治療劑是有效的，此 外，還確認(rèn)到馬基莓萃取物即使與其他成分相比，也具有優(yōu)異的干眼癥預(yù)防、治療效果。另 外，圖5中，"1"、"3"、"10"分別表示植物萃取物的添加量以8/!^，"馬基莓"是實施例1中 的馬基莓提取物。 另外，如圖6所示，關(guān)于Fr. 1:花翠素-3-桑布雙糖苷-5-葡糖苷（實施例2)Fr. 2:花 翠素-3, 5-二葡糖苷（實施例3)，F(xiàn)r. 5:花翠素-3-桑布雙糖苷（實施例4)及Fr. 6:花翠 素-3-葡糖苷（實施例5)的各成分，確認(rèn)了顯著抑制活性氧。由此確認(rèn)了馬基莓提取物中 含有的上述成分是與干眼癥預(yù)防/治療效果有關(guān)的成分。
[試驗例3 :使用小鼠摘出淚腺進(jìn)行的馬基莓萃取物的活性氧種抑制作用的評價2] (3 - 1)試驗條件 進(jìn)一步地，對于Fr. 2:花翠素-3, 5-二葡糖苷（實施例3)及Fr. 6:花翠素-3-葡糖苷 (實施例5)和花翠素-3-蕓香糖苷（黑醋栗中含有的成分，比較例1)，進(jìn)行了與試驗例2 同樣的評價。其結(jié)果示于圖12。 另外，對于Fr. 6:花翠素-3-葡糖苷（實施例5)和其他的花色素苷類（矮牽牛素-3-葡 糖苷、芍藥素-3-葡糖苷、氯化錦葵色素（Malvidin)-3-葡糖苷、矢車菊素-3-葡糖苷），也 進(jìn)行了與試驗例2同樣的評價。其結(jié)果示于圖13。 (3 - 2)結(jié)果及實施例在試驗例3中的效果 如圖12所示，花翠素-3-蕓香糖苷（比較例1)不抑制活性氧，F(xiàn)r. 2:花翠素-3, 5-二 葡糖苷（實施例3)及Fr. 6:花翠素-3-葡糖苷（實施例5)抑制活性氧，尤其是，作為馬基 莓固有成分的Fr.2:花翠素-3, 5-二葡糖苷（實施例3)顯示了優(yōu)異的抑制活性氧的作用。 由此確認(rèn)，與其他花翠素糖苷相比，作為馬基莓中含有的固有成分的Fr. 2:花翠 素-3, 5-二葡糖苷（實施例3)具有特別優(yōu)異的干眼癥預(yù)防/治療效果。 另外，如圖13所示，與其他花色素苷相比，作為馬基莓固有成分的Fr. 2:花翠 素-3, 5-二葡糖苷（實施例3)顯示了特別優(yōu)異的抑制淚腺細(xì)胞中的活性氧的作用。由此 確認(rèn)了馬基莓中含有的花色素苷具有更優(yōu)異的干眼癥預(yù)防/治療作用。
[試驗例4 :含有馬基莓提取物的成分在淚腺細(xì)胞中的吸收試驗] (4 一 1)試驗的目的 通過試驗例1，確認(rèn)了馬基莓提取物的干眼癥抑制作用。另外，與越橘及黑醋栗相比，顯 示了更強的作用。此外，在成分中，馬基莓特有的花色素苷即花翠素-3, 5-二葡糖苷（實施 例3)與其他的花色素苷即花翠素-3-葡糖苷（越橘的主要花色素苷）及花翠素-3-蕓香 糖苷（黑醋栗的主要花色素苷：比較例1)相比，顯示了更強的作用。本試驗中，為了弄清上 述作用機制，使用HPLC比較了淚腺細(xì)胞中的花色素苷的吸收量。 (4 一 2)試驗條件 試驗方法如下所述地進(jìn)行。向淚腺細(xì)胞懸浮液中，添加各種花色素苷（花翠素-3, 5-二 葡糖苷、花翠素-3-0-葡糖苷及花翠素-3-0-蕓香糖苷），使終濃度成為ΙΟΟηΜ。 然后，在37°C下孵育30分鐘，然后洗滌細(xì)胞，然后再懸浮于緩沖液（buffer)中，利用 HPLC分析花色素苷含量。分析條件如下所述。 分析流程 細(xì)胞懸浮液50 μ L I 添加 50 μ L(0. 2% TFA-40% MeOH) 用注射器式濾器（syringe filter)進(jìn)行過濾 I HPLC分析 HPLC條件如下所示。 柱：YMC UltraHT Pro C18 φ2.0 x 100 mm 柱溫：30°C 洗脫液:A = 0. 3% TFA水溶液，B =乙腈 梯度：5 % B(0min)-5 % B(0.60min)-13 % B(0.61min)-15 % B(3.00min)-26 % B (6. 00min)-90% B (6. 20min)-90% B (7. 20min)-5% B (7. 40min)-5% B (9. 50min) 流速：〇. 3mL/min、注入量：50 μ L 定量極限：2ng/mL (矢車菊素-3-〇-葡糖苷） 參考文獻(xiàn)：Exp. Eye Res, 83, 348 (2006) J Agric. Food Chem, 49, 1546(2001) (4 一 3)結(jié)果及實施例在試驗例4中的效果 向淚腺細(xì)胞中吸收的試驗結(jié)果示于圖14。 淚腺細(xì)胞對各種花色素苷的吸收量（Mean土SE, η = 6,花翠素-3, 5-二葡糖苷、D3G5G ; 花翠素-3-葡糖苷、D3G ;花翠素-3-蕓香糖苷、D3R)進(jìn)行比較，結(jié)果可知，作為馬基莓特 有成分的花翠素-3, 5-二葡糖苷（D3G5G)與花翠素-3-葡糖苷（D3G;越橘成分）及花翠 素-3-蕓香糖苷（D3R;黑醋栗成分）相比，被更多地吸收到細(xì)胞內(nèi)。由此可知，對于馬基莓 提取物而言，根據(jù)向淚腺細(xì)胞中吸收的機制，容易蓄積到該細(xì)胞中，與其他花色素苷原料相 比，針對干眼癥有效發(fā)揮作用。 給出本發(fā)明的干眼癥預(yù)防/治療劑的配合例。另外，以下的配合例不限定本發(fā)明。 配合例1 : 口香糖
配合例4 :酸奶（硬、軟）
配合例8 :片劑
工業(yè)實用性 由以上內(nèi)容可知，本發(fā)明可提供以作為食材安全的馬基莓為原料、新成分的干眼癥預(yù) 防/治療劑、防止淚腺分泌能力降低的抑制劑、及抑制淚腺組織中的活性氧生成的抑制劑。
【主權(quán)項】
1. 干眼癥預(yù)防/治療劑，其含有馬基莓萃取物作為有效成分。2. 干眼癥預(yù)防/治療劑，其含有從馬基莓中萃取的花翠素糖苷作為有效成分。3. 干眼癥預(yù)防/治療劑，其含有花翠素-3-桑布雙糖苷-5-葡糖苷、花翠素-3, 5-二葡 糖苷、花翠素-3-桑布雙糖苷及花翠素-3-葡糖苷中的至少一種作為有效成分。4. 干眼癥預(yù)防/治療劑，其含有花翠素-3, 5-二葡糖苷作為有效成分。5. 干眼癥預(yù)防/治療劑，其含有包含花翠素-3, 5-二葡糖苷的馬基莓萃取物作為有效 成分。6. 抑制淚液分泌能力降低的抑制劑，其含有馬基莓萃取物作為有效成分。7. 抑制淚液分泌能力降低的抑制劑，其含有從馬基莓中萃取的花翠素糖苷作為有效成 分。8. 抑制淚液分泌能力降低的抑制劑，其含有花翠素-3-桑布雙糖苷-5-葡糖苷、花翠 素-3, 5-二葡糖苷、花翠素-3-桑布雙糖苷及花翠素-3-葡糖苷作為有效成分。9. 抑制淚液分泌能力降低的抑制劑，其含有包含花翠素_3, 5-二葡糖苷的馬基莓萃取 物作為有效成分。10. 抑制淚腺組織中的活性氧生成的抑制劑，其含有馬基莓萃取物作為有效成分。11. 抑制淚腺組織中的活性氧生成的抑制劑，其含有從馬基莓中萃取的花翠素 (Delphinidin)糖苷作為有效成分。12. 抑制淚腺組織中的活性氧生成的抑制劑，其含有花翠素-3-桑布雙糖苷-5-葡糖 苷、花翠素-3, 5-二葡糖苷、花翠素-3-桑布雙糖苷及花翠素-3-葡糖苷中的至少一種作為 有效成分。13. 抑制淚腺組織中的活性氧生成的抑制劑，其含有花翠素-3, 5-二葡糖苷作為有效 成分。14. 抑制淚腺組織中的活性氧生成的抑制劑，其含有包含花翠素-3, 5-二葡糖苷的馬 基莓萃取物作為有效成分。
【專利摘要】提供一種抑制淚液分泌能力降低、還抑制在淚腺組織中生成活性氧的新成分的干眼預(yù)防治療劑。本發(fā)明的干眼預(yù)防治療劑含有馬基莓萃取物作為有效成分。本發(fā)明的干眼預(yù)防治療劑含有從馬基莓中萃取的花翠素糖苷作為有效成分。而且本發(fā)明的干眼預(yù)防治療劑含有花翠素-3-桑布雙糖苷-5-葡糖苷、花翠素-3,5-二葡糖苷、花翠素-3-桑布雙糖苷及花翠素-3-葡糖苷中的至少一種、優(yōu)選的是含有花翠素-3,5-二葡糖苷作為有效成分。
【IPC分類】A61P27/02, A61K36/00, A61K31/353, A61K36/18, A23L1/30, A61P39/06
【公開號】CN105007927
【申請?zhí)枴緾N201380066314
【發(fā)明人】坪田一男, 中村滋, 今田敏博, 田中潤司, 嘉手苅崇, 下田博司, 村井弘道
【申請人】奧力榨油化株式會社, 學(xué)校法人慶應(yīng)義塾
【公開日】2015年10月28日
【申請日】2013年12月17日
【公告號】CA2895353A1, EP2937091A1, US20150359812, WO2014098092A1