to FXa-activity and influence of assay modifications,Thromb Res.，123:396-403(2008)中所述，所述參考文獻(xiàn)各自援引加入本文。
[0072] 在另外其他實(shí)施方案中，血栓彈力描記術(shù)或血栓彈力圖方法可以用于分析血塊形 成或凝血時(shí)間。
[0073] 根據(jù)一些實(shí)施方案，通過(guò)施用FXa變體逆轉(zhuǎn)對(duì)象中的直接FXa抑制劑的效應(yīng)增加 對(duì)象的血液或血漿中的凝血酶原片段1 □ + □ 2(PF1 □ + □ 2)水平。在一些實(shí)施方案中， 與不存在FXa變體的情況相比較，在直接FXa抑制劑的存在下，用FXa變體治療使對(duì)象中的 P